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猪皮肤褶皱和厚度的初步遗传学分析

猪皮肤褶皱和厚度的初步遗传学分析

作者：黄涛江西农业大学

学位级别：硕士

猪是重要的家养畜种之一,同时也是人类疾病及健康研究的良好模式动物。皮肤是哺乳动物最大的器官,在抵御外界病原菌侵害和防止水分丢失等方面起着重要作用。褶皱是皮肤上一凹一凸的条纹。研究猪皮肤褶皱的遗传控制机制,可以帮助人们深... 详细信息

猪是重要的家养畜种之一,同时也是人类疾病及健康研究的良好模式动物。皮肤是哺乳动物最大的器官,在抵御外界病原菌侵害和防止水分丢失等方面起着重要作用。褶皱是皮肤上一凹一凸的条纹。研究猪皮肤褶皱的遗传控制机制,可以帮助人们深入了解皮肤褶皱形成的内在分子机理,同时可为人类美容去皱研究提供参考。皮肤厚度的分子遗传机理解析也有助于人们更好地认知皮肤,了解皮肤的形态构造变化和生长发育规律。本研究包括两方面内容,分别是二花脸头脸部皮肤褶皱的初步遗传分析和巴马香猪的周身皮肤厚度调查及其初步遗传关联研究。首先,获取二花脸猪头脸部褶皱表型和60K SNP基因型数据,进行全基因组关联分析,初步揭示皮肤褶皱的遗传规律。对333头二花脸猪进行头脸部正面拍照,用半透明临摹纸覆盖照片,使用HB铅笔在临摹纸上描绘出脸部轮廓和褶皱痕迹,扫描后利用Photoshop软件计算褶皱所占像素与头脸轮廓所占像素的比例,从而获得一组褶皱表型数据。同时根据头脸部的褶皱程度制定1-5分的评分标准,征集三名志愿者对照着评分标准对这333头二花脸进行褶皱评分,取其平均值,得到另一组褶皱表型数据。结果显示二花脸褶皱表型差异很大,其变异系数分别为30.15%和32.63%,说明皮肤褶皱在二花脸群体中存在明显分化。利用MCMCglmm软件包采用广义线性模型,根据系谱信息,对上述褶皱表型进行了遗传力估计,其遗传力分别为0.41和0.81,所以猪皮肤褶皱为高遗传力性状。利用GenABEL软件包,对其表型数据与60K基因型数据进行全基因组关联分析。结果发现最强显著性SNP位点均为SSC7上的ALGA0040227,该SNP位点位于GRM4基因下游3255bp。头脸部褶皱少的等位基因为A。其次,测定中国地方小型猪品种巴马香猪成年时周身9个典型部位的皮肤厚度,揭示巴马香猪不同部位皮肤厚度变化规律及其与7号染色体主效QTL的相关性。对一个由319头300日龄巴马香猪组成的成年屠宰群体中,随机选取50头,包括27头母猪和23头阉割公猪,分别取头脸、肩、背、肷、臀、胸、下腹、腋下和管等9个部位的皮肤测量其厚度。利用R语言基本统计包进行不同部位和不同性别间皮肤厚度的差异分析以及不同部位间皮肤厚度的相关分析。发现除了下腹皮肤厚度与背部、肩部、头脸部的不相关(P>0.05)外,巴马香猪不同部位两两之间皮肤厚度均呈现不同程度地显著或极显著正相关。在猪7号染色体34.5-36.2 Mb的区域选取46个SNPs位点,利用MassARRAY时间飞行质谱技术进行基因分型,结合上述测定的皮厚表型,利用广义混合线性模型及R语言SNPassoc软件包进行目标候选区域的关联分析,结果显示9个不同部位的皮肤厚度表型均与候选区域的某些SNPs存在极显著的关联,从强到弱依次是肷部、肩部、背部、腋下、臀部、胸部、头脸、管部和下腹。从而,证实了巴马香猪群体存在影响猪皮肤厚度的7号染色体主效QTL。根据关联分析结果和基因的生物学功能确定可能的位置候选基因为ANKS1A和HMGA1基因。对猪皮肤褶皱和厚度的初步遗传研究,揭示了二花脸猪头脸部褶皱表型的特点和巴马香猪不同部位皮肤厚度的变化规律,初步确定了其候选基因。研究结果可为皮肤褶皱和厚度的深入分子遗传解析奠定基础,为人类皮肤发育及皮肤皱纹形成研究提供参考。

关键词：猪皮肤褶皱皮肤厚度关联分析

维生素AD联合氧气治疗在重症患者皮肤褶皱处皮炎护理中的应用效果

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护理与康复 2019年第11期18卷 53-54页

作者：赵燕燕吴彬孙婧房星张燕华江苏大学附属医院

目的观察维生素AD联合氧气治疗在重症患者皮肤褶皱处皮炎护理中的应用效果。方法将78例患者按随机数字表分为对照组和观察组,每组39例。对照组给予垫纱布、涂造口粉等护理措施,观察组给予维生素AD联合氧气吹干等护理措施。7d后比较两组... 详细信息

目的观察维生素AD联合氧气治疗在重症患者皮肤褶皱处皮炎护理中的应用效果。方法将78例患者按随机数字表分为对照组和观察组,每组39例。对照组给予垫纱布、涂造口粉等护理措施,观察组给予维生素AD联合氧气吹干等护理措施。7d后比较两组患者治愈效果、治愈时间、皮肤褶皱处温度和绝对湿度。结果观察组患者皮肤褶皱处皮炎治愈率高于对照组;观察组治愈时间短于对照组;观察组皮肤褶皱处皮肤温度、绝对湿度低于对照组。经比较,差异均有统计学意义(P皮肤褶皱处皮炎行维生素AD联合氧气治疗效果较好。

关键词：皮肤褶皱皮炎维生素AD 氧气护理

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皱皮香猪HAS 2基因SNPs的鉴定及生物信息学分析

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畜牧兽医学报 2021年第12期52卷 3390-3402页

作者：吴行雕石道宏黄世会牛熙李升王嘉福冉雪琴贵州大学动物科学学院贵阳550025 农业生物工程研究院贵阳550025

为了探究皱皮香猪全身性皮肤褶皱是否与透明质酸合成酶2(hyaluronan synthase 2,HAS 2)基因变异有关,本研究以普通香猪为对照,采用特异性PCR方法克隆HAS 2基因的外显子编码区,应用生物信息学方法分析测定基因编码区的碱基变异,检测变异... 详细信息

为了探究皱皮香猪全身性皮肤褶皱是否与透明质酸合成酶2(hyaluronan synthase 2,HAS 2)基因变异有关,本研究以普通香猪为对照,采用特异性PCR方法克隆HAS 2基因的外显子编码区,应用生物信息学方法分析测定基因编码区的碱基变异,检测变异位点在群体中的分布频率。结果显示,皱皮香猪HAS 2基因中检测到4个SNPs位点:位于外显子1的T221A错义突变(导致亮氨酸替换为赖氨酸)和A228G同义突变,位于外显子2的T183C和外显子4的C537T同义突变。生物信息学分析发现,T221A和A228G位点构成4种单倍型,其中T-A为皱皮香猪群体的主要单倍型(27.5%),且在皱皮香猪群体中紧密连锁(r^(2)=0.253),而且T221A和A228G突变可引起mRNA自由能和蛋白质结构发生变化,TA组合的自由能为-573.29 kJ·mol^(-1),TG组合的自由能为-580.89 kJ·mol^(-1),AG组合的自由能为-572.66 kJ·mol^(-1);AA组合的自由能为-571.03 kJ·mol^(-1);蛋白序列中亮氨酸替换为赖氨酸后,α螺旋由35.52%降为32.97%,自由卷曲由43.17%升至44.51%,同时引起蛋白序列三级结构的改变。位点T221A和A228G在香猪群体中呈现出丰富的多态性,均表现出3种基因型;关联分析结果显示,皱皮香猪T221A位点的A等位基因频率显著高于普通香猪(P0.05)。研究结果揭示,HAS 2基因的外显子1中发生的两个碱基变异可能影响基因转录后mRNA的稳定性以及蛋白的三维结构,影响HA的合成量,并与皱皮香猪体侧皮肤不均匀增厚且发生褶皱有关。

关键词：皱皮香猪透明质酸酶 SNPs 基因型皮肤褶皱

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皱皮香猪泛素化连接酶2基因结构变异的差异表达研究

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畜牧兽医学报 2024年

作者：周显珊黄世会牛熙冉雪琴王嘉福贵州大学动物科学学院贵州大学农业生物工程研究院

旨在解析CUL2基因的结构变异是否影响基因表达及其与香猪皱皮严重程度之间的联系。本研究取200头6月龄皱皮香猪和普通香猪的皮肤和血样，采用PCR方法检测基因组中CUL2-I3-sv300位点的多态性分布，利用UCSC等在线软件分析该结构变异包含... 详细信息

旨在解析CUL2基因的结构变异是否影响基因表达及其与香猪皱皮严重程度之间的联系。本研究取200头6月龄皱皮香猪和普通香猪的皮肤和血样，采用PCR方法检测基因组中CUL2-I3-sv300位点的多态性分布，利用UCSC等在线软件分析该结构变异包含的功能元件，预测CUL2基因与其它基因间的互作网络，并应用RT-qPCR和Western blot技术检测CUL2以及皮肤胶原蛋白生成相关基因的表达量变化。结果表明，猪群中结构变异CUL2-I3-sv300表现出丰富的多态性，普通香猪中检测到缺失突变基因型MM、杂合型WM和野生型WW，而皱皮香猪中未检测到WW基因型；且皱皮香猪的M等位基因频率显著增加（P皮肤胶原蛋白的生成。经皮肤样品检测，MM型皱皮CUL2的mRNA表达量明显高于其它基因型；且MM型皱皮CUL2的蛋白表达量高于MM型普通皮肤的相应值。同时，MM型皱皮的MMP-1、MMP-9表达量高于普通皮肤，HIF-1α、VEGFA 、COL1A1、COL3A1、COL6A3基因表达量却低于普通皮肤。推测缺失型结构变异因丢失了SINE等功能元件，可促进皱皮CUL2等的表达，抑制胶原蛋白生成，进而加重香猪体侧皮肤褶皱的严重程度。

关键词：皱皮香猪 CUL2基因胶原蛋白皮肤褶皱生物信息学分析

香猪CHD3基因3’侧翼区264 bp结构变异的研究

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香猪CHD3基因3’侧翼区264 bp结构变异的研究

作者：黄月丽贵州大学

学位级别：硕士

CHD3(chromodomain helicase DNA binding protein 3)属于ATP依赖性染色质调节域解旋酶DNA结合蛋白(CHD)家族之一,该家族一共包括9个成员,又分为三个亚家族,其中CHD3、CHD4、CHD5属于第二亚家族(CHDⅡ)。CHD3也被称为Mi-2α,作为皮肌炎... 详细信息

CHD3(chromodomain helicase DNA binding protein 3)属于ATP依赖性染色质调节域解旋酶DNA结合蛋白(CHD)家族之一,该家族一共包括9个成员,又分为三个亚家族,其中CHD3、CHD4、CHD5属于第二亚家族(CHDⅡ)。CHD3也被称为Mi-2α,作为皮肌炎患者的自身抗原首次被发现,随着皮肌炎的恶化,往往也会促进其他并发症出现,主要是增加典型皮疹伴坏死性肌炎和恶行肿瘤的风险。猪在很多方面与人类具有非常高的相似性,比如生理水平、解剖水平、基因水平等,所以猪被公认为是研究人类疾病理想的模式动物。猪皮肤的结构、厚度、毛囊含量、胶原蛋白、脂质成分、色素沉着等与人类皮肤具有惊人的相似性。香猪属于小型的地方猪种,香猪具有个体矮小、性成熟早、繁殖快、生长快等特点,更适合作为模式动物来研究。在香猪群体中存在少数的皱皮个体,将皱皮表型的香猪作为亲本进行杂交,繁殖的仔猪中仍然存在部分皱皮表型的小猪,表明其皱皮表型可以遗传给子代。前期研究发现,在具有全身性皱皮的香猪CHD3基因中,3′-侧翼区存在一段264 bp核苷酸插入/缺失结构变异。本研究旨在探究CHD3基因结构变异与香猪皱皮的关系,为研究香猪皱皮的形成以及人类皮肤的衰老提供理论参考。本研究以大白猪、普通香猪、皱皮香猪为试验对象,皮肤组织学研究观察普通香猪与正常香猪皮肤的差异,利用生物信息学方法对CHD3基因结构变异进行分析,通过q PCR和Western blotting检测结构变异对CHD3基因表达量的影响,群体多态性研究的方法检测CHD3基因结构变异在猪群体之间分布的差异,最后初步解析CHD3基因结构变异与香猪皱皮形成的关系。本研究结果如下:1.通过皮肤组织学研究的方法比较皱皮香猪和普通香猪皮肤的差异,结果显示,普通香猪皮肤平整,皮肤内的胶原纤维和弹性纤维平行排列成紧密的网状结构、走向规律,然而皱皮香猪皮肤凹凸起伏明显,皮肤中胶原纤维和弹性纤维断裂、排列杂乱、走向无规律。2.基于实验室前期重测序分析结果,在具有全身性皱皮的香猪CHD3基因中,3′-侧翼区存在一段264 bp核苷酸插入/缺失结构变异,在该结构变异上下游设计特异性引物,通过PCR扩增结构变异位点,测序验证了该结构变异真实存在。3.利用UCSC、miRBase、miRanda、RBPsuite软件预测结构变异区间包含的重复元件、miRNA结合位点、RNA结合蛋白(RBP)的结合位点。分析结果显示在CHD3基因264 bp的结构变异内有35个miRNA结合位点和10个RBP结合位点,同时变异区间包含一个短散在元件(SINE),属于t RNA家族。4.以RT-qPCR方法检测该变异位点对CHD3基因mRNA表达的影响,结果显示CHD3基因的DD基因型(缺失)和ID基因型(杂合)的mRNA表达量极显著高于II基因型(插入)(P0.05),在大白猪中处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P皮肤褶皱形成的重要因素之一。

关键词：香猪 CHD3基因结构变异皮肤褶皱

阴道超声探头引导下经腹及经阴道联合取卵1例

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生殖医学杂志 2023年第6期32卷 938-940页

作者：杨刚林海燕李瑞岐柯奕旋张清学中山大学孙逸仙纪念医院生殖中心广州510120

目前IVF患者可常规通过经阴道超声引导穿刺获得卵母细胞,但部分异位卵巢经阴道超声检查不能探及,需行超声引导下经腹壁穿刺取卵。相比腹部超声探头,阴道超声探头操作时更加灵活方便。本文报道1例因卵巢位置异常,行阴道超声探头引导下经... 详细信息

目前IVF患者可常规通过经阴道超声引导穿刺获得卵母细胞,但部分异位卵巢经阴道超声检查不能探及,需行超声引导下经腹壁穿刺取卵。相比腹部超声探头,阴道超声探头操作时更加灵活方便。本文报道1例因卵巢位置异常,行阴道超声探头引导下经腹及经阴道联合取卵患者的诊疗过程,操作过程中采用腹壁皮肤人工褶皱模拟阴道穹隆结构,使经腹取卵术简易顺畅,有利于提高手术成功率和获卵数。本病例报告旨在为异位卵巢患者行IVF助孕治疗时的取卵操作提供参考。

关键词：异位卵巢取卵术经腹穿刺阴道超声皮肤褶皱

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