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超高效液相色谱-串联质谱法检测6种样品基质中百草枯农药残留

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药物分析杂志 2022年第12期42卷 2155-2162页

作者：王成龙刘佳徐振林黄小清林泽珊谭锦萍王宇王弘华南农业大学食品学院广州510642 广州市食品检验所广州511400

建立了超高效液相色谱-串联质谱法检测6种样品基质中百草枯残留。方法:样品经乙腈-甲酸水混合溶液提取后,用亲水亲脂聚合物(HLB)固相萃取柱净化,使用正相氨基色谱柱,通过质谱电喷雾正离子(ESI+)模式电离、四极杆多反应检测模式(MRM)定... 详细信息

建立了超高效液相色谱-串联质谱法检测6种样品基质中百草枯残留。方法:样品经乙腈-甲酸水混合溶液提取后,用亲水亲脂聚合物(HLB)固相萃取柱净化,使用正相氨基色谱柱,通过质谱电喷雾正离子(ESI+)模式电离、四极杆多反应检测模式(MRM)定量。采用同位素稀释内标法的定量方式补偿了玉米、猪尿、牛血清等存在的基质抑制效应,并针对百草枯在玻璃器皿中吸附降解规律,在实验全过程中均以塑料器皿替代玻璃器皿。结果:在0.2~5 ng·mL^(-1)浓度范围线性关系良好(相关系数r^(2)=0.9982);当取样量为10 g时,方法检测限(LOD)达0.15μg·kg^(-1);在1.2、3.0、6.0μg·kg^(-1)加标水平下,大白菜、雪梨、玉米、大米、小牛血清和猪尿中百草枯的平均回收率在79.2%~106%,RSD为0.077~2.4%。对本土农贸市场流通的这6种样品基质进行随机抽样,抽取的23批次样品中百草枯的测定结果均为未检出。结论:该方法灵敏、便捷,通用性好,能适用食用农产品、血液、尿液中百草枯残留的测定。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱农药残留百草枯除草剂基质效应固相萃取吸附降解

血清乳酸脱氢酶对百草枯中毒患者预后的预测价值

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中华劳动卫生职业病杂志 2023年第7期41卷 528-533页

作者：唐亚慧陈开源胡郁宸李孟轩殷然卢中秋温州医科大学附属第一医院急诊科温州325000 温州市急危重病与救援医学重点实验室温州325000 温州医科大学附属第一医院手外科温州325000

目的探讨血清乳酸脱氢酶(LDH)在百草枯(PQ)中毒患者预后中的预测价值,为早期预后评估提供依据。方法于2022年2月,以2012年1月至2021年12月温州医科大学附属第一医院急诊科收治的PQ中毒且完成血清LDH检测的患者(50例)为观察组,并随机选... 详细信息

目的探讨血清乳酸脱氢酶(LDH)在百草枯(PQ)中毒患者预后中的预测价值,为早期预后评估提供依据。方法于2022年2月,以2012年1月至2021年12月温州医科大学附属第一医院急诊科收治的PQ中毒且完成血清LDH检测的患者(50例)为观察组,并随机选择健康体检人员(50例)为对照组。根据预后将PQ中毒患者分为存活组与死亡组,比较两组患者入院首次血常规/肝肾功能等指标的差异,建立多因素logisitic回归模型,绘制ROC曲线,分析PQ中毒患者预后的影响因素。结果与对照组比较,观察组患者入院时白细胞计数(WBC)、总胆红素(TBil)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、LDH、葡萄糖(GLU)、肌酐(Cr)明显升高,白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)明显降低(P247 U/L为升高)、TBil、ALT、AST、Cr差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素logisitic回归分析显示,血清LDH升高是预测PQ中毒患者预后的独立危险因素(OR=9.95,95%CI:1.34~73.82,P=0.025)。LDH的ROC曲线下面积为0.811(95%CI:0.692~0.930),截断值为340 U/L时,灵敏度为0.889,特异度为0.719。Log-rank检验结果显示,LDH正常组与升高组的生存率差异有统计学意义(P=0.001)。结论血清LDH对评估PQ中毒患者预后有一定的预测价值,LDH升高是PQ中毒患者预后不良的危险因素。

关键词：百草枯中毒乳酸脱氢酶预后

尼达尼布联合参附注射液对百草枯中毒大鼠肺损伤的保护作用

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中华劳动卫生职业病杂志 2023年第2期41卷 81-86页

作者：李海娜刘畅王金柱孙家安兰超刘明科郑州大学附属郑州中心医院急诊科郑州450007 郑州大学第一附属医院急诊医学部郑州450002

目的探讨尼达尼布联合参附注射液对百草枯(PQ)中毒所致肺损伤的保护作用。方法于2021年9月,将90只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、PQ染毒组、参附注射液治疗组、尼达尼布治疗组和联合治疗组,每组各18只。对照组给予生理盐水灌胃,其余... 详细信息

目的探讨尼达尼布联合参附注射液对百草枯(PQ)中毒所致肺损伤的保护作用。方法于2021年9月,将90只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、PQ染毒组、参附注射液治疗组、尼达尼布治疗组和联合治疗组,每组各18只。对照组给予生理盐水灌胃,其余四组以20%PQ 80 mg/kg灌胃,参附注射液治疗组(12 ml/kg参附注射液)、尼达尼布治疗组(60 mg/kg尼达尼布)和联合治疗组(12 ml/kg参附注射液+60 mg/kg尼达尼布)于染毒6 h后开始每日一次药物干预。分别检测各组大鼠1、3、7 d时血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素-1β(IL-1β)水平,观察各组大鼠7 d时的肺组织病理学改变、肺组织湿重/干重比(W/D),观察超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)在肺组织中的含量变化,Western印迹法检测肺组织中成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)、血小板衍化生长因子受体α(PDGFRα)以及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的表达水平。结果各染毒组大鼠染毒后血清TGF-β1、IL-1β含量先上升后下降,联合治疗组1、3、7 d大鼠血清TGF-β1、IL-1β含量均明显低于同时间点PQ染毒组、参附注射液治疗组和尼达尼布治疗组(P<0.05);经药物治疗后第7天,肺组织病理切片显示参附注射液治疗组、尼达尼布治疗组和联合治疗组大鼠肺泡腔内出血、渗出、炎性细胞浸润程度均较PQ染毒组减轻,以联合治疗组大鼠肺损伤病变最轻;与对照组比较,PQ染毒组大鼠肺组织W/D升高,MDA含量升高,SOD含量降低,FGFR1、PDGFRα、VEGFR2蛋白表达水平升高(P<0.05);与PQ染毒组、参附注射液治疗组和尼达尼布治疗组比较,联合治疗组大鼠肺组织W/D明显降低,肺组织中MDA含量降低、SOD含量升高,FGFR1、PDGFRα、VEGFR2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论尼达尼布联合参附注射液可减轻PQ中毒大鼠急性肺损伤,可能与二者联合应用可以更好地抑制TGF-β1的激活及抑制FGFR1、PDGFRα、VEGFR2在大鼠肺组织的表达相关。

关键词：百草枯中毒肺损伤尼达尼布抗炎抗纤维化

百草枯诱导人支气管上皮Beas-2B细胞衰老及铁死亡的作用研究

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百草枯诱导人支气管上皮Beas-2B细胞衰老及铁死亡的作用研究

作者：张浩山东大学

学位级别：硕士

细胞衰老是指处于连续分裂状态的细胞不可逆地丧失增殖能力的一种相对稳定状态,由DNA损伤或基因表达异常触发。衰老细胞随着时间的的推移逐渐积累,在组织和器官的功能和再生能力丧失中起着病理生理作用。百草枯(PQ;1,1’-二甲基-4,4’-... 详细信息

细胞衰老是指处于连续分裂状态的细胞不可逆地丧失增殖能力的一种相对稳定状态,由DNA损伤或基因表达异常触发。衰老细胞随着时间的的推移逐渐积累,在组织和器官的功能和再生能力丧失中起着病理生理作用。百草枯(PQ;1,1’-二甲基-4,4’-联吡啶二氯),是一种高效的非选择性除草剂,通常用于农业生产,可通过口服、皮肤接触和呼吸道吸入造成急性中毒。PQ中毒后肺中的浓度最高,由于肺是PQ中毒的主要受累组织,因此百草枯中毒死亡的主要原因是呼吸功能不全和呼吸衰竭。然而,目前还没有直接有效的百草枯中毒的药物,百草枯中毒的机制也未完全清楚,本论文工作发现PQ导致的肺损伤与PQ引起的肺细胞衰老及铁死亡有关。本研究首先测定了百草枯诱导人支气管上皮Beas-2B细胞的衰老作用,并对其作用机制展开研究。首先,我们利用MTT实验检测PQ在24 h、36 h、48 h、72 h等4个时间段对人支气管上皮Beas-2B细胞的细胞毒性,结果显示PQ对Beas-2B细胞具有较强的细胞毒性。PQ处理呈时间和剂量依赖性抑制Beas-2B细胞的增殖活性。接下来,为了研究PQ的衰老效应,我们采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色来量化PQ诱导的衰老程度,发现随着PQ浓度的逐渐增加,衰老细胞的含量逐渐增加。既往研究表明,持续激活的DNA损伤响应信号是细胞衰老的主要原因。接下来,我们采用单细胞凝胶电泳来评估PQ处理的Beas-2B细胞的DNA损伤程度和完整性,实验结果显示,PQ导致了 DNA损伤,且呈剂量依赖性。因此,这些结果表明,PQ导致Beas-2B细胞衰老和DNA损伤。随后,我们采用流式细胞术检测PQ对细胞周期的影响,结果显示,PQ处理后Beas-2B细胞出现明显典型的S期阻滞,并呈剂量依赖性。另外,我们采用蛋白质印迹法分析了 PQ处理Beas-2B细胞后S期相关蛋白cdc2和CyclinE表达的变化。结果表明,PQ能够显著降低Beas-2B细胞中cdc2和细胞周期蛋白CyclinE的蛋白表达。为了进一步探索PQ诱导Beas-2B细胞衰老的机制,我们采用Western Blot分析PQ处理的Beas-2B细胞中相关蛋白表达的变化,结果发现,p53、p21和Rb表达上调,随后,我们采用RT-PCR在RNA水平评估相关mRNA表达的变化。RT-PCR检测结果显示p53、p21和Rb表达上调。作为p53的抑制剂,PTF-α可以特异性地抑制p53的转录活性,我们用PTF-α预处理Beas-2B细胞,再用PQ处理,检测衰老细胞比例是否发生变化。SA-β-gal染色结果显示,衰老细胞中SA-β-gal的百分比加PTF-α处理组细胞较无PTF-α组明显减少,Western Blot结果显示,加入PTF-α预处理后,与仅加入PQ相比,p53、p21、Rb表达下调。上述实验结果表明PQ可能通过激活p53的转录活性诱导Beas-2B细胞衰老。铁死亡是一种铁依赖性的由脂质过氧化引起的新型细胞死亡方式,与生命体稳态的维持和疾病的发生密切相关。铁死亡与氧化应激有关,PQ导致人支气管上皮细胞衰老探讨中表现的DNA损伤提示我们发在细胞衰老时可能同时发生了铁死亡。基于此,我们展开PQ导致人支气管上皮Beas-2B细胞铁死亡及相关机制的实验研究。首先我们采用MTT法检测了铁死亡抑制剂Fer-1对人支气管上皮Beas-2B细胞活力的影响以及Fer-1预处理对PQ引起细胞损伤的影响,结果显示不大于10μM对细胞活力几乎没影响,抑制铁死亡显著改善细胞损伤。接下来,我们用Fer-1预处理Beas-2B细胞30 min后,再用PQ处理进行了检测。根据细胞铁死亡的特征,我们进一步检测了活性氧含量,流式细胞术检测结果表明,PQ处理后ROS含量升高,加入Fer-1预处理后,与仅加入PQ相比,活性氧含量降低。GSH、MDA和SOD是反映细胞铁死亡的重要检测指标。我们用相关试剂盒进行检测,结果显示PQ处理后GSH和SOD活性降低,MDA水平上调,且呈剂量依赖性,加入Fer-1预处理后,与仅加入PQ相比,MDA水平降低,GSH和SOD活性升高。为了进一步探索PQ诱导Beas-2B细胞铁死亡的机制,我们采用免疫印迹法检测铁死亡相关蛋白的表达。结果表明,PQ处理后铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11、FTH1表达下调,p53表达上调,且呈剂量依赖性,Fer-1预处理后,与仅加入PQ相比,GPX4、SLC7A11、FTH1表达上调,p53表达下调。随后,我们采用RT-PCR在RNA水平评估相关mRNA表达的变化。RT-PCR检测结果与Western Blot检测结果表现一致。随后为了验证是否通过激活p53的转录活性调控,我们用PTF-α预处理Beas-2B细胞,再用PQ处理,检测相关变化。结果表明,PTF-α预处理,与仅加入

关键词：细胞衰老周期阻滞铁死亡氧化应激百草枯

肺保护性通气策略对百草枯诱导急性呼吸窘迫综合征家猪血管外肺水的作用

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中华劳动卫生职业病杂志 2022年第1期40卷 7-11页

作者：王金柱郑春雷郑惠刘晓刚兰超郑州大学附属郑州中心医院高新区医院重症医学科郑州450007 郑州大学第一附属医院急诊医学部郑州450002

目的研究脉搏指示连续心排血量(PiCCO)监测下肺保护性通气策略对百草枯(PQ)诱导急性呼吸窘迫综合征(ARDS)家猪血管外肺水的影响。方法于2020年6月,采用PQ诱导家猪ARDS模型,造模成功后所有家猪均接受机械通气并按照吸入潮气量(V_(T))分为... 详细信息

目的研究脉搏指示连续心排血量(PiCCO)监测下肺保护性通气策略对百草枯(PQ)诱导急性呼吸窘迫综合征(ARDS)家猪血管外肺水的影响。方法于2020年6月,采用PQ诱导家猪ARDS模型,造模成功后所有家猪均接受机械通气并按照吸入潮气量(V_(T))分为小V_(T)组(6 ml/kg)、中V_(T)组(10 ml/kg)和大V_(T)组(15 ml/kg),每组各5只,设置呼气末正压(PEEP)为10 cmH_(2)O。分别于造模前(基础值)、造模成功时(t_(0))及机械通气后2 h(t_(2))、4 h(t_(4))和6 h(t_(6))时进行动脉血气分析,计算氧合指数(OI),并测量血管外肺水指数(ELWI)和肺血管通透性指数(PVPI)等指标;同时采用苏木精-伊红(HE)染色法分别在造模前、t_(0)和t_(6)时观察肺组织病理学变化。结果造模成功后,各组t_(0)时心率(HR)、平均动脉压(MAP)和二氧化碳分压(PaCO_(2))水平高于基础值,而pH值、氧分压(PaO_(2))及OI水平低于基础值(P<0.05);接受机械通气后,各组t_(2)、t_(4)、t_(6)时HR和MAP水平低于t_(0)时,t_(4)、t_(6)时PaCO_(2)水平高于t_(0)时,差异均有统计学意义(P<0.05);而各组PaO_(2)和OI水平在通气后呈先上升后下降的趋势;中、大V_(T)组t_(2)、t_(4)、t_(6)时MAP、PaO_(2)、PaCO_(2)及OI水平低于同期小V_(T)组(P<0.05)。各组家猪t_(0)时ELWI和PVPI均高于基础值(P<0.05);小V_(T)组ELWI在t_(6)时低于同组t_(0)时以及中、大V_(T)组t_(6)时(P<0.05)。HE染色发现,造模成功后家猪肺泡组织充血水肿、毛细血管肿胀,红细胞渗出,肺泡间隔增宽,t_(6)时各组肺组织可见肺泡融合、肺泡间隔进一步增宽,部分可见肺泡间隔断裂,小V_(T)组损伤程度最轻。结论肺保护性通气策略可减少PQ中毒家猪血管外肺水,减轻ARDS,改善氧合状况。

关键词：百草枯急性呼吸窘迫综合征肺保护性通气策略脉搏指示连续心排血量监测血管外肺水氧合指数

百草枯通过活性氧介导的长链非编码RNA NR＿030777与SF3B3的相互调控在神经元损害中的作用

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百草枯通过活性氧介导的长链非编码RNA NR＿030777与SF3B3的相互...

作者：王俊翔福建医科大学

学位级别：硕士

目的:在课题组前期研究中发现:百草枯（PQ）损害神经元过程中经活性氧诱导长链非编码RNA NR＿030777表达上升,高表达的NR＿030777在PQ致神经元损害中通过促进细胞增殖活力增高,调控细胞周期以及抑制细胞凋亡等方式发挥神经保护作用。为... 详细信息

目的:在课题组前期研究中发现:百草枯（PQ）损害神经元过程中经活性氧诱导长链非编码RNA NR＿030777表达上升,高表达的NR＿030777在PQ致神经元损害中通过促进细胞增殖活力增高,调控细胞周期以及抑制细胞凋亡等方式发挥神经保护作用。为了更加明确NR＿030777的作用机制,通过标记RNA亲和纯化（TRAP）技术,富集到剪接因子3b亚基3（SF3B3）,提示SF3B3可与NR＿030777直接结合发挥其生物学作用。本研究旨在通过基因编辑等技术手段,明确SF3B3是否在PQ致神经元损害中发挥作用,同时,观察敲低或过表达SF3B3是否会影响NR＿030777的表达,再进一步探讨SF3B3及NR＿030777在PQ致神经元损害中的作用机制。方法:（1）0、100、200μM PQ处理Neuro-2a细胞24 h后,Western Blot（WB）检测SF3B3蛋白表达水平;（2）利用慢病毒载体,构建SF3B3敲低以及过表达的细胞系,采用CCK8实验以及酪氨酸羟化酶（TH）等帕金森病相关蛋白表达水平评估细胞退行性损害;（3）利用q RT-PCR检测NR＿030777及其同源基因Zfp326 m RNA表达情况,观察NR＿030777与Zfp326的可变剪接变化;（4）通过检测N6-甲基腺苷（mA）甲基转移酶和去甲基化酶蛋白表达情况,证明SF3B3对mA修饰的影响;（5）加入Hoechst和7-AAD染料,以及通过检测凋亡相关蛋白乳腺癌缺失基因-1（DBC-1）观察细胞凋亡水平变化;（6）通过检测微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）等自噬相关蛋白表达变化,阐明SF3B3对自噬的影响;（7）使用活性氧清除剂（NAC）及过氧化氢（HO）进行干预,检测SF3B3蛋白表达变化,并用血红素加氧酶1（HO-1）蛋白和脂质过氧化探针评估SF3B3对细胞氧化应激方面的影响;（8）敲低及过表达NR＿030777后检测Sf3b3 m RNA表达水平,探究NR＿030777对Sf3b3 m RNA表达的影响。结果:第一部分PQ通过下调SF3B3蛋白表达致神经元退行性损害（1）200μM PQ处理Neuro-2a细胞24 h后,SF3B3蛋白表达减少（P0.05）,FTO蛋白表达降低（P=0.052）,过表达SF3B3后METTL3蛋白表达上升,FTO蛋白表达有进一步降低的趋势（P0.05）;（3）流式细胞术发现PQ处理以及过表达SF3B3均会使细胞凋亡水平上升,过表达SF3B3还能促进DBC-1表达（P<0.05）;（4）敲低SF3B3促进PQ诱导的LC3B-II蛋白表达上升,过表达SF3B3则抑制LC3B-II蛋白表达（P<0.05）;（5）NAC预处理2 h后,PQ不再诱导SF3B3表达下调,且50及100μM HO也能下调SF3B3的表达,敲低SF3B3后,PQ引起的HO-1蛋白表达上调被部分回复,而过表达SF3B3会上调HO-1蛋白表达（P<0.05）;（6）敲低NR＿030777上调Sf3b3 m RNA表达,而过表达NR＿030777则下调Sf3b3 m RNA表达（P<0.05）。结论:（1）PQ致神经元细胞损害中,能够下调SF3B3蛋白表达,引起TH蛋白表达进一步减少,而过表达SF3B3能够增加细胞活力,回复PQ导致的TH蛋白表达下降;（2）敲低SF3B3能在PQ诱导LC3B-II蛋白表达的基础上,进一步促进LC3B-II蛋白表达,而过表达SF3B3则能抑制LC3B-II蛋白表达;（3）PQ通过增加ROS生成的方式下调SF3B3蛋白表达;（4）敲低SF3B3能够引起NR＿030777的表达减少,反之,过表达NR＿030777会导致SF3B3的表达减少。

关键词：百草枯帕金森病 SF3B3 氧化应激自噬

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标本保存运输对大鼠血液百草枯浓度的影响

中华劳动卫生职业病杂志 2023年第6期41卷 447-450页

作者：姚冬奇罗函艳侯建行孙艺青董艳玲田英平河北医科大学第二医院急诊科石家庄050000

目的探讨在标本保存与运输过程中时长、温度、震荡对百草枯(PQ)染毒大鼠血液中PQ浓度的影响。方法于2021年3月,将无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠60只随机分为低剂量组和高剂量组(PQ染毒剂量分别为10、80 mg/kg),每组30只。每组按干预方... 详细信息

目的探讨在标本保存与运输过程中时长、温度、震荡对百草枯(PQ)染毒大鼠血液中PQ浓度的影响。方法于2021年3月,将无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠60只随机分为低剂量组和高剂量组(PQ染毒剂量分别为10、80 mg/kg),每组30只。每组按干预方法分为常温静置组、冷藏静置组、37 ℃静置组、常温震荡组、37 ℃震荡组5个亚组,每亚组6只大鼠。大鼠通过腹腔注射相应剂量PQ进行染毒,染毒后1 h通过心脏取血的方法获取血液样本,按照不同方式干预后,检测并比较每亚组干预前后的PQ浓度,结果 37 ℃震荡组PQ染毒大鼠PQ检测结果较干预前明显下降(P0.05)。结论 37 ℃下震荡4 h会使PQ染毒大鼠血液中PQ浓度下降。

关键词：大鼠百草枯标本保存标本运输毒物检测

百草枯通过激活补体级联反应诱导小胶质细胞对神经元突触吞噬紊乱的研究

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百草枯通过激活补体级联反应诱导小胶质细胞对神经元突触吞噬紊乱...

作者：张春晖宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的本研究首先通过腹腔注射百草枯(PQ)染毒小鼠来观察低剂量暴露PQ小鼠行为学变化及中枢神经系统中固有免疫系统的激活情况,其次观察激活的固有免疫系统产生的免疫毒性对中枢神经系统的损伤情况,最后探讨PQ通过补体级联反应过度激活诱... 详细信息

目的本研究首先通过腹腔注射百草枯(PQ)染毒小鼠来观察低剂量暴露PQ小鼠行为学变化及中枢神经系统中固有免疫系统的激活情况,其次观察激活的固有免疫系统产生的免疫毒性对中枢神经系统的损伤情况,最后探讨PQ通过补体级联反应过度激活诱导小胶质细胞吞噬功能紊乱对神经元突触的损伤机制,阐明固有免疫系统在PQ所致中枢神经系统损伤的关键作用,以期为深入研究PQ的神经免疫毒作用机制及后期药物干预提供理论依据。方法(一)神经元突触损伤是PQ诱导小鼠非运动功能障碍早期病理标志1.小鼠28天低剂量暴露PQ:SPF级C57BL/6J雄性小鼠96只,体重(22±2)g,适应性饲养一周后将96只小鼠随机分为2组:对照组和PQ染毒组,每组各48只,对照组腹腔注射等体积0.9%生理盐水,PQ染毒组腹腔注射PQ(1.25 mg/kg),每日注射1次,连续注射28天。2.观察PQ染毒小鼠行为学改变:(1)神经行为学观察:行为学测试在染毒结束后2天进行。采用爬杆实验和旷场实验部分指标评价各组小鼠的运动功能,高架十字迷宫实验和悬尾实验评价非运动功能。3.观察PQ染毒小鼠认知功能相关脑区改变:(1)免疫荧光染色(IF)观察海马区、前额叶皮质神经元及其突触相关蛋白Neu N、PSD95变化情况。(2)原位末端标记法(TUNEL)染色观察神经元凋亡情况。(3)蛋白免疫印迹(Western blot)分析观察神经元突触相关蛋白PSD95、Syn表达情况。(二)PQ诱发中枢神经系统固有免疫毒性致神经元突触异常缺失1.观察中枢神经系统免疫反应激活情况:(1)免疫组织化学(IHC)分析:观察海马区、前额叶皮质固有免疫因子补体C3表达情况。(2)IF观察:前额叶皮质补体C1q沉积与Neu N标记的神经元位置变化。(3)免疫沉淀(IP)分析:沉积的补体与神经元突触之间的相互作用。(4)Western blot分析:测定小鼠前额叶皮质补体级联反应相关蛋白C1q、C2、C3、C4等的表达情况及补体内源性抑制因子CD55的表达情况。2.观察补体级联反应过度激活对中枢神经系统小胶质细胞的影响:(1)IP分析:补体C3与小胶质细胞的相互作用。(2)IHC分析:Iba-1标记的海马区、前额叶皮质小胶质细胞形态变化及前额叶皮质小胶质细胞的数量变化。(3)Western blot:观察海马区小胶质细胞Iba-1及前额叶皮质小胶质细胞吞噬功能相关的溶酶体蛋白CD68、Lamp1表达情况。(4)IF观察:前额叶皮质小胶质细胞对神经元突触的吞噬情况。(三)C1q/C3-CD11b途径过度激活诱导原代小胶质细胞对神经元突触过度吞噬建立皮质神经元与小胶质细胞原代共培养体系1.观察PQ处理后外源性C1q对原代小胶质细胞的影响:采用0μmol/L PQ、1μg/ml C1q、0.03μmol/L PQ、0.03μmol/L PQ+1μg/ml C1q处理原代小胶质细胞24 h后,IF观察:小胶质细胞表达补体C3的情况;补体C3与补体受体CD11b共定位情况;吞噬荧光珠实验观察原代小胶质细胞吞噬能力。2.观察PQ处理后外源性C1q对原代皮质神经元的影响:采用0μmol/L PQ、1μg/ml C1q、0.03μmol/L PQ、0.03μmol/L PQ+1μg/ml C1q处理原代神经元24 h后,IF观察:原代皮质神经元的数量、形态变化。3.观察PQ处理后外源性C1q对皮质神经元及小胶质细胞原代共培养体系的影响:采用0μmol/L PQ、1μg/ml C1q、0.03μmol/L PQ、0.03μmol/L PQ+1μg/ml C1q处理原代皮质神经元及原代小胶质细胞共培养体系24 h后,IF观察:皮质神经元及小胶质细胞原代共培养体系中二者位置变化;原代小胶质细胞对原代神经元突触的吞噬及突触数量变化。结果(一)神经元突触损伤是PQ诱导小鼠非运动功能障碍早期病理标志***对各组小鼠运动功能的影响:旷场实验结果显示,与对照组比较,PQ染毒组小鼠在中央区域停留时间百分比及移动距离无明显变化,差异不具有统计学意义(P>0.05)。爬杆实验结果显示,与对照组比较,各时间节点PQ染毒组小鼠的爬杆时间改变不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。该结果提示,PQ连续28天低剂量染毒未对运动功能产生明显影响。***对各组小鼠认知相关非运动功能的影响:高架十字迷宫实验结果显示,与对照组比较,28天PQ染毒组小鼠开放臂停留时间比值均明显减少(P<0.05),小鼠进入开放区域次数显著减少(P<0.05)。悬尾实验显示,与对照组比较,28天PQ染毒组小鼠悬尾静止时间显著延长(P<0.05)。该结果提示,PQ连续28天低剂量染毒首先对非运动功能产生损伤。***诱导染毒小鼠认知相关脑区神经元及突触变化:IF发现,随着PQ染毒时间,

关键词：百草枯神经免疫毒性补体级联反应小胶质细胞神经元突触

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敌草快百草枯混合中毒怎么办?

中华急诊医学杂志 2023年第2期32卷 147-149页

作者：陈隆望陈潇荣卢中秋温州医科大学附属第一医院急诊中心温州市急危重病与救援医学重点实验室温州325000

敌草快(diquat,DQ)、百草枯(paraquat,PQ)是我国常用除草剂,分别于1958年和1962年上市,具有很好的除草效果,但同时对人畜有很强的毒性,可造成多器官功能衰竭,病死率高达50%~70%^([1])。我国在2016年7月1日起禁售百草枯水剂,在2020年9月2... 详细信息

敌草快(diquat,DQ)、百草枯(paraquat,PQ)是我国常用除草剂,分别于1958年和1962年上市,具有很好的除草效果,但同时对人畜有很强的毒性,可造成多器官功能衰竭,病死率高达50%~70%^([1])。我国在2016年7月1日起禁售百草枯水剂,在2020年9月26日起全面禁售百草枯所有剂型,百草枯在生产使用过程中也被敌草快逐步替代。然而,在市场检测敌草快农药时发现很多敌草快农药中掺有百草枯^([2])。临床实际中,口服敌草快中毒患者体内亦检测到敌草快混合百草枯^([3])。百草枯、敌草快均属联吡啶类除草剂,两者中毒有一定的共性与差异。

关键词：多器官功能衰竭敌草快百草枯除草效果联吡啶类除草剂中毒患者临床实际共性与差异