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纳米TiO_(2-x)N_x对ALA-PDT体外灭活HL60效果影响实验研究

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光电子．激光 2007年第10期18卷 1265-1268页

作者：陈丽熊建文刘桂香张镇西广东工业大学物理与光电工程学院广东广州510006 华南师范大学物理与电信工程学院西安交通大学生命科学与技术学院教育部生物信息工程重点实验室陕西西安710049

为研究在基于氨乙酰丙酸（ALA）的光动力治疗（PDT）法中添加适当N掺杂纳米TiO2-xNx对体外灭活白血病HL60细胞的效果影响，采用MTT分析法测试了各种实验条件下HL60细胞的相对存活率，从而研究了纳米TiO2-xNx对HL60细胞生长的影响、添加... 详细信息

为研究在基于氨乙酰丙酸（ALA）的光动力治疗（PDT）法中添加适当N掺杂纳米TiO2-xNx对体外灭活白血病HL60细胞的效果影响，采用MTT分析法测试了各种实验条件下HL60细胞的相对存活率，从而研究了纳米TiO2-xNx对HL60细胞生长的影响、添加不同浓度的纳米TiO2-xNx后PDT对HL60细胞存活的影响以及基于ALA或TiO2-xNx或ALA和TiO2-xNx的PDT对HL60细胞的存活影响。实验结果表明：50～250μg／mL浓度的纳米TiO2-xNx溶液对HL60细胞具有较强的灭活作用，其中150μg／mL浓度的纳米TiO2-xNx溶液对任意接种浓度的HL60细胞均具有很好的灭活效果。添加纳米TiO2-xNx再进行PDT，HL60细胞的相对存活率均低于同浓度纳米TiO2-xNx颗粒单独作用后HL60细胞的相对存活率。在ALA的基础上添加纳米TiO2-xNx后进行光辐照，对HL60细胞的灭活效果最佳，当添加ALA浓度为1mM／mL、纳米TiO2-xNx浓度为150μg／mL和HL60细胞接种浓度为7．5×100／mL时，HL60细胞的存活率为25％，即基于添加合适浓度的ALA及纳米TiO2-xNx的PDT对HL60细胞的灭活效率达75％。

关键词：纳米TiO2-xNx 白血病HL60细胞相对存活率氨乙酰丙酸(ALA) 光动力治疗(PDT)

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草鱼出血病病毒vp6核酸疫苗的免疫效果评估

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中国水产科学 2012年第5期19卷 841-847页

作者：刘林徐诗英李婧慧邹勇倪金俤杨鸢劼曹广力薛仁宇陈辉贡成良苏州大学基础医学与生物科学学院江苏省水生动物疫病预防控制中心南京师范大学生命科学学院

为了评估草鱼出血病病毒(GCRV)vp6基因核酸疫苗的免疫效果,将vp6基因克隆进pFastBacTMDual载体杆状病毒的多角体蛋白(Ph)启动子下游,同时将团头鲂(Megalobrama amblycephala)β-actin启动子控制的vp6基因克隆进杆状病毒的P10启动子下游... 详细信息

为了评估草鱼出血病病毒(GCRV)vp6基因核酸疫苗的免疫效果,将vp6基因克隆进pFastBacTMDual载体杆状病毒的多角体蛋白(Ph)启动子下游,同时将团头鲂(Megalobrama amblycephala)β-actin启动子控制的vp6基因克隆进杆状病毒的P10启动子下游,获核酸疫苗载体pFastBac-FA-VP6-ph-VP6。按每尾分别注射疫苗载体10、30、60μg的剂量免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)(体长14～20 cm,体质量60～120 g),同设pFastBacTMDual载体(30μg/尾)阴性对照组及空白对照组(0.4 mL/尾无菌水)。于免疫后不同时间通过RT-PCR检测免疫鱼体中vp6基因的表达,并于免疫后第14、21、28、49、70天分别通过间接凝集反应检测血液中的抗体水平,并在免疫第21天感染GCRV评估免疫保护效果。结果显示,核酸疫苗免疫草鱼后,各免疫组均有抗体产生,抗体效价在免疫后第28天达到最高;攻毒后每尾注射疫苗载体10、30、60μg组的死亡率分别为0%、0%、5%,pFastBacTMDual载体对照组和空白对照组分别为30%和100%。表明构建的核酸疫苗对草鱼病毒性出血病有较好的免疫保护效果。

关键词：草鱼出血病病毒 vp6基因核酸疫苗免疫相对存活率

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花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存条件研究

植物资源与环境学报 2010年第1期19卷 26-31页

作者：王更亮许传营王广东南京农业大学园艺学院江苏南京210095

为建立适宜的花烛（Anthurium andraeanum Lind.）胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存技术,采用单因素实验方法对影响玻璃化超低温保存后细胞相对存活率的主要因素进行了研究。结果表明,经玻璃化超低温保存后花烛悬浮细胞的相对存活率与悬浮... 详细信息

为建立适宜的花烛（Anthurium andraeanum Lind.）胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存技术,采用单因素实验方法对影响玻璃化超低温保存后细胞相对存活率的主要因素进行了研究。结果表明,经玻璃化超低温保存后花烛悬浮细胞的相对存活率与悬浮细胞的继代培养时间、渗透调节剂的种类和浓度及预培养时间、装载液种类和预处理时间、PVS2脱水时间以及超低温保存后的化冻温度均有一定的关系。继代培养3和5 d,细胞的相对存活率较高（约20%）;分别以0.3、0.5、0.7 mol·L^-1山梨醇和60、80、100、120 g·L^-1蔗糖为渗透调节剂预培养0-4 d,以0.5 mol·L^-1山梨醇预培养2 d的效果最好,细胞的相对存活率为26.2%;用体积分数25%PVS2预处理15 min,细胞的相对存活率最高（29.0%）;分别用体积分数100%PVS2脱水0、5、10、15、20、25和30 min,其中脱水10 min的悬浮细胞相对存活率最高（32.1%）;分别在10℃、20℃、30℃、40℃、50℃和60℃水浴条件下进行化冻处理,其中用40℃水浴化冻的悬浮细胞相对存活率最高（32.1%）。花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存和化冻的适宜流程为：将继代培养3-5 d的胚性悬浮细胞团（直径2 mm）在含0.5 mol·L^-1山梨醇的1/2MS液体培养基中预培养2 d后,于4℃条件下处理24 h,然后先用体积分数25%PVS2室温预处理15 min,再用体积分数100%PVS2在0℃条件下脱水10 min,最后迅速投入液氮中冷冻保存;将经过冷冻保存的细胞置于40℃水浴中化冻3 min,用含1.2mol·L^-1蔗糖的1/2MS液体培养基洗涤3次（每次10 min）,之后即可进行恢复培养。

关键词：花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存相对存活率

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重组草鱼干扰素对鲫鱼的免疫保护

重组草鱼干扰素对鲫鱼的免疫保护

作者：米一川南昌大学

学位级别：硕士

I型干扰素是先天性免疫应答的一类重要的细胞因子,在抗病毒和抗癌中都有广泛地效用。鲫鱼与草鱼的I型干扰素有很高的同源性。在我们先前的实验中,重组草鱼干扰素的免疫保护作用以及抗病毒功能已经在草鱼细胞和组织中得到了验证。为了探... 详细信息

I型干扰素是先天性免疫应答的一类重要的细胞因子,在抗病毒和抗癌中都有广泛地效用。鲫鱼与草鱼的I型干扰素有很高的同源性。在我们先前的实验中,重组草鱼干扰素的免疫保护作用以及抗病毒功能已经在草鱼细胞和组织中得到了验证。为了探究重组草鱼干扰素对鲫鱼的免疫保护作用以及它的作用机制,我们用poly I:C建立了一个病毒感染鲫鱼模型,然后用重组草鱼干扰素进行免疫保护实验。在本实验中,我们构建了pBV220-CiIFN重组质粒并且用大肠杆菌BL21(DE3)pLys S作为表达重组草鱼干扰素的宿主菌。采用原核表达的方法42℃诱导4 h获得大量的rCiIFN蛋白,进一步通过切胶回收的方法得到纯化的蛋白。最后经过SDS-PAGE检测纯化后的r CiIFN大小约为21kDa,蛋白浓度测定试剂盒测出浓度为330μg/ml。将蛋白稀释到合适浓度,为了评估在poly I:C下r CiIFN对鲫鱼体内的保护效果,我们采用口服的方法免疫鲫鱼。在给鲫鱼腹腔注射poly I:C之前,分别连续投喂1d、2d和3d拌有rCiIFN蛋白的饲料,并确保每克鱼体重能摄入1μg的重组蛋白。结果表明,与对照组的鲫鱼相比,口服免疫的方法确实能对鲫鱼起到更好的保护效果,其中连续投喂3d的鲫鱼相对存活率是54.29%,要高于连续投喂2d和1d的存活率,连续投喂2d和1d的鲫鱼存活率分别是47.83%和38.81%。然而对照组的存活率与实验组的相比则低得多,投喂了1d、2d和3d的存活率分别为16.25%、13.75%和12.50%。为进一步了解重组草鱼干扰素对鲫鱼免疫保护的分子机理,我们通过实时荧光定量PCR的方法分析rCiIFN对PKR以及IFN的诱导表达效果。在鲫鱼腹腔注射rCiIFN蛋白的24h、48h、72h以及对照组腹腔注射PBS后分别提取鲫鱼肝、肠、心、肾、鳃五个组织的总RNA,之后反转得到其cDNA。采用实时荧光定量PCR的方法检测鲫鱼五个组织中IFN以及PKR的表达情况。通过与对照组相应组织中IFN以及PKR的表达量相比,实验组腹腔注射了r CiIFN的所有的组织中的IFN以及PKR的表达量都有上调趋势,IFN以及PKR大都在48 h或72 h之后的表达量达到最高。这些结果表明当鲫鱼在poly I:C刺激下重组干扰素具有抗病毒活性并且采用rCiIFN拌料投喂的方式免疫鲫鱼能使其有保护作用。

关键词：重组干扰素相对存活率 poly I:C 口服免疫保护

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怀菊花种质资源玻璃化超低温保存技术研究

怀菊花种质资源玻璃化超低温保存技术研究

作者：宋萍萍河南师范大学

学位级别：硕士

怀菊花[Huaiqing chrysanthemum （Dendranthema morifolium）]是“四大怀药”之一,主产于河南温县、武陟、博爱（古为怀庆府所辖,故名）,兼具观赏、药用、食补三大功能。但目前怀菊花种质资源仍采用大田种植保存的方法,方式单一,加上... 详细信息

怀菊花[Huaiqing chrysanthemum （Dendranthema morifolium）]是“四大怀药”之一,主产于河南温县、武陟、博爱（古为怀庆府所辖,故名）,兼具观赏、药用、食补三大功能。但目前怀菊花种质资源仍采用大田种植保存的方法,方式单一,加上其自身的特点,菊花属于异花授粉,大田种植使其纯度不能保证,长期以来种质混杂,珍贵的种质资源流失严重。20世纪末发展起来的超低温保存技术,是目前长期稳定保存植物种质资源的唯一可行的好方法,它可以节省空间,避免继代、病虫害和气候等因素造成的种质丢失,并且设备简单,操作简便。基于此,我们开展了怀菊花玻璃化法超低温保存种质的技术研究。取得了如下研究结果:1.建立了怀菊花的快繁技术体系。怀菊花试管苗可通过腋生枝型和多芽体发生型两种途径进行繁殖,腋生枝型的最佳快繁培养基为MS+6-BA 0.2 mg·L + NAA 0.2 mg·L;多芽体发生型（带芽茎段和叶片）最佳的培养基为MS+6-BA 1 mg·L+NAA 2 mg·L;试管苗生根的最佳培养基为MS + PP333 0.5 mg·L。2.建立了玻璃化法超低温保存怀菊花种质资源的技术体系。继代培养40 d的试管苗,于4℃低温下锻炼7 d,在无菌条件下切取0.5 cm左右的带芽茎段,采用MS培养基添加Glu 0.24 mol·L + Gly 0.4 mol·L作为预培养基,在4℃下恒定培养3 d,然后将材料用60% PVS2做装载液在室温下装载20 min,然后用改良的PVS2（Gly 30% + EG 15% + DMSO 10%）0℃下脱水60 min,迅速投入液氮保存;在液氮中至少保存1 d后,立即将材料放入40℃水浴中快速化冻1～3 min,化冻后以MS基本培养基添加1.0 mol·L和1.2 mol·L葡萄糖的梯度洗涤,每次10 min,洗涤后转入再生培养基（同快繁培养基）中,于暗处培养至15 d开始形成愈伤,30 d时转到光下培养,培养至7 d时愈伤开始转绿,至25 d～30 d时芽开始形成,60 d后可长成正常植株,成活率可达80%以上。3.对保存后的再生苗进行了稳定性分析。与常温苗相比,玻璃化超低温保存后的怀菊花再生苗的平均茎节长、株高和叶片数增加值均没有显著差异;叶片的可溶性糖、可溶性蛋白和叶绿素含量也均没有显著的差异;而再生苗叶片的相对电导率、超氧阴离子和丙二醛含量显著降低,SOD和POD活力增强,同工酶谱分析表明,二者的POD、SOD酶谱表现出高度的一致性,但个别谱带的宽窄及亮度存在差异。以上说明,所建立的怀菊花玻璃化超低温保存技术体系,不仅能保持其形态和生理及酶谱的稳定性,而且增强了其抗膜质过氧化的能力。

关键词：怀菊花种质资源超低温保存玻璃化法相对存活率成活率

预培养对怀菊花玻璃化法超低温保存效果的影响

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