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食品科学 2020年第14期41卷 95-101页

作者：余兰林姬赛赛禹金龙付文静张林李蛟龙高峰江芸南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 南京师范大学食品与制药工程学院江苏南京210023

探讨不同盐应激水平对大肠杆菌O157:H7存活和毒力基因表达的影响,并分析两者之间的相关性,选取本实验室收集的3株产毒大肠杆菌O157:H7菌株(CICC21530、95和109),于不同NaCl添加量(0、6、12、18 g/100 mL)胰蛋白胨大豆肉汤中应激不同时间... 详细信息

探讨不同盐应激水平对大肠杆菌O157:H7存活和毒力基因表达的影响,并分析两者之间的相关性,选取本实验室收集的3株产毒大肠杆菌O157:H7菌株(CICC21530、95和109),于不同NaCl添加量(0、6、12、18 g/100 mL)胰蛋白胨大豆肉汤中应激不同时间,进行细菌培养计数及实时聚合酶链反应检测毒力基因表达情况。结果显示,盐应激显著抑制了3株大肠杆菌O157:H7的存活(P盐应激时大肠杆菌O157:H7存活与毒力基因表达的变化不完全一致,存活菌数下降的同时,毒力却会增强,提示在实际含盐食品风险评估中,不仅要关注存活菌量,还需重视残存菌的毒力水平,从而更科学全面地评估大肠杆菌O157:H7的安全风险。

关键词：大肠杆菌O157:H7 盐应激存活毒力基因表达

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单核细胞增生李斯特菌σ~B启动子报告质粒的构建及其在应激研究中的应用

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 211-215页

作者：夏叶辛永萍李肖梁方维焕江玲丽浙江大学动物预防医学研究所/浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州310058 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

为探索人畜共患单核细胞增生李斯特菌的应激调控因子Sigma B（σ^B）在抗应激过程中的激活机制,本研究以pERL3为骨架,通过SOE-PCR技术构建携带3种不同σ^B依赖型启动子控制下的gfp基因的报告质粒,并利用荧光酶标仪分析携带这些报告质粒... 详细信息

为探索人畜共患单核细胞增生李斯特菌的应激调控因子Sigma B（σ^B）在抗应激过程中的激活机制,本研究以pERL3为骨架,通过SOE-PCR技术构建携带3种不同σ^B依赖型启动子控制下的gfp基因的报告质粒,并利用荧光酶标仪分析携带这些报告质粒载体的单增李斯特菌在酸或盐应激条件下的σ^B活性以及不同σ^B调控子在应激条件下对σ^B激活能力的影响。结果显示：sigB自身启动子PsigB比P0880和P1602更为敏感,可以准确指示σ^B的活性;盐应激比酸应激对σ^B的激活程度高;5%的NaCl和30 min的应激时间足以对σ^B产生显著的激活效应;rsbS、rsbT和rsbV基因缺失显著降低σ^B在应激中的激活水平,而rsbX基因不介导应激诱导的σ^B激活。本研究所构建的GFP报告质粒可以准确指示单增李斯特菌的σ^B活性,可以用于应激条件下σ^B激活机制的研究。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 Sigma B 绿色荧光蛋白盐应激

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基于iTRAQ技术对三株植物乳杆菌的比较蛋白质组学分析

基于iTRAQ技术对三株植物乳杆菌的比较蛋白质组学分析

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作者：宋雪飞沈阳农业大学

学位级别：硕士

目前,越来越多的植物乳杆菌被证实为益生菌。植物乳杆菌具有诸多有利于人体健康的生理功能。除此之外,植物乳杆菌在工业上的应用也引起了人们越来越多的关注。然而在这些应用中,植物乳杆菌会遭遇高盐浓度。植物乳杆菌运用诸多策略来应... 详细信息

目前,越来越多的植物乳杆菌被证实为益生菌。植物乳杆菌具有诸多有利于人体健康的生理功能。除此之外,植物乳杆菌在工业上的应用也引起了人们越来越多的关注。然而在这些应用中,植物乳杆菌会遭遇高盐浓度。植物乳杆菌运用诸多策略来应对不利的渗透压条件。尽管已经有一些关于植物乳杆菌渗透压反应的研究,目前对这方面的的理解还是有限的。本研究以不同来源的植物乳杆菌ATCC14917、植物乳杆菌FS5-5和植物乳杆菌208为研究对象,绘制了其在无NaCl培养基中的生长曲线,然后收集对数期菌体使其分别在NaCl浓度为0%、24%(w/v)培养基中应激3h,运用iTRAQ研究了其在两种盐应激下的蛋白质表达情况,最后运用RT-qPCR技术对所选差异蛋白质的基因表达进行了验证。1.通过测定其OD600nm分别绘制了它们在无NaCl培养基中的生长曲线。由生长曲线可知,植物乳杆菌ATCC14917、植物乳杆菌FS5-5和植物乳杆菌208在无NaCl培养基中,生长至对数生长期中期的时间点分别为5h、5h和6h。2.收集三株植物乳杆菌在无NaCl培养基中生长至对数生长期中期的菌体进行盐应激试验。然后收集菌体,进行iTRAQ试验。试验结果表明:在uniprotaxonomy578库中鉴定到350957个谱图,匹配上16669个谱图,鉴定到1628个肽段种类,匹配上878个蛋白质。3.以差异倍数在1.2倍以上,且P-value盐应激能力与植物乳杆菌FS5-5的盐应激能力相当,植物乳杆菌208的盐应激能力较差。因此,不同来源的三株植物乳杆菌的盐应激能力有差异。在盐应激条件下,表达水平明显变化的蛋白质主要为参与糖代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢、蛋白质合成、应激反应和转运的蛋白。5.应用RT-qPCR技术对iTRAQ试验中所选差异蛋白质进行基因表达水平的验证试验。结果表明,基因表达水平与蛋白质表达水平基本一致,这在RNA水平上验证了iTRAQ结果的准确性。

关键词：植物乳杆菌 iTRAQ 盐应激 RT-qPCR

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