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南方医科大学学报 2022年第3期42卷 438-442页

作者：葛钰卢林明田澍雨肖雨谢尚富王琪支慧皖南医学院病理解剖教研室安徽芜湖241002

目的探讨皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ(AHVAC-Ⅰ)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231血管拟态能力的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK8实验根据半数抑制浓度(IC50)确定AHVAC-Ⅰ实验浓度,将MDA-MB-231细胞分为3组:对照组(不含药物的培养基处理... 详细信息

目的探讨皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ(AHVAC-Ⅰ)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231血管拟态能力的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK8实验根据半数抑制浓度(IC50)确定AHVAC-Ⅰ实验浓度,将MDA-MB-231细胞分为3组:对照组(不含药物的培养基处理)、AHVAC-Ⅰ实验组、药物对照组(5-Fu处理)。Matrigel实验检测分析不同浓度AHVAC-Ⅰ作用对MDA-MB-231血管拟态能力的影响。运用定量PCR和Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)与MMP9的表达水平。结果相较对照组,5、10、20μg/mL AHVAC-Ⅰ可显著抑制MDA-MB-231细胞的血管拟态能力(P抑制MMP2的表达水平,降低三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231分泌生成的MMP2(P抑制的MDA-MB-231细胞血管拟态的能力。结论 AHVAC-Ⅰ可通过下调MMP2的表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231血管生成拟态的形成能力。

关键词：皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ 三阴性乳腺癌血管拟态基质金属蛋白酶2

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皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ逆转原代胃癌相关成纤维细胞促癌作用

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中国临床药理学与治疗学 2021年第4期26卷 389-394页

作者：江玉华支慧卢林明田大皓王晓庆葛钰谢尚富王琪皖南医学院病理解剖教研室安徽芜湖241002

目的:探讨皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ(agkistrodon halys venom antitumor component-Ⅰ,AHVAC-Ⅰ)抑制胃癌细胞迁移的生物学活性。方法:组织块培养法和胰酶消化法分离培养人原代胃癌相关成纤维细胞(GCAFs);CCK8实验根据半数抑制浓度(IC 50... 详细信息

目的:探讨皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ(agkistrodon halys venom antitumor component-Ⅰ,AHVAC-Ⅰ)抑制胃癌细胞迁移的生物学活性。方法:组织块培养法和胰酶消化法分离培养人原代胃癌相关成纤维细胞(GCAFs);CCK8实验根据半数抑制浓度(IC 50)确定AHVAC-Ⅰ实验浓度;收集AHVAC-Ⅰ作用GCAFs后的上清液(GCAFs-CM^(AHVAC-Ⅰ)),划痕实验法和Transwell检测GCAFs-CM^(AHVAC-Ⅰ)抑制胃癌细胞株MKN-28迁移的能力;用ELISA、RT-PCR检测AHVAC-Ⅰ作用后GCAFs分泌产生的趋化因子CXCL12。结果:AHVAC-Ⅰ可显著抑制人原代GCAFs分泌的CXCL12(P抑制了胃癌细胞MKN-28的迁移能力(P抑制GCAFs分泌生成的CXCL12抑制胃癌细胞MKN-28的迁移能力,逆转胃癌肿瘤微环境中的GCAFs的促进胃癌细胞转移的作用。

关键词：皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ 胃癌相关成纤维细胞胃癌细胞迁移趋化因子

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皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ对人原代胃癌细胞增殖的影响

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中国临床药理学与治疗学 2020年第5期25卷 505-511页

作者：田大皓卢林明支慧周珏王晓庆江玉华皖南医学院病理解剖教研室安徽芜湖241000

目的:探索皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ(agkistrodon halys venom antitumor componentⅠ,AHVAC-Ⅰ)对人原代胃癌细胞增殖的抑制和诱导发生凋亡的作用。方法:胰酶消化法分离人原代胃癌细胞,无血清培养液培养细胞和差速贴壁法纯化人原代胃癌细... 详细信息

目的:探索皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ(agkistrodon halys venom antitumor componentⅠ,AHVAC-Ⅰ)对人原代胃癌细胞增殖的抑制和诱导发生凋亡的作用。方法:胰酶消化法分离人原代胃癌细胞,无血清培养液培养细胞和差速贴壁法纯化人原代胃癌细胞以及免疫组化法鉴定人原代胃癌细胞。采用细胞增殖和毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)法检测各浓度组的AHVAC-Ⅰ对胃癌原代细胞增殖抑制率。免疫组化法验证AHVAC-Ⅰ诱导人原代胃癌细胞发生凋亡和苏木素-伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining,HE)法观察其形态学的变化。采用流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测AHVAC-Ⅰ诱导人胃癌原代细胞凋亡率。结果:成功分离纯化人原代胃癌细胞7例,失败11例,免疫组化鉴定癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)和广谱角质蛋白(broad spectrum keratin protein,AE1/AE3)两种抗体均表达阳性。AHVAC-Ⅰ能够抑制人原代胃癌细胞的增殖且呈现剂量效应(P抑制人原代胃癌细胞的增殖和诱导人原代胃癌细胞发生凋亡,且呈剂量效应。

关键词：胃癌原代细胞培养皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ 核固缩半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3

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AHVAC-Ⅰ干预外泌体分泌抑制胃癌细胞迁移的研究

AHVAC-Ⅰ干预外泌体分泌抑制胃癌细胞迁移的研究

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作者：王琪皖南医学院

学位级别：硕士

目的:胃癌是新发率与死亡率均较高的恶性肿瘤,由于胃癌早期患者大多无明显临床症状,当确诊时多数已是中晚期阶段。扩散转移,是进展期胃癌患者预后不佳的主要原因。外泌体在胃癌的转移扩散发展中发挥着重要的作用,已成为研究热点。皖南... 详细信息

目的:胃癌是新发率与死亡率均较高的恶性肿瘤,由于胃癌早期患者大多无明显临床症状,当确诊时多数已是中晚期阶段。扩散转移,是进展期胃癌患者预后不佳的主要原因。外泌体在胃癌的转移扩散发展中发挥着重要的作用,已成为研究热点。皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ(Agkistrodon Halys venom antitumor component-I,AHVAC-Ⅰ)虽然被证实具有抑制胃癌细胞SGC-7901迁移的能力,但其机制尚不清楚。本研究通过检测分析胃癌患者血清外泌体的物理特性,探讨外泌体评估胃癌肿瘤分期的意义;明确AHVAC-Ⅰ对胃癌细胞外泌体分泌的影响,探究AHVAC-Ⅰ抑制胃癌细胞迁移的机制,为扩展AHVAC-Ⅰ在抗肿瘤方面的应用实验支持。方法:采用PEG沉淀法提取32例胃癌患者及26例健康志愿者血清外泌体;运用纳米颗粒跟踪技术((Nanosight Tracking Analysis,NTA)分析外泌体,化学发光法检测胃癌患者血清肿瘤标志物;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析血清外泌体粒径和浓度检测对胃癌分期的预测价值。超速离心法提取胃癌细胞MKN-28培养上清外泌体,运用NTA技术检测分析。AHVAC-Ⅰ处理细胞后分泌的外泌体Exo 特征;采用划痕实验与Transwell小室检测Exo 对胃癌细胞株MKN-28迁移能力的影响。结果:(1)胃癌患者血清外泌体粒径108.35±16.63nm显著低于健康对照组128.23±20.24nm,胃癌患者血清浓度9.53±6.24(×107particals/ml)高于健康对照组外泌体浓度6.14±3.43(×107particals/ml);(2)血清外泌体粒径与肿瘤病理分期、临床分期呈负相关(P0.05);(3)ROC分析结果表明血清外泌体粒径对于胃癌分期判断有着较高的可信度(AUC=0.7579,P瘤标记物评估胃癌病理分期可显著提高可信度(AUC=0.8452,P抑制胃癌细胞株MKN-28细胞生成外泌体,且呈现浓度依赖效应(P抑制胃癌细胞MKN-28的迁移。

关键词：胃癌外泌体分期评估皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ 迁移

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