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白花前胡丁素对人炎性牙周膜细胞增殖及成骨活性影响的研究

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白花前胡丁素对人炎性牙周膜细胞增殖及成骨活性影响的研究

作者：于彩云兰州大学

学位级别：硕士

目的:牙周炎导致牙周组织缺损及后续的修复再生问题仍是目前临床工作的难点。目前牙周炎治疗的方法主要有牙周基础治疗、手术清创治疗及抗生素药物。其中抗生素类药物使用会产生耐药以及疗效的不确定性,长期服用可导致口腔微生态菌群失... 详细信息

目的:牙周炎导致牙周组织缺损及后续的修复再生问题仍是目前临床工作的难点。目前牙周炎治疗的方法主要有牙周基础治疗、手术清创治疗及抗生素药物。其中抗生素类药物使用会产生耐药以及疗效的不确定性,长期服用可导致口腔微生态菌群失调。况且,在特殊的口腔炎性微环境下,要实现牙周缺损组织的再生与修复尤为困难。中药具有低毒高效、高度耐药、抗炎、促免疫以及抗肿瘤等多重生物学效应,被广泛应用于临床治疗。白花胡前丁素（Peucedanum praeruptorum Dunn,PD）是从前胡中分离得到的吡诺香豆素类化合物,先前报道了其具有显著的抗炎和抗肿瘤活性。因此,本研究拟探讨PD对牙周炎患者牙周膜细胞增殖与成骨活性的影响,为牙周炎临床药物治疗提供一种低毒高效的策略。方法:1.人牙周膜细胞原代培养及相关鉴定（1）分别从健康患者（正畸减数/上颌智齿）患牙上提取健康人牙周膜细胞（H-PDLCs）以及从牙周炎患者（牙槽骨重度吸收/III°松动）患牙上提取炎性人牙周膜细胞（P-PDLCs）进行原代培养。（2）利用免疫荧光鉴定H-PDLCs及P-PDLCs的来源。（3）采用茜素红S（ARS）染色鉴定H-PDLCs及P-PDLCs诱导成骨分化能力。（4）对于已鉴定的细胞,按照实验要求进行分组:健康细胞组（阴性对照组-H）,炎性细胞组（炎性组-P）、不同浓度PD组（实验组）、盐酸米诺环素组（阳性对照组-YS）。采用CCK-8检测健康细胞组及炎性细胞组在1天、2天、3天、5天时细胞增殖情况,且以抗生素类药物-盐酸米诺环素（100ug/ml）作为阳性对照,检测PD浓度为10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml时对P-PDLCs毒性及增殖的影响。***对P-PDLCs抗炎及诱导成骨分化能力的评价（1）通过ELISA检测P-PDLCs中炎症因子TNF-ɑ和IL-1β的表达情况。（2）采用实时聚合酶链反应（RT-q PCR）检测各实验组中炎症因子（TNF-ɑ和IL-1β）及成骨相关因子（RUNX-2、OCN和ALP）m RNA的表达情况。（3）采用茜素红S（ARS）染色评估PD对P-PDLCs诱导成骨分化能力的影响。（4）通过免疫荧光观察PD作用下P-PDLCs细胞骨架结构改变的情况。（5）蛋白印迹（WB）检测PD作用下P-PDLCs成骨相关蛋白RUNX-2及OCN的表达情况。结果:H-PDLCs及P-PDLCs形态主要呈长梭形,似成纤维细胞。培养一段时间后,镜下观察发现P-PDLCs相较于H-PDLCs显得更长且体积较大。免疫荧光染色得出,H-PDLCs及P-PDLCs中波形蛋白表达,而角蛋白不表达,可证明H-PDLCs及P-PDLCs均来源于间充质,是人牙周组织来源。茜素红S（ARS）染色结果见大小不等的、橙红色的小钙化结节,表明H-PDLCs及P-PDLCs都具有诱导成骨分化的能力,且发现H-PDLCs组钙化结节多于P-PDLCs组,说明其成骨分化能力强于P-PDLCs。CCK-8结果发现,H-PDLCs及P-PDLCs的增殖有时间依赖性,随着时间的延长呈正向增长,且H-PDLCs增殖较P-PDLCs快（P＜0.05）,PD浓度在40ug/ml以下对P-PDLCs细胞活力无明显影响,且PD能在一定程度上促进P-PDLCs的增殖（P＜0.05）。ELISA结果示,从牙周炎患者牙周韧带中提取的牙周膜细胞中炎性因子TNF-α及IL-1β的含量显著高于从健康患者牙周韧带中提取的牙周膜细胞（P＜0.05）,这表明从牙周炎患者牙周组织中提取的细胞呈炎性表达,可以记为炎性牙周膜细胞,即P-PDLCs。PD作用于P-PDLCs后,炎性因子TNF-ɑ及IL-1β的表达有所降低,且随着PD浓度的增加呈线性降低（P＜0.05）,说明PD对P-PDLCs有显著的抗炎活性。但盐酸米诺环素组炎性因子TNF-ɑ和IL-1β的表达较PD组低,表明PD虽具有一定抗炎功能,但抗炎效果不及盐酸米诺环素组。RT-q PCR结果显示,PD对P-PDLCs炎症因子TNF-ɑ及IL-1β均有明显抑制作用（P＜0.05）。茜素红S（ARS）染色、PCR及WB结果表明:PD对P-PDLCs成骨及成骨相关基因RUNX-2、ALP及OCN的表达都有明显促进作用,但P-PDLCs诱导成骨分化能力较H-PDLCs性能弱（P＜0.05）。PD在20μg/ml和30μg/ml时,RUNX-2、ALP及OCN等成骨相关因子的m RNA表达显著增加（P＜0.05）,且与盐酸米诺环素组m RNA的表达相近,在PD浓度为20μg/ml时RUNX-2、ALP及OCN等成骨相关因子的m RNA表达最高,此结果表明PD浓度为20μg/ml时可能是成骨效果最好的药物浓度。免疫荧光染色结果表明在无PD作用时,P-PDLCs

关键词：白花前胡丁素人牙周膜细胞炎症微环境成骨抗炎

GC测定白花前胡中白花前胡丙素和白花前胡丁素的含量

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中国药学杂志 2001年第2期36卷 122-125页

作者：徐勤刘布鸣张正行桂林医学院药学系药物分析教研室广西桂林541004 广西壮族自治区中医药研究所仪分室广西南宁530022 中国药科大学药物分析研究室江苏南京210009

目的　建立了GC测定白花前胡根中白花前胡丙素 (Pd Ⅰa)和白花前胡丁素 (Pd Ⅱ )含量的方法。方法　采用SE 30石英毛细柱 (0 .2 2mm× 2 5m) ,液膜厚度 0 .2 5 μm ,FID检测器 ,以正二十五烷为内标物。结果　Pd Ⅰa和Pd Ⅱ的标准曲线... 详细信息

目的　建立了GC测定白花前胡根中白花前胡丙素 (Pd Ⅰa)和白花前胡丁素 (Pd Ⅱ )含量的方法。方法　采用SE 30石英毛细柱 (0 .2 2mm× 2 5m) ,液膜厚度 0 .2 5 μm ,FID检测器 ,以正二十五烷为内标物。结果　Pd Ⅰa和Pd Ⅱ的标准曲线分别在0 .175～ 1.919μg(r=0 .9995 )和 0 .0 86～ 0 .95 0 μg(r=0 .9996 )之间有较好线性关系 ,Pd Ⅰa和Pd Ⅱ的加样回收率分别为 (98.2 8± 2 .0 7) %和 (99.5 8± 2 .44 ) % ,并将GC和HPLC测定Pd Ⅰa ,Pd Ⅱ结果比较 ,两方法之间无显著性差异。结论　本法简便 ,快速 ,准确 ,灵敏度高 ,对于前胡的质量检测有一定参考价值。

关键词：白花前胡白花前胡丙素白花前胡丁素毛细管气相色谱法中药

白花前胡丁素对慢性阻塞性肺疾病慢性缺氧模型大鼠心肌损伤的防护作用

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中国药业 2024年第22期33卷 59-64页

作者：杜佩珊姜爱雯田艳珍赵东坡毛建云宋永建河北省张家口市第一医院河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院河北张家口075000

目的探讨白花前胡丁素(PD)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)慢性缺氧(CH)模型大鼠心肌损伤的防护作用。方法采用烟熏联合鼻饲脂多糖复制COPD大鼠模型,正常气压下持续缺氧(氧浓度9.5%~10.5%)处理COPD模型大鼠4周,以复制COPD+CH大鼠模型。实验分... 详细信息

目的探讨白花前胡丁素(PD)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)慢性缺氧(CH)模型大鼠心肌损伤的防护作用。方法采用烟熏联合鼻饲脂多糖复制COPD大鼠模型,正常气压下持续缺氧(氧浓度9.5%~10.5%)处理COPD模型大鼠4周,以复制COPD+CH大鼠模型。实验分为COPD组(等体积生理盐水),COPD+CH组(等体积生理盐水),PD低、高剂量组(0.1、0.5 mg/mL),核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路抑制剂全反式维甲酸(ATRA)组(0.5 mg/kg),PD高剂量+ATRA组(PD 0.5 mg/mL+ATRA 0.5 mg/kg),腹腔注射药物或生理盐水,PD及生理盐水给予频率为每日1次、连续4周,ATRA为每日1次、连续2周(建模第15天起给药)。采用苏木素-伊红(HE)染色、TUNEL法分析心肌组织损伤程度及细胞凋亡情况并计算凋亡率,酶联免疫吸附法测定肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、丙二醛(MDA)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,流式细胞仪测定活性氧(ROS)水平,Western blot法测定Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果与COPD组比较,COPD+CH组大鼠心肌组织病理损伤及炎性反应加重,细胞凋亡率显著升高;大鼠血清CK-MB、LDH、cTnI、ROS、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高;Nrf2蛋白表达水平显著降低,HO-1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与COPD+CH组比较,PD低、高剂量组大鼠心肌组织病理损伤及炎性反应减轻,细胞凋亡率显著降低,大鼠血清CK-MB、LDH、cTnI、ROS、IL-6、IL-1β、MDA水平显著降低,大鼠心肌组织Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著升高;ATRA组大鼠心肌组织Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与ATRA组比较,PD高剂量+ATRA组大鼠心肌组织Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论PD可保护COPD+CH模型大鼠心肌,其机制可能与提升Nrf2/HO-1信号通路活性有关。

关键词：慢性阻塞性肺疾病慢性缺氧白花前胡丁素心肌损伤 Nrf2/HO-1信号通路

RP-HPLC测定白花前胡中Pd-Ⅰa和Pd-Ⅱ的含量

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华西药学杂志 2001年第3期16卷 215-216页

作者：徐勤邓立东刘布鸣桂林医学院药学系广西桂林541004 桂林医学院附院广西桂林541001 广西壮族自治区中医药研究所广西南宁530022

目的：建立ＲＰ－ＨＰＬＣ测定白花前胡根中白花前胡丙素（Ｐｄ－Ｉａ）和白花前胡丁素（Ｐｄ－Ⅱ）的含量。方法：采用Ｓｈｉｍ－Ｐａｃｋ　ＣＬＣ－ＯＤＳ柱，甲醇－水（７９：２１）为流动相，流速为１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１，以 ... 详细信息

目的：建立ＲＰ－ＨＰＬＣ测定白花前胡根中白花前胡丙素（Ｐｄ－Ｉａ）和白花前胡丁素（Ｐｄ－Ⅱ）的含量。方法：采用Ｓｈｉｍ－Ｐａｃｋ　ＣＬＣ－ＯＤＳ柱，甲醇－水（７９：２１）为流动相，流速为１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１，以Ｐｄ－Ⅰａ、Ｐｄ－Ⅱ为对照品，外标法峰面积定量，紫外检测（λ＝３２３ｎｍ）。结果：Ｐｄ－Ⅰａ、Ｐｄ－Ⅱ线性范围分别为０．０８～０．８μｇ和０．０６４～０．２８μｇ，ｒ＝０．９９９９和ｒ＝０．９９９９，平均回收率分别为９８．９０％和９８．９１％。结论：方法准确，简便，灵敏度高，快速，重复性好。

关键词：白花前胡白花前胡丙素白花前胡丁素反相高效液相色谱含量测定

《中国药学杂志》2001年第36卷关键词索引

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中国药学杂志 2001年第12期 73-86页

胶束电动毛细管色谱法测定白花前胡中丙素和丁素的含量

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胶束电动毛细管色谱法测定白花前胡中丙素和丁素的含量

中国化学会第十四届有机分析及生物分析学术研讨会

作者：王凤英何聿张兰陈国南食品安全分析与检测技术教育部重点实验室运动科学研究中心

建立了一种同时测定白花前胡药材中白花前胡丙素和白花前胡丁素含量的胶束电动毛细管色谱法。以未涂层熔融石英毛细管(75 μm(i.d.)×54 cm) 为分离通道,样品溶液以30 mbar 压力进样8 s;电泳介质为7.5 mmol/L KHPO- NaBO(pH 7.0),含10 m... 详细信息

建立了一种同时测定白花前胡药材中白花前胡丙素和白花前胡丁素含量的胶束电动毛细管色谱法。以未涂层熔融石英毛细管(75 μm(i.d.)×54 cm) 为分离通道,样品溶液以30 mbar 压力进样8 s;电泳介质为7.5 mmol/L KHPO- NaBO(pH 7.0),含10 mmol/L SDS,0.20%Triton-X100的溶液;分离电压:25 kV;检测波长:320 nm;柱温:25℃,两种待测物在8 min 内达到分离。方法重现性良好,两组分的迁移时间和峰面积的 RSD 均小于4.0%(n=5)。两物质分别在2.0～200 μg/mL(R=0.9996)、0.36～50.0μg/mL(R=0.9995)浓度范围内与峰面积成良好的线性关系。用于白花前胡药材中丙素和丁素的含量测定,取得了较为理想的结果。此方法有望用于作为白花前胡药材质量鉴定的一种方法。

关键词：胶束电动毛细管色谱白花前胡白花前胡丙素白花前胡丁素

来源： cnki会议评论

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广西前胡的化学成分研究

中草药 1995年第7期26卷 342-343,357页

作者：黄平赖茂祥郑学忠卢春琼广西中医药研究所南宁530022 广西中医学院

首次从前胡属新种广西前胡Peucedanumguangxiense根的脂溶性部分首次分得5个化合物，经理化常数和光谱分析，鉴定为白花前胡丁素〔（＋）－praeruptorinB，Pd-Ⅰ，Ⅲ），珊瑚菜素（Phellopterin，Ⅱ），异欧前胡素（isoimperatorin，Ⅲ... 详细信息

首次从前胡属新种广西前胡Peucedanumguangxiense根的脂溶性部分首次分得5个化合物，经理化常数和光谱分析，鉴定为白花前胡丁素〔（＋）－praeruptorinB，Pd-Ⅰ，Ⅲ），珊瑚菜素（Phellopterin，Ⅱ），异欧前胡素（isoimperatorin，Ⅲ），佛子柑内酯（bergapten，Ⅳ）和β-谷甾醇（Ⅴ）。

关键词：广西前胡白花前胡丁素异欧前胡素珊瑚菜素

用GC/MS、GC分析中药前胡中白花前胡丙素、丁素和紫花前胡苷元

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广西科学 2002年第4期9卷 294-297页

作者：刘布鸣徐勤广西中医药研究所南宁市东葛路201530022 中国药科大学

为快速鉴别中药白花前胡 (Peucedanum praeruptorum Dunn.)和紫花前胡 (Peucedanum decursivumMaxim .) ,用气相色谱 /质谱 (GC/ MS)、气相色谱法 (GC)分别定性、定量分析白花前胡丙素 (Pd- a)、丁素 (Pd- ) )和紫花前胡苷元 (Nodakene... 详细信息

为快速鉴别中药白花前胡 (Peucedanum praeruptorum Dunn.)和紫花前胡 (Peucedanum decursivumMaxim .) ,用气相色谱 /质谱 (GC/ MS)、气相色谱法 (GC)分别定性、定量分析白花前胡丙素 (Pd- a)、丁素 (Pd- ) )和紫花前胡苷元 (Nodakenetin)。在白花前胡中检出白花前胡丙素 (M/ Z386 )和丁素 (M/ Z4 2 6 ) ,但未检出紫花前胡苷元 ;在紫花前胡中检出紫花前胡苷元 (M/ Z 2 4 6 ) ,但未检出白花前胡丙素和丁素。线性关系 :YPd- a=1.111XPd- a+0 .0 2 1(n =6　 r=0 .9995 ) ,线性范围 :0 .175～ 1.919μg。 YPd- =1.189XPd- - 0 .0 13(n =6　 r=0 .9996 ) ,线性范围 :0 .0 86～ 0 .95 0 μg。YNodakenetin =0 .90 1XNodakenetin- 0 .0 2 4 (n =6　 r=0 .9999) ,线性范围 :0 .0 89～ 1.0 6 2μg。回收率 :白花前胡丙素 97.2 9% ,白花前胡丁素 98.81% ,紫花前胡苷元 96 .34%。分析结果表明 ,不同产地药材样品中各自特征成分含量不同 ,分析中未能找到白花前胡和紫花前胡苷元共有的相同的有效成分或指标性成分。表明可用 GC/ MS区分白花前胡和紫花前胡苷元。

关键词： GC/MS GC 白花前胡丙素白花前胡丁素紫花前胡苷元气相色谱/质谱中药成分分析

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前胡走势分析

全国药材信息 2008年第11期 9-9页

作者：王一鸣

一、药用价值分析前胡为常用中药材，别名：倍前胡、土前胡等。本品为伞形科植物白花前胡及紫花前胡的干燥根。为《中华人民共和国药典》1990年版收载。前胡味苦、辛，性微寒。归肺经。具散风清热、降气化痰的功能。临床上多用于肺热咳... 详细信息

一、药用价值分析前胡为常用中药材，别名：倍前胡、土前胡等。本品为伞形科植物白花前胡及紫花前胡的干燥根。为《中华人民共和国药典》1990年版收载。前胡味苦、辛，性微寒。归肺经。具散风清热、降气化痰的功能。临床上多用于肺热咳嗽，痰多，痰热喘满，咯痰黄稠等症。此外据报道前胡对抑制肿瘤生长尚具一定疗效，民间亦用于对肿瘤患者的辅助治疗。主要成分：白花前胡根含挥发油、多种香豆素，主要有白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡丙素、白花前胡丁素；尚含微量紫花前胡苷及D-甘露醇。紫花前胡根含挥发油、香豆素，主要有紫花前胡苷、伞形花内酯及甘露醇等。主要药理作用：通过收集麻醉猫气管粘液分泌物的方法证明口服紫花前胡煎剂1克，千克，能显著增加呼吸道粘液的分泌，故具祛痰作用。用1％碘液1～1．5毫升注入猫的肋膜腔引起咳嗽，服前胡煎剂0.8-2克／千克，并无明显止咳作用。紫花前胡苷元有抗菌及抗真菌作用。

关键词：紫花前胡苷元《中华人民共和国药典》白花前胡甲素 D-甘露醇呼吸道粘液抑制肿瘤生长白花前胡丙素白花前胡丁素