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益精方介导PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抑制Leydig细胞凋亡的体外实验研究

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中华男科学杂志 2020年第12期26卷 1112-1118页

作者：曹 闵潇朱健贾金铭焦拥政中国中医科学院广安门医院男科北京100053 中医中医科学院研究生院北京100700 中国中医科学院针灸研究所北京100700

目的:从益精方通过调控小鼠睾丸Leydig细胞自噬与凋亡的方式,探索益精方改善少弱精子症患者精子质量的作用机制。方法:用100μmol/L的丙烯醛(ACR)诱导小鼠Leydig细胞(TM3)氧化应激模型,然后分别用5%、10%和20%的益精方含药血清处理TM3细... 详细信息

目的:从益精方通过调控小鼠睾丸Leydig细胞自噬与凋亡的方式,探索益精方改善少弱精子症患者精子质量的作用机制。方法:用100μmol/L的丙烯醛(ACR)诱导小鼠Leydig细胞(TM3)氧化应激模型,然后分别用5%、10%和20%的益精方含药血清处理TM3细胞,将TM3细胞分成正常对照组,模型组,益精方低、中、高剂量组。利用CCK-8法检测TM3细胞活率,Real-time PCR和Western印迹检测自噬/凋亡相关基因Beclin-1、Bcl-2、LC3-II及相关信号通路基因PI3K/Akt/mTOR mRNA及蛋白变化情况。结果:ACR诱导后,TM3细胞生长受到抑制(生存率为54%);与正常对照组比较,MDA含量明显增加(P益精方含药血清后,上述指标均发生不同程度的逆转变化,且具有一定的剂量依赖关系。结论:益精方能够抵抗氧化应激,可介导PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抑制Leydig细胞凋亡,从而改善少弱精子症的精子质量。

关键词：益精方 PI3K/Akt/mTOR Leydig细胞自噬凋亡 TM3细胞

益精方对不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

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中国中西医结合杂志 2014年第5期34卷 602-605页

作者：王力陈东闵泽王家辉辽宁中医药大学第一临床学院沈阳110847 海南医学院中医学院海口571199

目的观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 Wistar大鼠75只随机分为空白组,模型组,益精方高、中、低剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤连续灌胃10天;从第11天开始,空白组及模... 详细信息

目的观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 Wistar大鼠75只随机分为空白组,模型组,益精方高、中、低剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤连续灌胃10天;从第11天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,益精方高(3.38g/100g)、中(1.69g/100g)、低剂量(0.85g/100g)组分别以益精方各剂量灌胃,每天1次,连续20天。实验结束后将大鼠全部处死,摘取睾丸,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)和免疫组化SABC法分别检测各组动物生精细胞的凋亡情况及Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,细胞凋亡数升高,差异均有统计学意义(P益精方能够通过调控睾丸组织Bcl-2及Bax蛋白的表达,抑制生精细胞的凋亡。

关键词：益精方腺嘌呤 Bcl-2蛋白 Bax蛋白细胞凋亡

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益精方对小鼠精子线粒体功能的影响

中国男科学杂志 2014年第10期28卷 10-14页

作者：李柱罗少波张金颖贾金铭胡海翔空军总医院康复医学科北京100142 中国中医科学院广安门医院南区男科中国中医科学院广安门医院男科

目的：观察益精方对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子线粒体功能的影响。方法将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组（CG）、模型组（MG）、小剂量中药治疗组（SG）和大剂量中药治疗组（LG）。按60mg/kg体质量给CG小鼠腹腔注射生理盐水... 详细信息

目的：观察益精方对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子线粒体功能的影响。方法将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组（CG）、模型组（MG）、小剂量中药治疗组（SG）和大剂量中药治疗组（LG）。按60mg/kg体质量给CG小鼠腹腔注射生理盐水（NS），给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺，每天1次，连续5d，第6天开始按体质量分别给SG和LG小鼠灌服益精方，剂量分别为人类常规用量（以60 kg为标准）的1倍和5倍，MG小鼠给予等体积的NS灌胃，每天1次，连续34 d，CG常规饲养，然后对小鼠进行精液常规分析，流式细胞术检测精子线粒体功能。结果 CG、MG、SG和LG 组小鼠附睾精子密度分别为（5.20±1.34）、（1.73±0.03）、（2.08±0.01）、（3.31±0.56）×10^6/mL；精子活力[（a＋b）级精子百分率]分别为（14.49±0.30）%、（6.64±1.88）%、（11.99±1.01）%、（19.40±3.13）%；精子活率[（a＋b＋c）级精子百分率]分别为（68.39±15.13）%、（39.96±4.89）%、（62.28±4.43）%、（73.61±5.05）%。MG组精子密度、精子活力、精子活率显著低于CG组（P＜0.05）；经治疗后LG组精子密度、精子活力和精子活率明显增加，与MG组比较有显著性差异（P ＜0.05），而与CG组在精子活力和精子活率上没有明显区别。在CG、MG、SG和LG组，线粒体功能良好精子的百分率分别为（1105.93±0.33）%、（848.55±6.15）%、（888.77±22.46）%、（1000.885±72）%，线粒体功能丧失精子的百分率分别为（27.94±0.32）%、（42.43±1.00）%、（35.11±1.23）%、（30.91±0.44）%，MG小鼠精子线粒体功能良好的表达量明显下降，而线粒体功能丧失的表达量明显增多，与CG小鼠比较均有明显差异（P＜0.05）；经治疗后， LG小鼠精子线粒体功能良好的表达量显著性增加（P＜0.05），同时线粒体功能丧失的表达量明显减少，与MG小鼠比较有明显差异（P ＜0.05）。结论腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子密度、精子活力、精子活率降低，大剂量益精方可以增加小鼠精子密度，并增加精子线粒体功能，提高精子活力和精子活率，从而达到治疗少弱精子症的目的。

关键词：益精方线粒体弱精子症小鼠

益精方对环磷酰胺小鼠少弱精症模型精子凋亡的干预作用

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北京中医药大学学报 2011年第2期34卷 119-121,130页

作者：罗少波胡海翔贾金铭空军总医院男科中心北京100142 中国中医科学院广安门医院男科

目的探讨补肾益精、补血活血中药方剂益精方对环磷酰胺小鼠少弱精模型精子凋亡的影响。方法将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、小剂量治疗组和大剂量治疗组。按60 mg/kg给对照组小鼠腹腔注射生理盐水,60 mg/kg给模型组、小剂... 详细信息

目的探讨补肾益精、补血活血中药方剂益精方对环磷酰胺小鼠少弱精模型精子凋亡的影响。方法将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、小剂量治疗组和大剂量治疗组。按60 mg/kg给对照组小鼠腹腔注射生理盐水,60 mg/kg给模型组、小剂量治疗组、大剂量治疗组小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5 d。第6天开始按体重分别给小剂量治疗组和大剂量治疗组小鼠灌服益精方,剂量分别为人类常规用量(以60 kg为标准)的1倍和5倍,模型组小鼠给予等体积的生理盐水灌胃,每天1次,连续34 d。对照组常规饲养。第40天对小鼠进行精液常规分析,对精子行FITC-AV/PI染色后用流式细胞仪检测精子凋亡率。结果对照组、模型组、小剂量治疗组和大剂量治疗组精子密度分别为(5.20±1.34)、(1.73±0.03)、(2.08±0.01)、(3.31±0.56)×109L-1,精子活力分别为(14.49±0.30)%、(6.64±1.88)%、(11.99±1.01)%、(19.40±3.13)%,精子活率分别为(68.39±15.13)%、(39.96±4.89)%、(62.28±4.43)%、(73.61±5.05)%,模型组精子密度、活力、活率显著低于对照组(P益精方干预后大剂量治疗组精子密度、活力、活率明显增加,与模型组比较有显著差异(P益精方干预后大剂量治疗组凋亡率显著低于模型组(P益精方干预可降低小鼠精子凋亡率,增加小鼠精子密度、活力和活率,从而达到治疗少弱精症的目的。

关键词：精子凋亡益精方小鼠

益精方对腹腔注射环磷酰胺大鼠性腺组织的影响

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中医杂志 2001年第6期42卷 366-368页

作者：柴可夫李慧季春莲王永钧王军俞公煌浙江中医学院基础医学系浙江中医学院附属第二医院浙江省中西医结合医院

通过环磷酰胺(CTX)腹腔注射,造成大鼠性腺抑制,用中药益精方灌胃,从精子计数与活率、性腺和附性器官脏器系数、睾丸与附睾组织形态方面,观察益精方对用CTX后大鼠性腺组织的影响。结果,益精方各剂量组大鼠精子数量及活率显著高于模型对照... 详细信息

通过环磷酰胺(CTX)腹腔注射,造成大鼠性腺抑制,用中药益精方灌胃,从精子计数与活率、性腺和附性器官脏器系数、睾丸与附睾组织形态方面,观察益精方对用CTX后大鼠性腺组织的影响。结果,益精方各剂量组大鼠精子数量及活率显著高于模型对照组(P益精方能明显增加大鼠性腺及附性器官脏器系数,能明显改善大鼠睾丸及附睾的组织结构。说明中药益精方对CTX所致的性腺损伤有显著的改善作用。

关键词：性腺药物作用益精方环磷酰胺中医药治疗大鼠

益精方对腺嘌呤不育症大鼠睾丸支持细胞间连接黏附分子和闭合小环蛋白表达的作用

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北京中医药大学学报 2016年第12期39卷 1022-1026页

作者：郑小挺陈东尹申马玲王家辉贵阳中医学院贵州550002 海南医学院沈阳市中医院

目的观察益精方对腺嘌呤不育症肾阳虚大鼠睾丸支持细胞间连接黏附分子(JAM)及闭合小环蛋白(ZO)表达的影响。方法选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,按随机数字表法,平均分为正常组、模型组、复方玄驹组、益精方组,每组12只。造... 详细信息

目的观察益精方对腺嘌呤不育症肾阳虚大鼠睾丸支持细胞间连接黏附分子(JAM)及闭合小环蛋白(ZO)表达的影响。方法选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,按随机数字表法,平均分为正常组、模型组、复方玄驹组、益精方组,每组12只。造模成功后,各给药组灌胃相应药物,连续20 d。然后处死大鼠,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用免疫组化方法测定大鼠睾丸支持细胞间JAM及ZO表达。结果与正常组比较,模型组精子密度、精子活动率、JAM及ZO表达均显著降低(P方玄驹组和益精方组精子活动率、精子密度均显著升高(P益精方组JAM及ZO表达显著增加(P益精方能够通过调控JAM及ZO的表达,修复腺嘌呤法诱导的肾阳虚模型大鼠的睾丸支持细胞紧密连接蛋白的损伤。

关键词：益精方腺嘌呤不育肾阳虚连接黏附分子闭合小环蛋白大鼠

益精方对腺嘌呤法大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白表达的实验研究

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中华中医药学刊 2016年第9期34卷 2150-2152,I0009页

作者：吕世军陈东王力王家辉辽宁中医药大学辽宁沈阳110847 海南医学院海南海口571199

目的:观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白表达的影响。方法:选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,体质量(180±20)g,按随机数字表法,平均分为空白组,模型组,复方玄驹组,益精方组,每组12只。除空白组外,其... 详细信息

目的:观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白表达的影响。方法:选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,体质量(180±20)g,按随机数字表法,平均分为空白组,模型组,复方玄驹组,益精方组,每组12只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤1 m L/(100g·d)的剂量连续灌胃12 d;从第13天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,复方玄驹组以复方玄驹胶囊水溶液灌胃,益精方组以益精方汤剂灌胃,每天1次,连续20 d。实验结束后处死大鼠,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用免疫组化技术测定大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白claudin的表达。结果:与空白组比较,模型组中精子活动率、精子密度、claudin蛋白表达均降低,差异均具有统计学意义(P方玄驹组精子活动率、精子密度均升高,差异具有统计学意义(P0.05),益精方组精子活动率、精子密度、claudin蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P益精方能够提高腺嘌呤诱导的肾阳虚模型大鼠的精子密度和精子活动率水平;同时使claudin蛋白的表达增多。

关键词：益精方腺嘌呤 claudin

“益精方”对小鼠精子尾部特异性钙通道CatSper1的影响

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中华男科学杂志 2010年第11期16卷 1047-1051页

作者：罗少波贾金铭胡海翔马卫国焦拥政董佳晨空军总医院男科中心北京100142 中国中医科学院广安门医院男科北京100053

目的:观察"益精方"对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子尾部特异性钙通道CatSper1的影响。方法:将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、小剂量中药治疗组(SG)和大剂量中药治疗组(LG),按60mg/kg体重给CG小鼠腹腔注射生理... 详细信息

目的:观察"益精方"对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子尾部特异性钙通道CatSper1的影响。方法:将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、小剂量中药治疗组(SG)和大剂量中药治疗组(LG),按60mg/kg体重给CG小鼠腹腔注射生理盐水(NS),给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5d,第6d开始按体重分别给SG和LG小鼠灌服"益精方",剂量分别为人类常规用量(以60kg为标准)的1倍和5倍,MG小鼠给予等体积的NS灌胃,每天1次,连续34d,CG常规饲养,然后对小鼠进行精液常规分析,并用RT-PCR法检测小鼠精子CatSper1的表达。结果:CG、MG、SG和LG组小鼠附睾精子密度分别为(5.20±1.34)、(1.73±0.03)、(2.08±0.01)、(3.31±0.56)×106/ml,a+b级精子百分率分别为(14.49±0.30)%、(6.64±1.88)%、(11.99±1.01)%、(19.40±3.13)%,a+b+c级精子百分率分别为(68.39±15.13)%、(39.96±4.89)%、(62.28±4.43)%、(73.61±5.05)%,MG组精子密度、a+b级精子百分率、a+b+c级精子百分率显著低于CG组(P益精方"可以通过提高CatSper1的表达量,增加小鼠精子密度、a+b级和a+b+c级精子百分率,从而达到治疗少弱精子症的目的。

关键词：益精方 CatSper1 少弱精子症小鼠

益精方对腺嘌呤法大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白及调控因子影响的实验研究

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益精方对腺嘌呤法大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白及调控因子影响的...

作者：吕世军辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察益精方对腺嘌呤法诱导的不育症模型大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白及动力学调控因子的表达水平的影响,从紧密连接状态来探讨男性不育的机理。材料与方法:选用48只健康的Wistar雄性大鼠,SPF级,2月龄,体重180g左右,按随机数字表... 详细信息

目的:观察益精方对腺嘌呤法诱导的不育症模型大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白及动力学调控因子的表达水平的影响,从紧密连接状态来探讨男性不育的机理。材料与方法:选用48只健康的Wistar雄性大鼠,SPF级,2月龄,体重180g左右,按随机数字表法平均分为4组:空白组,模型组,复方玄驹胶囊组和益精方组。造模期间,除空白组外,其余三组均以腺嘌呤1 m L/(100g·d)的剂量灌胃,连续灌胃12天即造模结束;从第13天开始,空白组及模型组用生理盐水灌胃,复方玄驹组和益精方组分别以复方玄驹胶囊水溶液及益精方汤剂灌胃,每天一次,连续20天。实验结束后麻醉大鼠,无菌条件下于腹主动脉取血10m L,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用酶联免疫吸附法(ELISA法)对各组大鼠血清中睾酮(T)的含量进行检测;采用免疫组化技术测定大鼠睾丸组织中JAMS蛋白,ZOS蛋白的表达;采用RT-PCR技术测定TGF—β3、Ca2+-ATP酶、PKA的m RNA情况表达。结果:1.与空白组比较,模型组动物精子活动率、密度及血清睾酮T均明显下降(P益精方组及复方玄驹胶囊组精子活动率、密度及血清睾酮T均有明显提高(P益精方组JAMS和ZOS蛋白水平升高(P方玄驹胶囊组升高不明显(P>0.05)。3.与空白组比较,模型组中TGF-β3及TGF-β3 mRNA的表达升高(P益精方组中TGF-β3及TGF-β3 m RNA的表达有所下降(P方玄驹胶囊组下降不明显(P>0.05)。4.与空白组比较,模型组中Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的表达均降低(P益精方组中Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的表达均有所提高(P方玄驹胶囊组提高不明显(P>0.05)。结论:1.腺嘌呤能够降低精子的密度和活力及血清睾酮T的水平,导致大鼠睾丸生殖能力降低;同时使JAMS,ZOS蛋白的表达减少,TGF-β3及TGF-β3 m RNA的表达升高及Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的表达降低,说明腺嘌呤能够破坏紧密连接平衡状态,使血睾屏障通透性增高,导致生精障碍。2.益精方能够提高腺嘌呤法诱导的肾阳虚模型大鼠的精子密度、精子活动率和血清睾酮T浓度,使JAMS和ZOS蛋白表达的水平增多;同时对TGF-β3及TGF-β3m RNA的高表达具有明显的抑制作用,对Ca2+-ATP酶m RNA、PKAm RNA的低表达具有明显的拮抗作用,证明了益精方能够改善腺嘌呤损伤的大鼠睾丸支持细胞紧密连接功能,恢复大鼠的生殖能力。

关键词：益精方腺嘌呤 TJ BTB TGF-β3