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百日咳杆菌的分子流行病学研究

临床儿科杂志 2010年第9期28卷 836-839页

作者：欧金玲姚开虎袁林俞桑洁沈叙庄杨永弘北京市石景山医院儿科北京100043 首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所北京100045

目的明确百日咳杆菌分离株的分子分型,比较不同年代分离株的型别差异。方法共25株百日咳菌株,其中18株为2000年至2007年北京儿童医院临床分离株,7株为20世纪70年代分离株,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)2种方法对菌株... 详细信息

目的明确百日咳杆菌分离株的分子分型,比较不同年代分离株的型别差异。方法共25株百日咳菌株,其中18株为2000年至2007年北京儿童医院临床分离株,7株为20世纪70年代分离株,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)2种方法对菌株进行分型。结果 2000年以后菌株MLST分型均为ST2型,PFGE分型分为8种型;20世纪70年代菌株MLST分型均为ST1型,PFGE分为5种型。2000年后菌株与20世纪70年代菌株无相同的PFGE型和MLST型。结论不同时期流行的百日咳杆菌具有不同的分子分型。

关键词：百日咳杆菌脉冲场凝胶电泳多位点序列分型分子流行病学

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百日咳杆菌细胞壁多糖蛋白疫苗的免疫效能

上海免疫学杂志 1999年第3期19卷 169-170,187页

作者：唐学慧李亮刘农行孔宪娥李鲁宁宋丽华张汉民淄博市卫生防疫站

百日咳杆菌以冻融裂解乙醇提取（１组）和用１ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠提取（２组）的百日咳细胞壁多糖蛋白疫苗（ＣＷＰＳＰ），动物实验证明无毒性，经静脉、肌肉及皮下注射等途径以不同剂量给药后，显示良好的免疫原性。血清抗体ＧＭＴ，肌... 详细信息

百日咳杆菌以冻融裂解乙醇提取（１组）和用１ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠提取（２组）的百日咳细胞壁多糖蛋白疫苗（ＣＷＰＳＰ），动物实验证明无毒性，经静脉、肌肉及皮下注射等途径以不同剂量给药后，显示良好的免疫原性。血清抗体ＧＭＴ，肌肉途径１组为５０７９７±０２１２８；２组为２１７７３±０１５８６，两组相比１组优于２组（Ｐ＜００１）。然后用ＤＴＰ、１组＋ＤＴ、２组＋ＤＴ以及单用１组ＣＷＰＳＰ免疫后，血清抗体ＧＭＴ：对照组为阴性，ＤＴＰ组为１∶２０００，１组＋ＤＴ为１∶３２０００，２组＋ＤＴ为１∶６９１０５，单用１组为１∶１２８０００。动物实验证实了ＣＷＰＳＰ的免疫效能，此种抗原为含有多种成分安全、有效的百日咳疫苗。

关键词：百日咳杆菌 CWPSP 免疫程序醋酸钠裂解提取

百日咳杆菌气管细胞毒素的结构组成及其致病性研究

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国外医学（微生物学分册） 1991年第3期14卷 116-118页

作者：吴清明罗海波浙江医科大学微生物学教研室

本文重点介绍应用快原子轰击质谱法和高效液相色谱法新技术分析百日咳气管细胞毒素(Tracheal Cytotoxin,TCT)的结构和化学组成。TCT由百日咳杆菌细胞壁肽聚糖派生,与百日咳杆菌毒力决定簇相关,它参与百日咳致病作用,并与其它百日咳毒素... 详细信息

本文重点介绍应用快原子轰击质谱法和高效液相色谱法新技术分析百日咳气管细胞毒素(Tracheal Cytotoxin,TCT)的结构和化学组成。TCT由百日咳杆菌细胞壁肽聚糖派生,与百日咳杆菌毒力决定簇相关,它参与百日咳致病作用,并与其它百日咳毒素成分协同作用引起百日咳一系列病理生理学变化,造成组织重叠性损害。

关键词：百日咳杆菌气管细胞毒素结构

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百日咳杆菌菌株的血清分型

国外医学（微生物学分册） 1991年第1期14卷 30-32页

作者： Robinson A 魏博

百日咳杆菌血清分型方案是以特异性凝集原(AGG)为基础而制定的。本文结合目前对一些AGG生化性质的了解,回顾了近年来在百日咳杆茴菌株血清分型方面出现混乱的原因,阐明了需对原方案进行重新评价的理由,同时提出了一个新的以菌毛组分为... 详细信息

百日咳杆菌血清分型方案是以特异性凝集原(AGG)为基础而制定的。本文结合目前对一些AGG生化性质的了解,回顾了近年来在百日咳杆茴菌株血清分型方面出现混乱的原因,阐明了需对原方案进行重新评价的理由,同时提出了一个新的以菌毛组分为依据的简化血清分型方案。

关键词：百日咳杆菌血清分型

百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素的功能性应用研究进展

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广东医学 2010年第2期31卷 247-249页

作者：石碧珠孟民杰张华捷中国药品生物制品检定所血清室北京100050 广东药学院生命科学与生物制药学院广州510006

百日咳杆菌分泌的腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, CyaA)是百日咳杆菌的重要致病因子之一,同时也是诱发机体产生抗百日咳免疫的潜在保护性抗原之一.近年来的研究表明,CyaA不仅具有腺苷酸环化酶活性和溶血素活性,还在疫苗佐... 详细信息

百日咳杆菌分泌的腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, CyaA)是百日咳杆菌的重要致病因子之一,同时也是诱发机体产生抗百日咳免疫的潜在保护性抗原之一.近年来的研究表明,CyaA不仅具有腺苷酸环化酶活性和溶血素活性,还在疫苗佐剂、抗原呈递、蛋白疫苗载体、肿瘤治疗和免疫调节等方面,有深入的研究价值.本文主要对百日咳杆菌CyaA的应用研究现状作一综述,旨在对CyaA的研究价值进行探讨.

关键词：腺苷酸环化酶百日咳杆菌毒素功能性免疫调节保护性抗原溶血素活性致病因子

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百日咳杆菌抗生素敏感性检测结果分析

临床儿科杂志 2008年第6期26卷 483-485页

作者：欧金玲袁林姚开虎沈叙庄杨永弘首都医科大学附属北京儿童医院微生物免疫室北京100045

目的了解百日咳杆菌对抗生素的敏感性情况,为临床合理用药提供依据。方法以2000年7月至2007年4月北京儿童医院临床分离的16株和20世纪70年代的4株百日咳菌株为研究对象,采用琼脂稀释法、E test法和纸片扩散法检测菌株对红霉素的敏感性,... 详细信息

目的了解百日咳杆菌对抗生素的敏感性情况,为临床合理用药提供依据。方法以2000年7月至2007年4月北京儿童医院临床分离的16株和20世纪70年代的4株百日咳菌株为研究对象,采用琼脂稀释法、E test法和纸片扩散法检测菌株对红霉素的敏感性,其中琼脂稀释法还检测了菌株对阿齐霉素、克拉霉素、克林霉素和环丙沙星4种抗生素的敏感性。结果3种方法检测2000年以后菌株对红霉素的敏感性结果显示,琼脂稀释法MIC均为0.125μg/ml,E test MIC范围0.047～0.125μg/ml,纸片扩散法抑菌环直径都>42 mm(范围45～55 mm)。琼脂稀释法检测2000年以后菌株阿齐霉素、克林霉素的MIC范围分别为0.031～0.063μg/ml、0.25～2μg/ml;克拉霉素和环丙沙星的MIC分别为1μg/ml和2μg/ml。与20世纪70年代百日咳菌株相比,2000年以后菌株对5种抗生素的敏感性没有下降。结论本研究未发现红霉素耐药株,2000年以后分离的16株百日咳菌株对红霉素均敏感,治疗百日咳仍可首选红霉素。

关键词：百日咳杆菌抗生素敏感性

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百日咳杆菌气雾感染小鼠模型的建立

医学研究生学报 2017年第8期30卷 808-812页

作者：牟大超梁疆莉高娜顾琴章孟学戴永娟姬秋彦孙明波杨卉娟中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明医学硕士研究生650118

目的百日咳感染动物模型的建立在以百白破为基础的联合疫苗的研究中具有重要意义。文中探讨不同百日咳攻击菌浓度和不同攻毒时间对BALB/c小鼠的气雾感染效果。方法将BALB/c雌鼠按随机数字表法分为低浓度长时间组、中浓度短时间组、中浓... 详细信息

目的百日咳感染动物模型的建立在以百白破为基础的联合疫苗的研究中具有重要意义。文中探讨不同百日咳攻击菌浓度和不同攻毒时间对BALB/c小鼠的气雾感染效果。方法将BALB/c雌鼠按随机数字表法分为低浓度长时间组、中浓度短时间组、中浓度长时间组、高浓度长时间组和阴性对照组,每组10只。气雾方式攻击小鼠,109cfu/m L攻毒30min(低浓度长时间组)、1010cfu/m L攻毒15 min(中浓度短时间组)、1010cfu/m L攻毒30 min(中浓度长时间组)、1011cfu/m L攻毒30 min(高浓度长时间组),阴性对照组用等渗盐水气雾攻击30 min。分别于攻毒后0、3、7、14、21 d采血测白细胞数和分离肺组织匀浆培养,计算百日咳杆菌肺部克隆数。结果百日咳杆菌气雾攻击小鼠后第3天,与阴性对照组比较,高浓度长时间组白细胞数明显增长(P百日咳杆菌存在;第7天和第14天,4个实验组小鼠肺部菌落数均明显升高(P百日咳杆菌感染小鼠模型。

关键词：小鼠模型百日咳杆菌气雾攻击

百日咳杆菌CpG-ODNs对变应性哮喘小鼠Toll信号分子的实验研究

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百日咳杆菌CpG-ODNs对变应性哮喘小鼠Toll信号分子的实验研究

作者：张宝袁扬州大学

学位级别：硕士

变应性哮喘是以IgE过量合成、嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润、气道高反应性及气道重塑为主要特征的慢性气道炎症。哮喘发病率逐年上升,严重影响患者日常生活,有时甚至是致命的。近年来研究发现,变应性哮喘是一种Th1/Th2反应失衡的呼吸道疾... 详细信息

变应性哮喘是以IgE过量合成、嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润、气道高反应性及气道重塑为主要特征的慢性气道炎症。哮喘发病率逐年上升,严重影响患者日常生活,有时甚至是致命的。近年来研究发现,变应性哮喘是一种Th1/Th2反应失衡的呼吸道疾病,哮喘病程中,Th2反应占主导作用,产生Th2类细胞因子从而阻抗Thl反应,介导了嗜酸性粒细胞炎症及B细胞分泌IgE过程,调节Th1/Th2平衡调控哮喘已成为公认的治疗方法。百日咳杆菌为一类致病微生物,可诱发百日咳疾病。近年来医学工作者将灭活百日咳杆菌疫苗,白喉疫苗及破伤风疫苗合用形成百白破联用疫苗,以预防这三类疾病。也有研究发现灭活百日咳杆菌为一种Thl反应刺激剂,可产生防治变应性疾病作用。进一步研究发现灭活全细胞百日咳杆菌对小鼠变应性哮喘具有治疗作用,这可能与其中包含抗变应性哮喘活性的CpG-ODNs有关。非甲基化含CpG基序寡核苷酸单链（unmethylated CpG motif containing oli godeoxynucleotides,简称CpG-ODNs）为一类具有抗变应性疾病活性的DNA序列。目前研究发现4种亚型,即A型-D型。脊椎动物含有无活性的甲基化CpG-ODNs,无脊椎动物含有有活性的非甲基化CpG-ODNs。CpG-ODNs进入机体后,以胞吞作用进入细胞,与细胞内体中TOLL样受体-9（TLR-9）结合,激活TLR共刺激通路,诱导核因子（AP-1, NF-kappaB）转录,促进Thl细胞因子合成,抑制Th2型细胞因子分泌,使哮喘中失衡的Th1/Th2反应恢复平衡,产生调节变应性哮喘作用。前期研究主要涉及给予变应性哮喘小鼠灭活百日咳杆菌,对其调节变应性哮喘机制进行评价。结果发现给药后哮喘小鼠BALF中炎症细胞数下降,且外周血中IL-4/IFN-y恢复平衡,具有一定调节变应性哮喘机制的作用,这种作用可能由菌体内的CpG-ODNs产生,但对百日咳杆菌CpG-ODNs防治哮喘的机制研究未见报道。本研究基于前期研究,应用软件获取9条百日咳杆菌CpG-ODNs,进行抑制炎症细胞反应实验,筛选出抑制炎症细胞最佳CpG-ODNs序列seq A。后续研究中应用seqA给予OVA致敏小鼠慢性哮喘模型,检测其对变应性哮喘小鼠肺泡灌洗液（BALF）中Thl/Th2细胞因子（IFN-y/IL-4）及血管内皮生长因子（VEGF）产生量的影响,并通过RT-PCR和western blot法分别检测小鼠脾细胞TLR-9mRNA及肺组织TLR-9蛋白表达量。结果发现,seq A抑制炎症细胞效果最佳,其能够提高小鼠慢性哮喘模型BALF中IFN-y含量,抑制IL-4含量;但对VEGF作用并不明显。且其能够有效上调小鼠脾细胞TLR-9mRNA和肺组织TLR-9蛋白表达量,所有实验组中腹腔注射（ip）组均优于灌胃（ig）组。结果表明,百日咳杆菌CpG-ODNs具有抑制炎症细胞活性,seq A能够有效调节Th1/Th2反应,且其对TLR-9具有上调作用,证明这种活性与激活TLR-9信号通路有关,实验发现给予CpG-ODNs时ip途径优于ig途径。

关键词：变应性哮喘百日咳杆菌 CpG-ODNs Th1/Th2 Toll样受体9

百日咳杆菌气管定植因子（TcfA）的功能分析

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百日咳杆菌气管定植因子（TcfA）的功能分析

作者：柯兵兵中国食品药品检定研究院

学位级别：硕士

百日咳是由百日咳鲍特氏菌（以下简称百日咳杆菌）引起的一种呼吸道传染病，在婴幼儿当中较为常见。百日咳杆菌致病机理包括粘附、侵袭、产毒等一系列的过程。丝状血凝素（Filamentous hemagglutmin）、粘附素（Pertactin)、百日咳气管... 详细信息

百日咳是由百日咳鲍特氏菌（以下简称百日咳杆菌）引起的一种呼吸道传染病，在婴幼儿当中较为常见。百日咳杆菌致病机理包括粘附、侵袭、产毒等一系列的过程。丝状血凝素（Filamentous hemagglutmin）、粘附素（Pertactin)、百日咳气管定植因子（Tracheal colonization factor;TcfA）等诸多膜表面蛋白参与到细菌的粘附过程。百日咳气管定植因子是百日咳杆菌膜表面蛋白，相关文献报道，推测该蛋白可能是百日咳杆菌的粘附分子，但对其粘附功能尚未进行系统的验证。因此本研究采用DNA重组技术，在大肠杆菌（BL21;DE3）内表达TcfA蛋白，并纯化重组TcfA蛋白。然后通过重组表达菌的体外细胞粘附实验、重组蛋白免疫荧光实验、竞争抑制实验证明TcfA蛋白的黏附作用。并在此基础上，就TcfA蛋白第317-319位RGD三联肽的功能进行验证。同时通过构建FHA-PRN-基因缺失株，探究TcfA蛋白在粘附过程中的重要性，并尝试找出TcfA蛋白与经典模型细胞HeLa相互作用的受体。通过基因重组技术成功的表达了TcfA蛋白，并纯化出纯度达85%的重组蛋白，免疫印迹实验结果显示，重组蛋白能与疫苗生产菌株（CS菌）全菌体血清发生抗原抗体反应，说明重组蛋白具有良好的免疫反应性和抗原特异性;玻片凝集实验和V管凝集实验证明TcfA蛋白表达于大肠杆菌膜表面;荧光粘附试验证实表达有TcfA的大肠杆菌与含有空载体的大肠杆菌对经典模式细胞的粘附有明显的差异，CFU实验定量证实两者之间具有统计学差异。粘附ELISA实验从另一技术方法反映了两者之间具有统计学差异。重组蛋白的免疫荧光实验间接反映了TcfA蛋白与细胞受体的相互作用，重组蛋白的竞争抑制实验表明TcfA蛋白能竞争抑制重组TcfA大肠杆菌的粘附，并表现出蛋白浓度的依赖性。TcfA小鼠多抗封闭实验结果显示，封闭了重组大肠杆菌膜表面的TcfA蛋白，细菌的粘附率出现明显的下降，说明了TcfA蛋白的粘附的特异性（依赖性）。含RGD的短肽与含RGE的短肽的竞争抑制试验表明，TcfA蛋白可能通过其氨基酸位点上的RGD模序发挥作用。庆大霉素胞外杀伤实验是检测病原菌是否具有入侵宿主细胞能力的有效方法之一，该方法主要是检测粘附分子是否介导了病原菌的入侵。实验结果显示，TcfA蛋白并不介导重组大肠杆菌入侵HeLa细胞。FHA、PRN基因缺失株与抗TcfA小鼠多克隆抗体作用后，粘附力相比于FHA、PRN基因缺失株和CS野生株有较明显的下降，说明TcfA蛋白作为百日咳杆菌膜表面的一个粘附因子，在细菌的粘附过程中发挥着重要的作用。GST pull down实验初步证明Myosin-9蛋白可能是TcfA蛋白与HeLa细胞相互作用的受体，但需要进一步验证。

关键词：百日咳杆菌 TcfA蛋白粘附