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PCR-核酸试纸条快速鉴定皮氏罗尔斯顿菌

南方医科大学学报 2022年第12期42卷 1867-1874页

作者：王丹赵潇颖姜菲菲孙丽颖许萌宿建胜赵云冬北华大学医学技术学院吉林吉林132013

目的基于PCR-核酸试纸条技术,建立快速检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌的方法。方法利用煮沸法提取皮氏罗尔斯顿菌基因组DNA,以皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA为靶基因使用NCBI primer-BLAST 5.0设计一对特异性引物,经克隆转入大肠杆菌感受态细胞... 详细信息

目的基于PCR-核酸试纸条技术,建立快速检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌的方法。方法利用煮沸法提取皮氏罗尔斯顿菌基因组DNA,以皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA为靶基因使用NCBI primer-BLAST 5.0设计一对特异性引物,经克隆转入大肠杆菌感受态细胞DH5α,鉴定PCR产物;分别在引物的5’端标记FITC与Biotin;组装核酸试纸条,建立PCR-核酸试纸条的方法;优化反应体系中胶体金标记的链霉亲和素与抗体浓度的最佳工作量;并对试纸条进行反应原理验证及灵敏度、特异性、稳定性评价;对某生物科技有限公司制药用水检测出的7株皮氏罗尔斯顿菌进行实验并利用MEGA构建进化树,对污染溯源进行分析。结果煮沸法提取基因组浓度较好,纯度1.8~2.0;PCR产物经克隆转化、测序比对,与GenBank已登记的皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA相似度为100%;利用胶体金放大原理,每100μL胶体金溶液中,加入3.5μL链霉亲和素进行标记,硝酸纤维素膜上检测线为2.0 mg/mL抗FITC抗体,质控线为1.2 mg/mL生物素化BSA,与阳性扩增产物结合产生红色条带;按照优化条件进行试纸条组装,每100μL样品展开液中加入8μL PCR产物,反应5 min后观察结果;核酸试纸条特异性结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致,仅有皮氏罗尔斯顿菌为阳性结果,不动杆菌、气单胞菌、假单胞菌、非脱羧勒克氏菌均为阴性结果;核酸试纸条灵敏度评价,将DNA浓度降至10-5ng/μL时,试纸条检测线仍有条带,较琼脂糖凝胶电泳结果灵敏度高1000倍;核酸试纸条稳定性评价,将试纸条在3、6、9、12月进行检测,稳定性较好。结论建立PCR-核酸试纸条技术检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌,具有简单快速、特异性强、灵敏度高、成本较低等优点,适用于制药企业对制药用水的日常检测。

关键词：皮氏罗尔斯顿菌制药用水 PCR-核酸试纸条药品污染菌

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皮氏罗尔斯顿菌致肺内感染一例

中华传染病杂志 2020年第12期38卷 822-823页

作者：朱艳艳阴祖栋马祥兴侯代伦山东省立第三医院影像中心济南250031 山东大学齐鲁医院放射科济南250012 首都医科大学附属北京胸科医院影像科 101149

罗尔斯顿菌是导致医院内感染的少见条件致病菌,患者感染后病情往往较为严重,且胸部影像学检查没有典型的表现,易导致诊断不明确或误诊。本例患者被发现晕倒在粪水池内,呼之不应,表现为发热、憋喘和烦躁,影像学检查表现为肺部片状高密度... 详细信息

罗尔斯顿菌是导致医院内感染的少见条件致病菌,患者感染后病情往往较为严重,且胸部影像学检查没有典型的表现,易导致诊断不明确或误诊。本例患者被发现晕倒在粪水池内,呼之不应,表现为发热、憋喘和烦躁,影像学检查表现为肺部片状高密度影,经抗感染治疗后病灶吸收,出院。出院5 d后因再次发热入院,经支气管肺泡灌洗液第二代测序技术检测提示皮氏罗尔斯顿菌感染,经抗感染及对症支持治疗后痊愈。

关键词：感染肺炎体层摄影术 X线计算机皮氏罗尔斯顿菌

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皮氏罗尔斯顿菌医院感染的临床分析

中华医院感染学杂志 2014年第17期24卷 4182-4184页

作者：闫涛楼正青王丽春王文龙杭州市中医院检验科浙江杭州310007 杭州市中医院院感科浙江杭州310007 杭州市中医院ICU 浙江杭州310007

目的探讨皮氏罗尔斯顿菌所致医院感染的临床易感因素、防治措施及对抗菌药物的耐药性,为临床防治提供依据。方法对医院20株皮氏罗尔斯顿菌所致医院感染进行回顾性调查分析;采用法国生物梅里埃公司VITEK-2全自动微生物鉴定仪进行菌株鉴定... 详细信息

目的探讨皮氏罗尔斯顿菌所致医院感染的临床易感因素、防治措施及对抗菌药物的耐药性,为临床防治提供依据。方法对医院20株皮氏罗尔斯顿菌所致医院感染进行回顾性调查分析;采用法国生物梅里埃公司VITEK-2全自动微生物鉴定仪进行菌株鉴定,采用K-B法进行药敏试验,结果判断参照美国临床实验室标准化研究所标准;采用WHONET软件进行统计分析。结果皮氏罗尔斯顿菌所致医院感染与患者的年龄、伴有基础疾病、接受呼吸机治疗、使用大量广谱强效抗菌药物密切相关;皮氏罗尔斯顿菌对氨苄西林、头孢替坦、氨曲南、呋喃妥因耐药率达100.0%,对哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢哌酮/舒巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星较敏感等,耐药率≤15.0%。结论对于皮氏罗尔斯顿菌所致医院感染,治疗上可考虑β-内酰胺酶类/β-内酰胺酶抑制剂、第三、四代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶等抗菌药物。

关键词：皮氏罗尔斯顿菌医院感染抗菌药物

皮氏罗尔斯顿菌所致老年患者医院获得性肺炎临床分析

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中华医院感染学杂志 2013年第1期23卷 41-43页

作者：张杜超夏静静方向群解放军总医院南楼呼吸科北京100853

目的探讨皮氏罗尔斯顿菌所致老年患者医院获得性肺炎的临床特点以及对抗菌药物的敏感性,为临床诊断与治疗提供依据。方法回顾性分析30例皮氏罗尔斯顿菌所致老年患者医院获得性肺炎的临床资料。结果皮氏罗尔斯顿菌性肺炎均发生在有基础... 详细信息

目的探讨皮氏罗尔斯顿菌所致老年患者医院获得性肺炎的临床特点以及对抗菌药物的敏感性,为临床诊断与治疗提供依据。方法回顾性分析30例皮氏罗尔斯顿菌所致老年患者医院获得性肺炎的临床资料。结果皮氏罗尔斯顿菌性肺炎均发生在有基础疾病的患者,其中86.7%发生于接受机械通气治疗后;23.3%无发热,白细胞计数升高者仅占46.7%,而中性粒细胞百分比升高者为86.7%,CRP升高者为83.3%;分离菌对氨苄西林、头孢唑林、氨曲南、替卡西林、美罗培南、呋喃妥因的耐药率为100.0%,较为敏感的抗菌药物分别为磺胺甲噁唑/甲氧苄啶100.0%、头孢哌酮/舒巴坦100.0%、左氧氟沙星96.7%、头孢吡肟96.7%、环丙沙星86.7%、米诺环素85.7%、头孢曲松85.0%;治疗初始应用的抗菌药物主要为:第二～四代头孢菌素60.0%、碳青霉烯类73.3%、喹诺酮类56.7%、硝基咪唑类40.0%;治疗终点好转率66.7%,30d死亡率为13.3%。结论对于皮氏罗尔斯顿菌所致老年患者医院获得性肺炎,喹诺酮类、β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂有一定疗效。

关键词：皮氏罗尔斯顿菌医院获得性肺炎药物敏感试验

皮氏罗尔斯顿菌Milliflex Quantum快速检测替代方法验证

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中国卫生检验杂志 2015年第3期25卷 348-350页

作者：高春银吴国平马卫东王星星赵立上海罗氏制药有限公司上海201203

目的考察Milliflex Quantum快速检测方法检测皮氏罗尔斯顿菌的准确性、精密度和线性,并进一步确定这种快速检测方法适用的准确检测范围。方法将5 cfu、10 cfu、25 cfu、50 cfu和100 cfu浓度梯度的皮氏罗尔斯顿菌和无菌水,过滤到Millifle... 详细信息

目的考察Milliflex Quantum快速检测方法检测皮氏罗尔斯顿菌的准确性、精密度和线性,并进一步确定这种快速检测方法适用的准确检测范围。方法将5 cfu、10 cfu、25 cfu、50 cfu和100 cfu浓度梯度的皮氏罗尔斯顿菌和无菌水,过滤到Milliflex膜上,对Milliflex膜进行常规的5 d薄膜法培养和预培养时间为42 h的Milliflex Quantum法来检测皮氏罗尔斯顿菌数量的不同,计算回收率、相对标准偏差,分析线性拟合程度来确定Milliflex Quantum法的准确性、精密度和线性。结果 Milliflex Quantum法在准确性、精密度和线性上均满足药典对替代检测方法的要求,且最终确定了Milliflex Quantum法检测皮氏罗尔斯顿菌的适用范围是6 cfu^100 cfu。结论 Milliflex Quantum作为一种替代方法对6 cfu^100 cfu浓度内的皮氏罗尔斯顿菌进行检测,满足药典对于替代检测方法的准确性、精密度和线性的要求,且这种方法简便、快速,为微生物的检测节省了时间。

关键词： Milliflex Quantum 膜过滤法皮氏罗尔斯顿菌微生物检测

恶性疟原虫体外培养污染皮氏罗尔斯顿菌的检测

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中国病原生物学杂志 2018年第12期13卷 1324-1326+1334页

作者：尹伊陆凤徐佳慧邹其成吴宇翔李爽李国才韩崇旭杨维平田芳何新龙扬州大学医学院病原生物学与免疫学教研室扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院医学检验科

目的探讨恶性疟原虫体外培养过程中皮氏罗尔斯顿菌污染的检测及预防。方法体外培养恶性疟原虫,涂片、染色后镜检观察;提取被污染虫血的总DNA,采用真菌、细菌通用引物对保守序列进行PCR扩增和克隆测序,将测序结果在Gen Bank中比对。结果... 详细信息

目的探讨恶性疟原虫体外培养过程中皮氏罗尔斯顿菌污染的检测及预防。方法体外培养恶性疟原虫,涂片、染色后镜检观察;提取被污染虫血的总DNA,采用真菌、细菌通用引物对保守序列进行PCR扩增和克隆测序,将测序结果在Gen Bank中比对。结果导致恶性疟原虫体外培养失败的污染物单个细胞和污染物聚集体在油镜下的形态分别与恶性疟原虫环状体和裂殖体相似,但其胞质内无空泡或无明显细胞核,且位于红细胞外侧;测序比对结果显示污染物与皮氏罗尔斯顿菌相似度>99%。结论恶性疟原虫体外培养过程中污染的皮氏罗尔斯顿菌形态与恶性疟原虫环状体或裂殖体相似,可导致镜检误判甚至使培养失败。因此,应严格无菌操作以防疟原虫体外培养污染。

关键词：疟原虫,恶性体外培养污染皮氏罗尔斯顿菌

皮氏罗尔斯顿菌致ICU内患者脓毒症5例并文献复习

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同方期刊数据库

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中国呼吸与危重监护杂志 2013年第4期12卷 404-408页

作者：李文雯王晶万献尧大连医科大学重症医学研究所附属一院重症医学科辽宁大连116011

目的提高临床医生对皮氏罗尔斯顿菌感染的认识。方法回顾性分析大连医科大学附属一院重症医学科(ICU)经血培养确诊的皮氏罗尔斯顿菌脓毒症5例。以"Ralstonia pickettii"为检索词,检索时限为1998年至2012年,通过Pubmed检索系统进行外文检... 详细信息

目的提高临床医生对皮氏罗尔斯顿菌感染的认识。方法回顾性分析大连医科大学附属一院重症医学科(ICU)经血培养确诊的皮氏罗尔斯顿菌脓毒症5例。以"Ralstonia pickettii"为检索词,检索时限为1998年至2012年,通过Pubmed检索系统进行外文检索;同时以"皮氏罗尔斯顿菌"为检索词,通过万方数据库和CNKI进行中文检索。共检索出相关病例报告30篇,结合国内外报道的同类病例的临床资料进行分析。结果皮氏罗尔斯顿菌可引起多部位的感染,其中以血流感染(55%)和肺部感染(32%)为主,其余部位感染率较低。易感人群多集中于老年人、ICU内患者、新生儿、免疫抑制或外科术后患者。感染来源多为污染的盐溶液、蒸馏水、冲洗肝素或中心静脉置管。成年人预后普遍尚可,而新生儿预后则较差。结论皮氏罗尔斯顿菌引起的感染在临床上尽管少见,但亦应引起足够重视,及时的化验检查和用药,有助于提高对该菌感染的诊断和治疗的准确性。

关键词：皮氏罗尔斯顿菌脓毒症

皮氏罗尔斯顿菌致急性汞中毒患者肺部感染1例

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中华医院感染学杂志 2012年第12期22卷 2572-2572页

作者：伏钢杨朔彭艳华湖南省劳动卫生职业病防治所检验科湖南长沙410007 湖南省劳动卫生职业病防治所职业病科湖南长沙410007

皮氏罗尔斯顿菌是一种粗杆形、有芽胞的革兰阴性非发酵菌,通常存在于潮湿的环境中。近几年来,在呼吸机管道及管道冷凝水、氧气湿化瓶湿化水、动静脉导管、患者的痰标本中均培养出皮氏罗尔斯顿菌。2011年在1例急性汞中毒的患者痰标本中... 详细信息

皮氏罗尔斯顿菌是一种粗杆形、有芽胞的革兰阴性非发酵菌,通常存在于潮湿的环境中。近几年来,在呼吸机管道及管道冷凝水、氧气湿化瓶湿化水、动静脉导管、患者的痰标本中均培养出皮氏罗尔斯顿菌。2011年在1例急性汞中毒的患者痰标本中检出该菌1株,报道如下。

关键词：皮氏罗尔斯顿菌肺部感染

1例皮氏罗尔斯顿菌致慢性肾功能衰竭尿毒症期透析患者导管相关性感染的临床特征及其治疗与原因分析

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抗感染药学 2021年第7期18卷 1050-1052页

作者：沈春明苏州市第九人民医院江苏苏州215200

目的:分析皮氏罗尔斯顿菌致慢性肾功能衰竭尿毒症期透析患者导管相关性感染的临床特征与原因及其临床治疗。方法:针对1例皮氏罗尔斯顿菌引起的透析患者导管相关性感染,分析其易感因素、透析状态、抗菌药物使用、导管处理等方面,并采集... 详细信息

目的:分析皮氏罗尔斯顿菌致慢性肾功能衰竭尿毒症期透析患者导管相关性感染的临床特征与原因及其临床治疗。方法:针对1例皮氏罗尔斯顿菌引起的透析患者导管相关性感染,分析其易感因素、透析状态、抗菌药物使用、导管处理等方面,并采集血样分析对症治疗。结果:皮氏罗尔斯顿感染在长期透析的老年患者中较为常见,其他部位感染这为少见,但发生导管相关性血流感染可能与医院感染有关;采用常用抗菌药物治疗均能有效的清除病原菌。结论:皮氏罗尔斯顿菌所致导管相关性菌血症在透析患者中较为常见,目标治疗应选用第3代或第4代头孢菌素和氟喹诺酮类抗菌药物,其对氨基糖苷类、氨曲南、第1代或第2代头孢菌素和β-内酰胺类抗菌药物的耐药率较高,临床治疗时应采用敏感率高的抗菌药物与肝素钠封管。

关键词：皮氏罗尔斯顿菌血流感染透析患者导管相关性感染