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Hoxd-13在肛门直肠畸形大鼠肛门直肠表达的研究

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中华小儿外科杂志 2009年第7期30卷 481-486页

作者：张丹张志波张世伟王伟王大佳王维林中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的通过观察Hoxd-13在正常和肛门直肠畸形大鼠胚胎肛门直肠发育过程中的表达情况，探讨Hoxd-13基因在肛门直肠畸形发生机制中的作用。方法研究对象分为肛门直肠畸形组（n=75）和对照组（n=108），应用乙烯硫脲致畸Wistar大鼠（n=20）... 详细信息

目的通过观察Hoxd-13在正常和肛门直肠畸形大鼠胚胎肛门直肠发育过程中的表达情况，探讨Hoxd-13基因在肛门直肠畸形发生机制中的作用。方法研究对象分为肛门直肠畸形组（n=75）和对照组（n=108），应用乙烯硫脲致畸Wistar大鼠（n=20）建立肛门直肠畸形动物模型，分别在E13、E14、E15、E16、E18和E21（Ex表示大鼠妊娠第X天）剖宫取胎，正中矢状面连续石蜡切片，进行Hoxd-13免疫组化染色，连续动态观察Hoxd-13在正常和肛门直肠畸形大鼠胚胎肛门直肠发育过程中的表达，并联合应用RTPCR方法研究Hoxd-13mRNA在各时期的表达情况。结果①免疫组化染色结果：正常大鼠胚胎中，Hoxd-13表达于尿直肠隔的间质以及后肠、泄殖腔膜和尿生殖窦的上皮层。肛门直肠畸形组大鼠胚胎中，在E13～16，Hoxd-13在尿直肠隔间质、后肠上皮层、泄殖腔膜或瘘管上皮层的表达减弱，平均光密度值明显减小，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。在2组大鼠胚胎中，Hoxd-13的表达随着胎龄的增长呈总体增加的趋势。②RT-PCR结果：Hoxd-13mRNA扩增条带在肛门直肠畸形组呈弱带或无带，在对照组均呈亮带。其相对表达量随着胎龄的增长呈总体增加的趋势。在E13～16，肛门直肠畸形组Hoxd-13mRNA的表达水平低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。RT-PCR结果与免疫组化结果一致。结论Hoxd-13在肛门直肠畸形大鼠胚胎尿直肠隔间质以及后肠上皮层、泄殖腔膜或瘘管上皮层表达减弱，Hoxd-13基因表达异常可能与肛门直肠畸形的发生有关。

关键词： Hoxd-13基因肛门,畸形直肠,畸形胚胎学泄殖腔

先天性肛门直肠畸形WNT5a基因突变的筛查分析

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中华小儿外科杂志 2010年第12期31卷 910-913页

作者：贾慧敏王晓东高红陈青江张涛王维林中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004 沈阳市第四人民医院普外科卫生部先天畸形重点实验室

目的探讨WNT5a基因突变与先天性肛门直肠畸形（anorectal malformations,ARMs）发生的关系.方法采用PCR和DNA直接测序的方法,检测88例ARMs患儿和120名健康儿童WNT5a基因第1、2外显子突变情况.结果 3例ARMs患儿存在WNT5a基因第2外显子... 详细信息

目的探讨WNT5a基因突变与先天性肛门直肠畸形（anorectal malformations,ARMs）发生的关系.方法采用PCR和DNA直接测序的方法,检测88例ARMs患儿和120名健康儿童WNT5a基因第1、2外显子突变情况.结果 3例ARMs患儿存在WNT5a基因第2外显子多点突变,正常对照组未见突变发生.结论 WNT5a基因第2外显子的突变与ARMs可能存在相关性.

关键词：肛管,畸形直肠,畸形 DNA突变分析遗传筛查

邻苯二甲酸二丁酯致雄性大鼠肛门直肠畸形和发育异常的研究

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中华小儿外科杂志 2014年第2期35卷 139-143页

作者：李恩惠蒋君涛孙文兰刘世博夏术阶刘志宏孙晓文上海交通大学附属第一人民医院泌尿外科 200080 上海交通大学附属第一人民医院老年科 200080 辽宁省肿瘤医院泌尿外科

目的研究邻苯二甲酸二丁酯（DBP）在大鼠孕晚期染毒诱导子代雄性大鼠发生肛门直肠畸形（ARMs），并探讨DBP对子代雄性大鼠生长发育的影响。方法孕鼠20只，随机分为两组，怀孕第12～18天，每天分别予大豆油及DBP850mg／kg灌胃。出生后（... 详细信息

目的研究邻苯二甲酸二丁酯（DBP）在大鼠孕晚期染毒诱导子代雄性大鼠发生肛门直肠畸形（ARMs），并探讨DBP对子代雄性大鼠生长发育的影响。方法孕鼠20只，随机分为两组，怀孕第12～18天，每天分别予大豆油及DBP850mg／kg灌胃。出生后（PND）1d统计肛门闭锁发生率，测量雄性仔鼠体重和肛门生殖器距离（AGD）。PND7d观察肛门闭锁雄性仔鼠末端直肠及肛周组织的病理学改变。PND35d统计雄性仔鼠体重、体长（除尾）和腹围，解剖后对实质脏器（脑、心、肝、脾、肺、肾）以及生殖器官（睾丸、附睾）称重，计算脏器系数，评估发育情况。结果雄性仔鼠肛门闭锁发生率为39．5％。PND1d肛门闭锁雄性仔鼠体重及AGD分别为（4．876±0．067）g、（2．401±0．341）mm，对照组分别为（6．365±0．085）g、（2．993±0．403）mm，与对照组相比明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。PND7d末端直肠及肛周组织病理显示典型的ARMs。PND35d肛门闭锁雄性仔鼠腹围及体长分别为（20．021±0．416）mm、（12．925±0．158）mm，对照组分别为（11．993±0．339）g、（14．943±0．171）mm，与对照组相比，腹围增加且体长缩短，差异有统计学意义（P〈0．05）。解剖后发现，肛门闭锁雄性仔鼠均发生巨结肠改变，实质脏器（脑、心、肝、脾、肺、左肾、右肾）以及生殖器官（左睾丸、右睾丸、左附睾、右附睾）脏器系数分别为（9．312±0．233）mg／g、（3．541±0．079）mg／g、（46．382±1．309）mg／g、（3．653±0．098）mg／g、（8．872±0．323）mg／g、（5．261±0．108）mg／g、（5．093±0．096）mg／g、（1．725±0．049）mg／g、（1．513±0．041）mg／g、（0．169±0．009）mg／g、（0．182±0．008）mg／g，对照组分别为（12．452±0．213）mg／g、（4．582±0．128）mg／g、（52．853±1．256）mg／g、（4．012±0．145）mg／g、（10．079±0．292）mg／g、（5．843±0．132）mg／g、（5．618±0．125）mg／g、（3．293±0．046）mg／g、（3．285±0．049）mg／g、（0．583±0．021）mg／g、（0．565±0．023）mg／g，与对照组相比均明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DBP850mg·kg-1·d-1在大鼠孕晚期染毒能高效诱导子代雄性大鼠发生ARMs，并对其生长发育产生明显不良影响。

关键词：邻苯甲二酸二丁酯肛门,畸形直肠,畸形肛门闭锁大鼠

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腹腔镜辅助治疗高位肛门直肠畸形中期随访

中华小儿外科杂志 2012年第11期33卷 832-834页

作者：明安晓李龙侯文英刘树立张金山李胜利刘垚王海斌葛军涛魏延栋首都儿科研究所北京100020

目的探讨腹腔镜治疗高位肛门直肠畸形的中期疗效。方法回顾分析2002年9月至2009年1月我科采用腹腔镜辅助肛门直肠成形术（LAARP）治疗高位肛门直肠畸形患儿20例，其中男14例，女6例。男性患儿中直肠前列腺瘘8例、直肠膀胱颈部瘘6例，6... 详细信息

目的探讨腹腔镜治疗高位肛门直肠畸形的中期疗效。方法回顾分析2002年9月至2009年1月我科采用腹腔镜辅助肛门直肠成形术（LAARP）治疗高位肛门直肠畸形患儿20例，其中男14例，女6例。男性患儿中直肠前列腺瘘8例、直肠膀胱颈部瘘6例，6例女性患儿均为高位一穴肛患儿，共同管长度大于3cm。腹腔镜用于直肠末端分离、瘘管处理以及盆地隧道的形成。20例患儿手术时的平均年龄为5．9个月（2-24个月），术后均获得随访，术后随访时间平均3．8g（2．5～7年）。对20例患儿术后并发症以及肛门直肠功能（排便次数、大便控制能力、污便以及便秘情况）进行调查，并应用Kelly评分对肛门直肠功能进行评价。结果3例患儿经过排便训练可以达到完全的排便控制无污便和便秘；13例患儿可实现较为满意的排便控制，偶有污便（每1～2周1次），无便秘发生。排便控制较差，排便次数增多，经常有污便或失禁者4例。该组患儿经过有效的肠道管理均可以实现满意的社会生活，该组kelly评分平均为3．9±1．59。结论腹腔镜辅助治疗高位肛门直肠畸形可获得较为满意的疗效，长期的疗效结果仍然需要进一步观察。

关键词：肛门,畸形直肠,畸形腹腔镜随访研究

先天性肛门直肠畸形胎鼠直肠末端NGF及受体TrkA与p75的表达

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中华小儿外科杂志 2012年第11期33卷 854-858页

作者：毛羽晨刘远梅金祝高明娟郑泽兵周涛遵义医学院附属小儿普胸泌科 563003

目的观察神经生长因子（NGF）及其受体TrkA、p75在先天性肛门直肠畸形（ARM）动物模型胎鼠直肠末端的表达及分布。方法选用成年SD孕鼠16只，实验组10只，对照组6只，实验组在孕11d及13d时分别以1％乙烯硫脲（125mg／kg）灌胃制作ARM动... 详细信息

目的观察神经生长因子（NGF）及其受体TrkA、p75在先天性肛门直肠畸形（ARM）动物模型胎鼠直肠末端的表达及分布。方法选用成年SD孕鼠16只，实验组10只，对照组6只，实验组在孕11d及13d时分别以1％乙烯硫脲（125mg／kg）灌胃制作ARM动物模型，对照组灌人等量生理盐水，两组孕鼠在孕20d手术取出宫内胎鼠，进行形态学观察及畸形率统计，并取胎鼠盆腔、会阴部矢状面大体标本HE染色及直肠末端石蜡包埋切片，免疫组化检测NGF及其受体TrkA、p75在正常胎鼠和ARM胎鼠直肠末端的分布情况并半定量分析。结果正常组：胎鼠存活率100％，肛门开口正常，实验组：存活率80．7％，实验组ARM发生率98．7％、短尾畸形5．1％、无尾畸形94．8％、双足内翻6．4oA、脊柱裂6．4％，盆腔会阴部矢状切面HE染色显示：ARM胎鼠肛门为一闭合盲端，无正常肛门结构，直肠盲端为增生鳞状上皮组织及增厚的肌层，未见肠腺分布，直肠末端黏膜下及肌间神经丛数量：ARM组为46．40±16．08，对照组为96．33±18．57，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；免疫组化结果显示：NGF、TrkA、p75主要分布在胎鼠直肠末端黏膜下、肌间神经丛，其中NGF主要分布在细胞核，TrkA分布在细胞质，p75在细胞核、细胞质均有分布，其积分光密度（IOD值）：对照组分别为731．75±232．18、262．82±101．72、134．67±67．13，ARM组分别为17．97±74．95、33．15±11．13、113．01±36．47，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NGF及其受体TrkA、p75可能共同参与ARM的发生、发展过程。

关键词：肛门,畸形直肠,畸形神经生长因子

肛门直肠畸形直肠末端c-kit和干细胞因子受体表达的研究

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中华小儿外科杂志 2006年第12期27卷 631-634页

作者：张海兰高红袁正伟王维林中国医科大学附属第二医院小儿外科沈阳110004 中国医科大学附属第二医院小儿先天畸形实验室

目的研究肛门直肠畸形(ARM)患儿直肠末端c-kit和SCF的表达水平,以探讨ARM患儿术后便秘的分子机制。方法通过RT-PCR方法研究10例高位、10例中位、8例低位ARM畸形和2例后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA的表达水平,并与正常对照组... 详细信息

目的研究肛门直肠畸形(ARM)患儿直肠末端c-kit和SCF的表达水平,以探讨ARM患儿术后便秘的分子机制。方法通过RT-PCR方法研究10例高位、10例中位、8例低位ARM畸形和2例后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA的表达水平,并与正常对照组进行比较。结果与正常对照组相比较,c-kit mRNA、SCF mRNA的表达在高位ARM组、中位ARM组差异有显著意义(P＜0．05),后天性肛瘘组、低位ARM组差异无显著意义(P＞0．05)。结论低位ARM和后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA表达未见明显异常提示这两种疾病可能不影响患儿直肠末端Cajal间质细胞的发育和功能。高、中位ARM患儿直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA表达的减少可能是先天性的,将影响Cajal间质细胞的发育和功能,可能是患儿术后便秘产生的分子生物学证据之一。

关键词：直肠,畸形原癌基因干细胞因子受体

肛门直肠畸形大鼠盆底肌胚胎发育过程中细胞凋亡的研究

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中华小儿外科杂志 2010年第3期31卷 216-220页

作者：陈青江马燕贾慧敏张世伟张树成白玉作袁正伟王维林中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004 卫生部小儿先天畸形重点实验室浙江省台州医院胃肠外科

目的研究肛门直肠畸形鼠盆底肌胚胎发育过程巾的凋亡现象，探索凋亡存盆底肌异常发育中的可能致病作用。方法体重250-300g的Wistar大白鼠74只随机分组，雌雄午夜合笼后次晨雌鼠阴道涂片，显微镜下见到精子即确认已交配，此日计妊娠第0天... 详细信息

目的研究肛门直肠畸形鼠盆底肌胚胎发育过程巾的凋亡现象，探索凋亡存盆底肌异常发育中的可能致病作用。方法体重250-300g的Wistar大白鼠74只随机分组，雌雄午夜合笼后次晨雌鼠阴道涂片，显微镜下见到精子即确认已交配，此日计妊娠第0天。ETU组：52只大鼠于妊娠第10天经胃管注入125mg／kg的乙烯硫脲。正常对照组：22只大鼠于妊娠第10天经胃管注入等量的生理盐水。妊娠第16、17、19、21天刮宫取胎，经连续石蜡切片及提取盆底横纹肌复合体，应用TUNEL染色及DNA Ladder方法检测盆底肌的凋亡，免疫组织化学及RT-PCR方法分析Bcl-2／Bax在盆底肌中的表达。结果①正常对照组共孕雄性胎鼠108只，未见畸形发生。ETU致畸组共得雄性胎鼠247只，肛门直肠畸形173只，其中伴发脊柱裂或脊膜膨出21只（12．1％：21／173），3．5％（6／173）伴有肢体畸形（肢体缺如或马蹄内翻足）；②在正常组巾，孕17d后出现TUNEL阳性染色，散在分布于横纹肌复合体与球海绵体肌交界区及直肠后两侧横纹肌复合体汇合处；畸形组，孕16d已有TUNEL阳性染色，大量的阳性染色细胞主要分布在横纹肌复合体的背侧；两组DNA电泳时出现均出现DNA梯度，以畸形组明显；③在两组中，孕17d时开始出现Bax及Bcl-2的表达，孕19d及孕21d表达增强。与正常组相比，Bcl-2表达下调（分别为0．44±0．06比0．49±0．07，0．69±0．09比0.90±0．14，0.51±0．07比0．71±0．11），孕19d及21d时差异有统计学意义。而Bax基因在畸形组中表达上调（分别为0．39±0．05比0．31±0．05，0．47±0．1）6比0．37±0．1）6，0．40±0．05比0．37±0．05），孕17d及19d时差异有统计学意义。RT-PCR的结果提示畸形组Pax表达显著增强而Bcl2表达减弱，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肛门直肠畸形鼠盆底肌存在异常凋亡及Bax／gcl-2表达紊乱，过早、过度及异位的凋亡可能是肛门直肠畸形时盆底肌发育异常机制之一；Bax／Bcl-2在盆底肌中的时空表达，提示其在盆底肌凋亡过程中的重要调节作用。

关键词：直肠,畸形细胞凋亡胚胎发育

肛门直肠畸形直肠末端FGF10和FGFr2b基因表达的研究

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中华小儿外科杂志 2007年第2期28卷 95-97页

作者：张海兰张志波高红袁正伟王维林中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的研究肛门直肠畸形（ARM）患儿直肠末端FGF10和FGFr2b基因的表达水平，以便从分子水平探讨FGF10和FGFr2b基因与ARM发生的关系。方法通过RT-PCR方法研究10例高位、10例中位和8例低位ARM畸形直肠末端FGF10mRNA和FGFr2bmRNA的表达水平... 详细信息

目的研究肛门直肠畸形（ARM）患儿直肠末端FGF10和FGFr2b基因的表达水平，以便从分子水平探讨FGF10和FGFr2b基因与ARM发生的关系。方法通过RT-PCR方法研究10例高位、10例中位和8例低位ARM畸形直肠末端FGF10mRNA和FGFr2bmRNA的表达水平，并与正常对照组进行比较。结果与正常对照组相比较，FGF10mRNA和FGFr2bmRNA的表达在高位ARM、中位ARM和低位ARM组有意义（P〈0．05）。结论直肠末端FGF10和FGFr2b基因表达的减弱可能与ARM的发生有关。

关键词：直肠,畸形成纤维细胞生长因子10 受体,成纤维细胞生长因子

肛门直肠畸形动物模型末端直肠肠壁肠神经系统及突触素的胚胎发育的研究

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中华小儿外科杂志 2009年第4期30卷 246-249页

作者：贾慧敏陈青江张树成张涛白玉作袁正伟王维林中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的检测蛋白基因产物（protein gene product 9．5，PGP9．5）及突触素（synaptophysin，SY）在肛门直肠畸形胎鼠直肠肠壁胚胎发育过程中的分布，探讨其可能与排便功能的关系。方法应用免疫组化、免疫荧光和Western Blot方法检测正常... 详细信息

目的检测蛋白基因产物（protein gene product 9．5，PGP9．5）及突触素（synaptophysin，SY）在肛门直肠畸形胎鼠直肠肠壁胚胎发育过程中的分布，探讨其可能与排便功能的关系。方法应用免疫组化、免疫荧光和Western Blot方法检测正常与肛门直肠畸形动物胎鼠直肠末端组织PGP9．5、SY的表达情况。结果正常组末端结肠及直肠壁内有神经节细胞，肠壁肌层及黏膜肌层PGP9．5、SY大量表达；畸形组胎鼠直肠末端壁内的分布均比对照组明显减少，发育延迟，但随着远离盲端，PGP9．5、SY出现并逐渐增多。正常胎鼠直肠末端壁内中PGP9．5、SY总蛋白量明显高于畸形组（P〈0．05）。结论肠神经系统及突触素的分布异常是肛门直肠畸形动物模型直肠末端壁的重要病理改变。

关键词：基因产物,蛋白质突触囊泡蛋白肛门,畸形直肠,畸形