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7,12-二甲基苯蒽/巴豆油诱发小鼠皮肤乳头状瘤过程中表皮细胞凋亡的研究

第三军医大学学报 2001年第6期23卷 733-733,735页

作者：刘仲荣张国威何云志第三军医大学附属新桥医院皮肤科重庆400037

接触致癌性化学物质是皮肤癌发生的重要因素，目前认为，细胞凋亡的异常是肿瘤发生的重要机制。本研究利用7,12-二甲基苯蒽（DMBA）/巴豆油两步法诱发小鼠皮肤乳头状瘤模型，研究了化学诱癌过程中细胞凋亡及其相关基因表达的变化。1 材... 详细信息

接触致癌性化学物质是皮肤癌发生的重要因素，目前认为，细胞凋亡的异常是肿瘤发生的重要机制。本研究利用7,12-二甲基苯蒽（DMBA）/巴豆油两步法诱发小鼠皮肤乳头状瘤模型，研究了化学诱癌过程中细胞凋亡及其相关基因表达的变化。1 材料与方法　　动物为健康6～9周龄昆明小鼠80只，按时间0、21、42、140 d分为4组，每组动物20只，雌雄各半，小鼠皮肤乳头状瘤诱发按Bollag［1］法有所改进。所有动物于实验第1、8、15天背部脱毛区涂DMBA丙酮液200 μl(150 μg);第21天起在相同部位涂0.25%巴豆油丙酮液200 μl (500 μg),每周2次；分别在0、21、42、140 d引颈处死小鼠，皮肤标本4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，7 μm连续切片。　　TUNEL法主要步骤如下：切片常规脱蜡水化；20 μg/ml蛋白酶K消化15 min；0.3% H2O2室温处理20 min；标记缓冲液（含0.03 U/μl TdT,0.04 nmol/μl生物素-11-dUTP）37 ℃温育90 min；POD溶液37 ℃温育30 min；DAB显色，苏木精复染，封片镜检［2］。　　免疫组化研究采用标准ABC过氧化物技术，P53，bcl-2,bax抗鼠单抗为Santa Cruz公司产品，分别1∶80，1∶50，1∶50稀释，染色前标本均进行微波抗原修复。　　计算机图像分析：采用Ziess VIDAS图像分析系统及软件程序。本实验选取以下指标：①平均透光值（值越小代表阳性反应程度越高）；②阳性反应区域与阴性反应区域比值（PNarea），PNarea与反应的强度无关，反应阳性着色颗粒在切片上的相对面积，可以反映细胞阳性率。

关键词：皮肤乳头癌小鼠 7,12-二甲基苯蒽/巴豆油表皮细胞凋亡

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