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胃肠病学 2008年第10期13卷 591-594页

作者：曹海霞诸琦姚玮艳章永平黄佳贲其稳高亚博王华枫上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科 200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科 200025

背景:人类真核翻译延伸因子1a2(EEF1a2)是一种管家基因,可能作为一种新的潜在癌基因,参与肿瘤的发生、发展。目的:探讨EEF1a2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成的作用。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段,应用基因重组技术构... 详细信息

背景:人类真核翻译延伸因子1a2(EEF1a2)是一种管家基因,可能作为一种新的潜在癌基因,参与肿瘤的发生、发展。目的:探讨EEF1a2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成的作用。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段,应用基因重组技术构建Ad5/F35-EEF1a2重组腺病毒载体。15只裸鼠建立人胰腺癌移植瘤模型,随机分为对照组、绿色荧光蛋白(GFP)组和EEF1a2组,分别注射PBS0.1ml、Ad5/F35-GFP0.1ml(1×108PFU)和Ad5/F35-EEF1a20.1ml(1×108PFU)。测定各组肿瘤体积和质量,应用免疫组化方法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)和CD31的表达。结果:成功构建了表达EEF1a2的重组腺病毒载体。与对照组和GFP组相比,EEF1a2组裸鼠肿瘤体积和质量显著增加(P1a2可显著促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长,细胞增殖和肿瘤血管形成可能是其重要作用机制。

关键词：真核翻译延长因子1a2 胰腺肿瘤细胞增殖血管形成

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eEF1a2在原发性肝细胞癌的表达

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中国病理生理杂志 2015年第12期31卷 2144-2150页

作者：黄毅邱福南陈敦雁伍严安李峰黄肖利吴文冰福建医科大学省立临床医学院检验科福建福州350001 福建医科大学省立临床医学院肝胆外科福建福州350001 福建医科大学省立临床医学院病理科福建福州350001

目的:研究真核翻译延长因子1a2(e EF1a2)在原发性肝细胞癌(HCC)组织的表达,以及e EF1a2过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法:应用real-time PCR法和免疫组化法分别检测62例HCC癌组织与配对癌旁组织、20例正常肝脏组织e EF1a2的mRNA... 详细信息

目的:研究真核翻译延长因子1a2(e EF1a2)在原发性肝细胞癌(HCC)组织的表达,以及e EF1a2过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法:应用real-time PCR法和免疫组化法分别检测62例HCC癌组织与配对癌旁组织、20例正常肝脏组织e EF1a2的mRNA和蛋白表达,应用real-time PCR法与Western blot法分别检测几种HCC细胞株e EF1a2的mRNA与蛋白表达。构建GV287-e EF1a2表达慢病毒感染低表达e EF1a2的HCC细胞,应用real-time PCR法和Western blot法分别检测细胞e EF1a2的mRNA和蛋白表达;应用MTT法、DNA倍体法和real-time PCR法分别检测细胞活力、细胞周期和白蛋白mRNA的表达。结果:HCC癌组织e EF1a2的mRNA表达水平和蛋白表达阳性率明显高于配对癌旁组织与正常肝脏组织(P1a2的mRNA和蛋白在HCC细胞株SMMC-7721和BEL-7402高表达,在SK-HEP-1低表达。构建的GV287-e EF1a2表达慢病毒可感染SK-HEP-1细胞使e EF1a2过表达;与阴性对照组相比,GV287-e EF1a2组SK-HEP-1细胞的活力升高,白蛋白的mRNA表达水平降低,G0/G1期的细胞比例显著减少,而S期和G2/M期的细胞比例显著升高。结论:e EF1a2在HCC癌组织存在异位高表达;e EF1a2可能是HCC的一种潜在癌蛋白,其过表达可增强HCC细胞的增殖能力,降低HCC细胞的分化程度,并促使细胞周期通过G0/G1期,进入S期和G2/M期。

关键词：真核翻译延长因子1a2 肝细胞癌细胞增殖细胞周期

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eEF1a2基因沉默的原发性肝细胞癌BEL-7402细胞株的建立

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实验与检验医学 2017年第2期35卷 148-152页

作者：陈敦雁黄毅邱福南伍严安黄肖利李峰吴文冰福建医科大学省立临床医学院检验科福建福州350001 福建医科大学省立临床医学院肝胆外科福建福州350001 福建医科大学省立临床医学院病理科福建福州350001

目的本研究旨在构建针对高表达真核翻译延长因子1a2(eEF1a2)的原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7402细胞株的eEF1a2-RNAi的细胞模型,为从基因沉默基因敲除层面研究eEF1a2在HCC潜在的致癌作用的功能奠定实验基础。方法通过针对eEF1a2基因的shRNA... 详细信息

目的本研究旨在构建针对高表达真核翻译延长因子1a2(eEF1a2)的原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7402细胞株的eEF1a2-RNAi的细胞模型,为从基因沉默基因敲除层面研究eEF1a2在HCC潜在的致癌作用的功能奠定实验基础。方法通过针对eEF1a2基因的shRNA与线性化的GV115-GFP载体进行连接转化,对获得的重组子(GV115-GFP-eEF1a2-shRNA)进行PCR和测序鉴定。采用慢病毒载体系统将pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体与GV115-GFP-eEF1a2-shRNA共转染293T细胞,包装成eEF1a2-RNAi-LV,并感染高表达eEF1a2的BEL-7402细胞。采用Real time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平验证eEF1a2-RNAi-LV对BEL-7402细胞eEF1a2表达的抑制作用。结果成功构建了重组真核表达载体GV115-GFP-eEF1a2-shRNA,并通过慢病毒载体系统包装成eEF1a2-RNAi-LV;将eEF1a2-RNAi-LV转染至BEL-7402细胞后,细胞eEF1a2 mRNA和蛋白的表达水平分别下降了84.1%和64.5%,与阴性对照组相比较具显著性差异(P1a2基因被特异性沉默。结论成功构建了eEF1a2-RNAi的BEL-7402细胞模型,为进一步从基因敲除层面研究eEF1a2在HCC潜在的致癌作用奠定了良好的实验基础。

关键词：真核翻译延长因子1a2 原发性肝细胞癌 BEL-7402细胞 RNA干扰慢病毒载体

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