检索结果-南通市图书馆

作者：段素欣天津科技大学

学位级别：硕士

本论文设计并合成了T-2毒素半抗原和人工免疫原,对T-2毒素的直接竞争酶联免疫吸附分析方法进行了探讨,建立了T-2毒素的快速免疫检测分析方法,并在实际样品检测中进行了应用。所建立的分析方法可以有效地进行现场快速定量检测,为快速免... 详细信息

本论文设计并合成了T-2毒素半抗原和人工免疫原,对T-2毒素的直接竞争酶联免疫吸附分析方法进行了探讨,建立了T-2毒素的快速免疫检测分析方法,并在实际样品检测中进行了应用。所建立的分析方法可以有效地进行现场快速定量检测,为快速免疫分析方法在食品安全领域的应用奠定了理论基础。在半抗原和人工免疫原的设计与合成中,利用T-2毒素与琥珀酸酐连接,进一步合成了半抗原活化酯,并与钥孔嘁血兰蛋白偶联,得到免疫原,与卵清蛋白偶联得到包被原,与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得到酶标抗原。通过免疫日本大耳白兔得到高效价及高特异性的抗体。选择了T-2毒素代谢物及其他5种生物毒素进行抗体交叉反应实验,结果表明此抗体与其他5种生物毒素均无交叉反应,与其代谢物HT-2毒素的交叉反应率为7%。通过对直接竞争酶联免疫吸附分析方法的条件进行优化,包括抗体包被量,工作液的离子强度,pH,T-2毒素标准品的稀释液等等,建立了一种简便、快捷、实用的T-2毒素免疫分析方法—直接竞争酶联免疫检测方法。此法灵敏度较高,IC50为0.12±0.02μg L-1,IC15为0.01±0.003μg L-1。谷物及饲料样品采用50%甲醇(v/v)提取,2000r min-I震荡3min,静置,取上清,使用不同浓度的BSA/PBS溶液作为掩蔽剂进行稀释,然后进行直接竞争酶联免疫检测分析,即可有效的消除基质影响。进行添加回收试验,得到的回收率平均可达75%-102%。符合快速检测的回收率要求。通过液相色谱-质谱联用分析方法,对建立的T-2毒素直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证,两种方法检测结果的一致性很高,线性相关系数R2值为0.9935。

关键词： T-2毒素谷物直接竞争酶联免疫分析法液相色谱-质谱联用分析方法

塑化剂中邻苯二甲酸（2-乙基）己酯和邻苯二甲酸丁基苄酯的高灵敏免疫分析新方法研究

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塑化剂中邻苯二甲酸（2-乙基）己酯和邻苯二甲酸丁基苄酯的高灵敏...

作者：洪文童安徽师范大学

学位级别：硕士

从2011年的震惊整个台湾的塑化剂风波,到2012年酒鬼酒、红花郎酒等多种酒类中被检塑化剂严重超标的事件,再到2013年在聚乙烯保鲜膜中又发现禁用的塑化剂,塑化剂这一名词受到人们越来越多的关注,也充分说明在如今的食品、生活用品等行业... 详细信息

从2011年的震惊整个台湾的塑化剂风波,到2012年酒鬼酒、红花郎酒等多种酒类中被检塑化剂严重超标的事件,再到2013年在聚乙烯保鲜膜中又发现禁用的塑化剂,塑化剂这一名词受到人们越来越多的关注,也充分说明在如今的食品、生活用品等行业中存在着巨大的安全隐患。邻苯二甲酸(2-乙基)己酯(DEHP)和邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)是两种应用非常广泛的邻苯二甲酸酯类物质(即塑化剂),它们的毒性很强,如果长期暴露在这两种物质中,将会引起严重的健康问题。因此建立简单快速地检测邻苯二甲酸酯类的方法显得尤为重要。本文中提出了两种高灵敏的酶联免疫分析方法,采用抗原包被模式分别检测婴儿用品中的DEHP和食品中的BBP。利用重氮化法将4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯(4-BBAP)或者4-氨基邻苯二甲酸(2-乙基)己酯(4-DEHAP)与BSA结合制得免疫原,从而制得相应的多克隆抗体。利用同样的方法将4-BBAP或者4-DEHAP与OVA结合制得包被抗原。在最佳实验条件下,直接竞争酶联免疫法(dc-ELISA)的检测DEHP区间在10-303ng/mL,相关系数0.998,最低检测限是0.0042ng/ml,与结构类似物的交叉反应率均小于1%,用此方法检测婴儿用品中的DEHP,加标回收率80.8%19.2%,满足实验要求。生物素-链霉亲和素放大系统酶联免疫分析法(BA-ELISA)的检测BBP区间在10-402ng/mL,相关系数0.997,最低检测限是0.0007ng/ml,与结构类似物的交叉反应率均小于0.01%。此方法成功用于检测运动饮料,绿茶,奶茶,果汁,碳酸饮料,矿泉水中的bbp,加标回收率81.9%19.1%,满足实验要求。结果表明dc-elisa和ba-elisa是简单,灵敏,特异性强的两种方法,适合检测检测婴儿用品中的dehp和食品中的bbp的含量。本论文的工作内容和创新点表现在以下几个方面:1.合成了4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯半抗原用4-硝基邻苯二甲酸酐和无水正丁醇作为反应原料,在120°c下发生水解酯化反应,之后调节ph至8.5,在聚乙二醇600催化下制得4-硝基邻苯二甲酸丁基苄酯(4-bbnp);纯化后的4-硝基邻苯二甲酸丁基苄酯溶于有机溶剂苯中,加入锌粉,发生还原反应制得4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯(4-bbap)。对纯化后的产物进行核磁表征,并计算产率为84%。2.制备了bbp多克隆抗体采用重氮化法,分别将半抗原4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯、4-氨基邻苯二甲酸(2-乙基)己酯与载体蛋白(bsa或ova)结合制备出相应的人工全抗原,选用4-bbap、4-dehap与bsa的结合物作为免疫抗原,4-bbap、4-dehap与ova的结合物作为包被抗原。通过紫外光谱扫描方法鉴定了人工抗原。将合成的免疫抗原免疫雄性新西兰大白兔,三个月后采集血样,测定血清效价,得到效价为1:64000的抗bbp多克隆抗体。3.建立了直接竞争酶联免疫分析方法测定婴儿用品中的dehp本实验以4-dehap与ova的结合物为包被抗原,hrp标记抗dehp抗体,建立了直接竞争酶联免疫分析方法测定婴儿用品中的dehp的实验体系。优化了dc-elisa的最佳实验条件,在最佳实验条件下得到线性方程y=0.6470-0.034lgc,其中y代表吸光值,c是dehp的浓度,该方法的线性范围为10-303ng/ml,检测限为0.0042ng/ml。该方法简单,快速,高灵敏度,高特异性地对婴儿用品中的dehp进行了检测。4.生物素-链霉亲和素放大系统酶联免疫分析法测定食品中的bbp本实验以4-bbap与ova的结合物为包被抗原,生物素化羊抗兔igg和hrp标记的链霉亲和素作为检测探针,利用生物素与链霉亲和素之间超强的亲和力来实现信号放大的目的,从而对食品中的bbp进行检测。在优化的最佳实验条件下,得到线性方程y=0.803-0.068lgc,其中y代表吸光值,c是bbp的浓度,线性范围为10-402ng/ml,检测限为0.0007ng/ml。在此方法的基础上,检测了十五种食品样并进行了不同浓度的加标回收,回收率在81.919.1%之间,抗体与几种结构类似物的交叉反应率很低,不影响实验检测的结果。与传统的色谱法相比,ba-elisa操作更加简便,成本较低,灵敏度高、特异性强。

关键词： 4-氨基邻苯二甲酸(2-乙基)己酯 4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯邻苯二甲酸(2-乙基)己酯邻苯二甲酸丁基苄酯直接竞争酶联免疫分析法生物素-链霉亲和素放大系统酶联免疫分析法婴儿用品食品样

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拟除虫菊酯多残留酶联免疫检测方法的研究

拟除虫菊酯多残留酶联免疫检测方法的研究

作者：余桂春天津科技大学

学位级别：硕士

本论文对拟除虫菊酯的免疫分析方法进行了深入系统的研究,利用已合成出的拟除虫菊酯通半抗原制备免疫原免疫BALB/C小鼠,通过单抗制备常规方法,得到一株对拟除虫菊酯类农药具有广谱特异性的杂交瘤细胞株,命名为2G2E7。该杂交瘤细胞株分... 详细信息

本论文对拟除虫菊酯的免疫分析方法进行了深入系统的研究,利用已合成出的拟除虫菊酯通半抗原制备免疫原免疫BALB/C小鼠,通过单抗制备常规方法,得到一株对拟除虫菊酯类农药具有广谱特异性的杂交瘤细胞株,命名为2G2E7。该杂交瘤细胞株分泌的抗体类型为IgG1;通过制备腹水得到具有广谱特异性的拟除虫菊酯类农药公共单克隆抗体。通过优化方法工作条件,确定直接竞争酶联免疫检测方法中抗体包被浓度为0.5μig/well,酶标记抗原稀释度为1：9×105,缓冲液浓度为4.5%NaCl的PBS。建立了一种简便、快捷、实用的检测拟除虫菊酯类农药的直接竞争酶联免疫检测方法(dcELISA)。此法灵敏度较高,对溴氰菊酯IC50为1.8μg/L, IC15为0.24μg/L。对7种拟除虫菊酯进行交叉反应检测,结果显示,抗体对7种拟除虫菊酯均有较高的交叉反应,将溴氰菊酯交叉反应率定为100%,氯氰菊酯,氟氰胺菊酯,氰戊菊酯,苯醚菊酯,氟氰戊菊酯,甲氰菊酯的交叉反应率分别为：120%、90%、90%、82%、75%、60%,适用于拟除虫菊酯类杀虫剂多残留的快速检测。本实验选取了海河水作为主要检测样品,河水在过滤后,用PBS缓冲液稀释10倍后即可消除基质影响,添加回收实验,平均回收率在74-108%之间,验证了本方法的准确性。利用气相色谱检测方法,对建立的拟除虫菊酯直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性,进一步证明了拟除虫菊酯酶联免疫检测方法的准确性。结果显示,该单克隆抗体具有广谱特异性,能同时检测7种拟除虫菊酯类农药,并且为进一步研发拟除虫菊酯检测试剂盒奠定了基础。

关键词：多残留拟除虫菊酯直接竞争酶联免疫分析法单克隆抗体水样品

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诺龙酶联免疫检测方法的研究

诺龙酶联免疫检测方法的研究

作者：潘涛天津科技大学

学位级别：硕士

本论文对诺龙{17β-NT}的酶联免疫分析方法进行了深入系统的研究。论文首先设计了17β-NT的半抗原,提出了一种17β-NT半抗原的合成方法,并成功合成了17β-NT的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白的结合方法,制备了高效价和高特异性的诺龙抗... 详细信息

本论文对诺龙{17β-NT}的酶联免疫分析方法进行了深入系统的研究。论文首先设计了17β-NT的半抗原,提出了一种17β-NT半抗原的合成方法,并成功合成了17β-NT的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白的结合方法,制备了高效价和高特异性的诺龙抗体。通过对免疫分析形式的选择、分析条件的优化,建立了一种简便、快捷、实用的诺龙免疫分析方法—直接竞争酶联免疫检测方法。此法灵敏度较高,IC为0.08μg/kg,IC为0.0055μg/kg。五种结构类似化合物的IC值均高于3.2 ng/mL,交叉反应小,表明抗体的特异性好。板内变异和板间变异的变异系数均低于20%,说明方法的稳定性较好。详细考察了不同样品基质对ELISA方法的影响,通过试验得到了分别针对不同样品的基质消除方法及样品提取方法。C固相萃取柱在本实验中被应用于功能食品中基质的消除,系统优化了固相萃取条件,建立了样品净化方法。应用新建立的固相萃取-酶联免疫分析方法消除了样品复杂基质的影响,对市售两种功能食品进行了诺龙的添加回收实验,样品的回收率在71.0%-91.5%,证明了方法的准确性,进一步采用液相色谱方法对所建立的上述ELISA方法进行了有效性验证,对两种方法的检测结果进行线性回归分析,所得数据统计结果显示上述ELISA方法与HPLC方法一致性较好(R＞0.9),进一步说明了建立的诺龙固相萃取-酶联免疫分析方法的准确性。

关键词：诺龙功能食品直接竞争酶联免疫分析法高效液相色谱

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农产品中呕吐毒素的酶联免疫检测方法的研究

农产品中呕吐毒素的酶联免疫检测方法的研究

作者：马冬月天津科技大学

学位级别：硕士

本论文研究建立了农产品中呕吐毒素的酶联免疫检测方法（ELISA）。首先,选择琥珀酸酐作为连接臂,构建了有效的呕吐毒素半抗原结构,采用活化酯法将半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备了免疫原,采用碳二亚胺法将半抗原分别与卵清白... 详细信息

本论文研究建立了农产品中呕吐毒素的酶联免疫检测方法（ELISA）。首先,选择琥珀酸酐作为连接臂,构建了有效的呕吐毒素半抗原结构,采用活化酯法将半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备了免疫原,采用碳二亚胺法将半抗原分别与卵清白蛋白（OVA）和辣根过氧化物酶（HRP）偶联,制备了包被原和酶标抗原。通过免疫日本大耳白兔获得了具有较高效价和特异性的呕吐毒素抗血清,采用免疫亲和层析法纯化获得了抗呕吐毒素的多克隆抗体。进一步通过对ELISA各种条件的优化,建立了呕吐毒素直接竞争ELISA标准曲线。方法的灵敏度IC50为0.03mg/kg,检测限IC15为0.003mg/kgo交叉反应实验表明DON与结构类似物3-AC-DON（3-乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇）具有较高的交叉反应,交叉反应率为500%,而与另外一种结构类似物15-AC-DON（15-乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇）和其它三种毒素赭曲霉毒素A（OTA）、T-2毒素、玉米赤霉烯酮（ZEN）均无交叉反应,说明抗体具有较高的特异性。在建立直接竞争ELISA的基础上,选取了大麦、小麦、燕麦、玉米、大米、面粉、饲料、牛奶和牛肉九种样品作为研究对象,优化建立了各种基质影响消除方法。结果表明：牛奶离心后直接用PBS稀释,其它样品用纯水提取后离心,再用PBS稀释一定倍数之后即可消除基质影响,直接用于ELISA检测。并且样品在0.02,0.04,0.06mg/kg三个添加水平上的回收率为70%-100%,说明上述样品处理方法准确有效。论文通过采用经典的呕吐毒素高效液相色谱检测方法与所建立的直接竞争ELISA方法进行了比较,结果显示：同一样品的两种方法检测结果的线性相关系数R2=0.9613,进一步验证了本论文所建立的呕吐毒素直接竞争ELISA方法的准确性。在方法的实际应用中,样品涉及谷物、饲料、牛乳及畜产品,建立了简单高效的配套前处理方法,样品的检测限最高为0.48mg/kg,均低于国家相关标准中规定的1mg/kg的最高限量值,能满足多种农产品中呕吐毒素快速检测的需要。

关键词：呕吐毒素农产品直接竞争酶联免疫分析法高效液相色谱

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谷物中玉米赤霉烯酮酶联免疫检测方法的研究

谷物中玉米赤霉烯酮酶联免疫检测方法的研究

作者：刘涛天津科技大学

学位级别：硕士

本论文对生物毒素玉米赤霉烯酮的免疫分析方法进行了深入系统的研究,合成出玉米赤霉烯酮的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备了高效价和高特异性的玉米赤霉烯酮抗体。通过对免疫分析形式与免疫分析的特异性、灵敏性的关系... 详细信息

本论文对生物毒素玉米赤霉烯酮的免疫分析方法进行了深入系统的研究,合成出玉米赤霉烯酮的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备了高效价和高特异性的玉米赤霉烯酮抗体。通过对免疫分析形式与免疫分析的特异性、灵敏性的关系以及谷物基质中干扰物对酶联免疫分析方法的影响,建立了一种简便、快捷、实用的玉米赤霉烯酮免疫分析方法——直接竞争酶联免疫检测方法。此法灵敏度较高,IC为0.06μg/kg,IC为0.01μg/kg。在对实际样品进行检测的研究中,由于玉米赤霉烯酮广泛存在于各种谷物中,选取大麦、小麦、玉米、燕麦作为研究对象考查了它们的基质影响及其去除方法。四种样品经过甲醇提取后,大麦、小麦、燕麦样品的甲醇提取液用掩蔽剂稀释后可消除基质影响,玉米样品的甲醇提取液直接用PBS稀释后可消除基质影响。在方法的准确性实验中,在30,60,120μg/kg三个加标水平上,直接竞争酶联免疫检测方法的回收率在70～100%。通过高效液相色谱检测方法,对建立的玉米赤霉烯酮直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性,线性相关系数R值为0.9828。根据本研究,进一步开发并制成检测玉米赤霉烯酮的试剂盒。所研制的玉米赤霉烯酮96孔板式快速检测试剂盒检测结果稳定、准确,抗干扰能力强,可用于大量样品的快速现场检测。

关键词：玉米赤霉烯酮谷物直接竞争酶联免疫分析法高效液相色谱

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食品中拟除虫菊酯酶联免疫检测方法的研究

食品中拟除虫菊酯酶联免疫检测方法的研究

作者：陆旸天津科技大学

学位级别：硕士

本论文对拟除虫菊酯的免疫分析方法进行了深入系统的研究,合成出拟除虫菊酯通用的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备了高效价和高特异性的拟除虫菊酯通用抗体。通过对免疫分析形式的选择与免疫分析条件的优化,建立了一种简... 详细信息

本论文对拟除虫菊酯的免疫分析方法进行了深入系统的研究,合成出拟除虫菊酯通用的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备了高效价和高特异性的拟除虫菊酯通用抗体。通过对免疫分析形式的选择与免疫分析条件的优化,建立了一种简便、快捷、实用的拟除虫菊酯免疫分析方法直接竞争联免疫检测方法。由于拟除虫菊酯广泛应用于各种农产品中,论文选取绿茶、油菜、桃作为研究对象考查了样品的基质影响去除方法。油菜和桃经过甲醇提取后,其提取液直接用PBS稀释后可消除基质影响。绿茶经过SPE柱过滤后直接用PBS稀释可消除基质影响。在6、20、70 ng/g三个加标水平上,所建立的直接竞争酶联免疫检测方法的回收率在83～110%,表明了方法具有较高的准确性。通过气相色谱检测方法,对建立的拟除虫菊酯直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性,线性相关系数R值为0.9968,进一步证明了拟除虫菊酯酶联免疫检测方法的准确性。

关键词：拟除虫菊酯油菜绿茶桃直接竞争酶联免疫分析法