检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=皮肤特异表达载体"

共 2 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

藏系绵羊MSX2基因皮肤特异表达载体构建及功能分析

藏系绵羊MSX2基因皮肤特异表达载体构建及功能分析

引用

作者：付伟西南民族大学

学位级别：硕士

本研究对藏系绵羊同源异型基因家族成员MSX2基因的序列、组织表达谱及其对细胞内信号分子表达的影响进行分析,为进一步研究MSX2基因对藏系绵羊毛囊发育等过程的影响奠定基础。试验采集了母藏系绵羊（n=5）的心、肝、脾、肺、肾、皮肤和... 详细信息

本研究对藏系绵羊同源异型基因家族成员MSX2基因的序列、组织表达谱及其对细胞内信号分子表达的影响进行分析,为进一步研究MSX2基因对藏系绵羊毛囊发育等过程的影响奠定基础。试验采集了母藏系绵羊（n=5）的心、肝、脾、肺、肾、皮肤和脂肪等组织,从皮肤中克隆了MSX2基因编码区序列,并分析了其在不同组织的表达;构建了该基因的皮肤特异表达载体,并转染体外培养的人毛囊内根鞘细胞（Human hair inner root sheath cells,HHIRSC）,再利用荧光定量PCR及Western blot技术检测该基因下游靶基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。本研究获得的主要结果如下:1、克隆得到藏系绵羊MSX2基因编码区序列,长度为804 bp。与预测的绵羊MSX2基因序列相比,编码区有6个差异碱基,匹配序列相似性为99.25%,另外还有6个碱基缺失。藏系绵羊MSX2基因推导的氨基酸序列包含267个氨基酸,理论分子量为28.98 kD,预测的理论等电点与普通绵羊相同,均为10.32,但存在3个氨基酸差异,并缺失了连续2个氨基酸,序列相似性为98.88%。2、利用荧光定量PCR分析了MSX2基因在藏系绵羊心、肝、脾、肺、肾、皮肤和脂肪的表达情况。结果显示,皮肤中MSX2基因的表达量极显著高于其他组织（P＜0.01）,暗示MSX2基因可能与藏系绵羊毛发生长或性状相关。3、以pCDsRed2-1真核载体为骨架,构建了含KAP6.1皮肤特异启动子的MSX2基因皮肤特异表达载体pCDsR-KM。将该真核表达载体瞬时转染进入人毛囊内根鞘细胞,转染效率为10%左右;用流式细胞术分选转染成功的细胞,获得了转染MSX2基因的HHIRSC。4、荧光定量PCR检测表明,在流式细胞仪筛选后的HHIRSC中,MSX2基因超表达约9000倍,而MSX2基因下游靶基因Lef1、Foxn1、Notch1和Notch2基因的mRNA水平均显著上调。进一步用Western blot检测Notch1和Notch2蛋白的表达情况,证实这两种蛋白质的表达量亦显著上调。这些结果提示,MSX2基因有可能通过Wnt、Notch和MSX2/Foxn1/毛发角蛋白等信号通路,影响皮肤毛囊发生和周期性变化。

关键词：藏系绵羊 MSX2基因皮肤特异表达载体毛囊

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

藏系绵羊KROX20基因的克隆测序、皮肤特异性表达载体构建及其功能初步分析

藏系绵羊KROX20基因的克隆测序、皮肤特异性表达载体构建及其功能...

引用

作者：罗卉卉西南民族大学

学位级别：硕士

本研究对藏系绵羊皮肤特异性表达基因KROX20的编码区序列及其对细胞内信号分子表达的影响进行分析,为进一步研究KROX20基因对藏系绵羊毛囊发育和毛发生长等过程的影响奠定基础。首先,试验采集了藏系绵羊的皮肤组织,从皮肤组织中克隆了KR... 详细信息

本研究对藏系绵羊皮肤特异性表达基因KROX20的编码区序列及其对细胞内信号分子表达的影响进行分析,为进一步研究KROX20基因对藏系绵羊毛囊发育和毛发生长等过程的影响奠定基础。首先,试验采集了藏系绵羊的皮肤组织,从皮肤组织中克隆了KROX20基因的编码区序列,并对其编码区序列和氨基酸序列进行生物信息分析。然后,用Transfer-PCR(TPCR)方法构建了KROX20基因的重组皮肤特异表达载体,用构建的载体转染体外培养的绵羊毛乳头细胞(Dermal Papilla Cell,DPC)并对细胞转染条件进行了探索、优化。最后,利用荧光定量PCR及Western blot技术检测KROX20基因及其下游靶基因IGFBP5在m RNA和蛋白质水平的表达情况。本研究的主要结果如下:1.实验克隆得到了藏系绵羊KROX20基因的CDS区序列,其序列长度为1458 bp。该基因测序序列与普通绵羊KROX20基因预测序列相比(XM＿02796224.1),CDS区长39 bp(长在CDS的起始部位),匹配序列的相似性为99.51%,存在7个碱基差异(不包括长出部分的39个碱基)。藏系绵羊KROX20基因序列的碱基统计结果,碱基A、C、G、T分别占18.90%、37.70%、26.30%和17.10%。藏系绵羊KROX20基因测序序列推导的氨基酸序列,编码486个氨基酸,理论等电点为9.13,相对分子量为51.37 k D。与普通绵羊氨基酸序列(XP＿027818049.1)的匹配序列相似性为99.85%,存在2个氨基酸差异(不包括多编码的13个氨基酸)。藏系绵羊KROX20氨基酸序列中存在3个CH锌指结构域,其位置分别在该蛋白的350-374、380-401和408-429处,其氨基酸序列与绵羊、山羊相同,在其它动物中也存在类似锌指,但序列同源性不高。2.用Transfer-PCR(TPCR)方法成功构建了KROX20基因的重组皮肤特异表达载体pCDsRED-KROX20。将该重组p CDs RED-KROX20载体瞬时转染培养的绵羊毛乳头细胞,其转染效率为30.5%左右,最佳转染时间为48 h,载体与脂质体的最佳比列为1:3。3.荧光定量PCR检测表明,转染重组真核pCDsRED-KROX20的绵羊毛乳头细胞中,KROX20基因超表达约45倍,KROX20基因下游靶基因IGFBP5的m RNA水平上调约7.5倍。进一步用Western blot检测KROX20和IGFBP5蛋白的表达情况,两种蛋白质的表达量均极显著上调。这些结果表明,KROX20基因有可能通过IGF信号通路,影响藏系绵羊皮肤毛囊发育和毛发生长。

关键词：藏系绵羊 KROX20基因皮肤特异表达载体 Transfer-PCR(TPCR) IGFBP5基因

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：