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白细胞介素24对急性白血病骨髓单个核细胞生长的影响

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实用医学杂志 2014年第11期30卷 1760-1763页

作者：农卫霞潘歆魏娟吴广胜石河子大学医学院第一附属医院血液科 832000 石河子大学医学院第一附属医院检验科 832000

目的:探讨白细胞介素24(IL-24)对成人急性白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)体外生长的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:随机选择在石河子大学一附院住院的急性白血病患者15例,均经FAB分型或免疫学分型确诊,其中确诊未治的成人急性淋... 详细信息

目的:探讨白细胞介素24(IL-24)对成人急性白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)体外生长的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:随机选择在石河子大学一附院住院的急性白血病患者15例,均经FAB分型或免疫学分型确诊,其中确诊未治的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者5例,成人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者10例。取患者骨髓,分离单个核细胞,以不同浓度IL-24作用于成人急性白血病BMMNC。应用四氮唑蓝(MTT)比色还原法,检测IL-24对急性白血病BMMNC体外生长的影响;采用AnnexinV-FITC染色流式细胞术,观察检测IL-24对急性白血病BMMNC增殖状况的影响;利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测IL-24对急性白血病BMMNC中caspase-3和bcl-2表达的影响。结果:MTT法发现IL-24对体外培养的白血病BMMNC有明显的生长抑制作用,且呈时间、剂量依赖性,与阴性对照组相比差异有显著性(P24浓度50 ng/mL作用于急性白血病BMMNC 48 h后,Annexin V-PI检测结果显示凋亡率为(39.21±5.79)%,高于对照组(P24处理白血病BMMNC,能够增加caspase-3 mRNA的表达,降低bcl-2 mRNA的表达。结论:IL-24对体外培养的成人急性白血病BMMNC,有明显的生长抑制、诱导凋亡作用。IL-24可以上调caspase-3 mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达,可能是IL-24抑制急性白血病BMMNC生长作用的重要机制。

关键词：白细胞介素24 成人急性白血病骨髓单个核细胞

白细胞介素24对大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响

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中国微侵袭神经外科杂志 2011年第4期16卷 177-179页

作者：刘英姿张磊单保恩张学新河北医科大学第四医院神经外科石家庄050012 河北医科大学第四医院科研中心石家庄050012

目的探讨白细胞介素24(IL-24)基因对荷瘤大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只,分别接种IL-24/C6细胞(转染IL-24基因的C6鼠脑胶质瘤细胞)和C6鼠脑胶质瘤细胞。接种21 d后,采用RT-PCR、W... 详细信息

目的探讨白细胞介素24(IL-24)基因对荷瘤大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只,分别接种IL-24/C6细胞(转染IL-24基因的C6鼠脑胶质瘤细胞)和C6鼠脑胶质瘤细胞。接种21 d后,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测两组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白的表达,采用流式细胞学检测肿瘤细胞凋亡率。结果 RT-PCR检测显示:实验组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA表达水平明显低于对照组(P细胞学结果显示:实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P24可抑制大鼠胶质瘤中Survivin mRNA和蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。

关键词：神经胶质瘤白细胞介素24 Survivin蛋白 Survivin mRNA 大鼠

白细胞介素24的生物制备、纯化及初步药效学分析

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白细胞介素24的生物制备、纯化及初步药效学分析

作者：于明磊江南大学

学位级别：硕士

白细胞介素24（IL-24）自20世纪90年代中期被发现以来，因其在抗肿瘤方面所表现出的特性，引起国内外众多学者的关注。本文将已构建的含有目的基因IL-24的表达质粒pET21a(+)/IL-24，导入大肠杆菌BL21构建工程菌，并使用大肠杆菌原核表... 详细信息

白细胞介素24（IL-24）自20世纪90年代中期被发现以来，因其在抗肿瘤方面所表现出的特性，引起国内外众多学者的关注。本文将已构建的含有目的基因IL-24的表达质粒pET21a(+)/IL-24，导入大肠杆菌BL21构建工程菌，并使用大肠杆菌原核表达系统对IL-24进行发酵表达，建立了一套IL-24相关的高密度发酵、产物纯化工艺和复性工艺方法。工程菌经5L发酵罐30℃、1mmol/L IPTG诱导发酵10h，获得菌体湿重186.32g，单位体积目的蛋白的表达量达到1800mg/L。发酵结束后，菌体经离心、高压破碎获得IL-24包涵体蛋白，包涵体蛋白经洗涤、Q sepharose和SP sepharose离子交换层析，可得到纯度大于95%的IL-24蛋白，纯化总回收率约为20%。SDS-PAGE检测其分子量约为18.5kD，Western blot杂交以兔抗人IL-24单克隆抗体作为一抗，以HRP酶标抗体（羊抗兔）作为二抗，以DAB为底物进行显色反应，结果显示所获得的目的蛋白为IL-24。将纯化后的IL-24变性溶解，并通过原复性方案（苏州大学提供的复性方案）、梯度复性方案、2DR法复性方案等进行复性，采用B16细胞作为活性检测细胞株对复性后的IL-24蛋白进行活性测定，各复性方案的半数抑制浓度分别为3.67μmol/L、2.03μmol/L、2.56μmol/L，结果显示最佳复性方案为梯度复性方案。同时，对梯度复性所得的IL-24做进一步的肿瘤细胞生长抑制实验和诱导肿瘤细胞凋亡的实验，MTT法检测IL-24对肿瘤细胞的生长抑制，其中当IL-24浓度为90μg/mL时，IL-24对B16细胞的生长抑制率达76%，流式细胞仪检测B16的凋亡情况，凋亡率为45.3%，与对照组差异具有统计学意义(P=0.001824体外活性评价过程中还发现B16细胞为IL-24的敏感细胞株，为以后IL-24活性评价细胞株的选择，提供了参考。

关键词：白细胞介素24 表达纯化活性评价

白细胞介素24在慢性乙型肝炎发病机制中的作用研究

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白细胞介素24在慢性乙型肝炎发病机制中的作用研究

作者：刘仁志南昌大学

学位级别：硕士

目的目前慢性乙型肝炎发病机制尚不十分清楚,而免疫细胞分泌的细胞因子在慢性乙型肝炎的发生、发展和转归中发挥着重要作用,作为新近发现的细胞因子-白细胞介素24 (Interleukin-24,IL-24),研究表明其有多种生物活性,在刺激机体免疫应答... 详细信息

目的目前慢性乙型肝炎发病机制尚不十分清楚,而免疫细胞分泌的细胞因子在慢性乙型肝炎的发生、发展和转归中发挥着重要作用,作为新近发现的细胞因子-白细胞介素24 (Interleukin-24,IL-24),研究表明其有多种生物活性,在刺激机体免疫应答作用方面潜力巨大,但其在慢性乙型肝炎的发病机制中起何种作用及如何起作用,目前尚不清楚,为此本研究将通过观察慢性乙型肝炎患者血清白细胞介素24水平的变化,来探讨白细胞介素24在慢性乙型肝炎中的可能作用及临床意义。方法筛选南昌大学第一附属医院传染科门诊和病房2007年4月至2007年12月收治的90例慢性乙型肝炎患者、20例健康者和30例乙肝病毒携带者为研究对象,诊断符合2000年第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议(西安)制定的《病毒性肝炎防治方案》,用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定全部研究对象的血清IL-24水平;并通过全自动生化仪检测90例慢性乙型肝炎患者血清丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平,实时荧光定量PCR法测定HBV-DNA含量;同时采用ELISA方法检测甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病原学;并进一步分析慢性乙型肝炎患者血清IL-24水平与ALT、TBIL、HBV-DNA临床指标的相关性。计量资料中,两组均数间比较用t检验;三组间比较采用方差分析,如有差异,采用LSD法进行两两比较。结果1、病毒性肝炎患者血清IL- 24水平452.55±38.97(pg/ml)高于健康对照组323.36±30.44 (pg/ml)有统计学差异(P24水平338.78±24.75 (pg/ml)高于健康对照组323.36±30.44(pg/ml),但无统计学意义;慢性乙型肝炎重度患者血清IL- 24水平488.29±32.12(pg/ml),显著高于慢性乙型肝炎轻度患者427.95±23.91(pg/ml) (P0.01)。2、慢性乙型肝炎患者血清IL-24水平与TBIL呈正相关(r=0.833,P24水平498.43±29.61(pg/ml),显著高于高病毒载量慢性乙型肝炎组440.77±31.58(pg/ml),有统计学差异(P24水平显著高于正常对照组,慢性乙型肝炎患者血清IL-24水平与ALT、TBIL呈正相关,低病毒载量慢性乙型肝炎组血清IL- 24水平显著高于高病毒载量慢性乙型肝炎组,IL-24与肝损害程度相关,可能参与慢性乙型肝炎的免疫应答,其在清除HBV的同时也造成肝细胞的损伤。

关键词：白细胞介素24 HBV-DNA 肝炎乙型酶联免疫吸附试验

人白细胞介素24基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

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吉林大学学报（医学版） 2008年第2期34卷 266-269页

作者：杨丹方艳秋许淑芬段秀梅谭岩吉林大学第一医院中心实验室吉林长春130021

目的:构建人白细胞介素24(hIL-24)基因原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达hIL-24蛋白,并测定其生物学活性。方法:用PCR方法从含有hIL-24的质粒中扩增hIL-24cDNA序列,测序鉴定正确后,应用基因重组技术构建PQE/hIL-24,并转入大肠杆菌(***)... 详细信息

目的:构建人白细胞介素24(hIL-24)基因原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达hIL-24蛋白,并测定其生物学活性。方法:用PCR方法从含有hIL-24的质粒中扩增hIL-24cDNA序列,测序鉴定正确后,应用基因重组技术构建PQE/hIL-24,并转入大肠杆菌(***)M15。IPTG诱导表达目的蛋白,镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析鉴定结果,应用外周血单核细胞(PBMCs),通过ELESA法分别在48和72h检测rhIL-24刺激的PBMCs中IL-6、IFN-γ及TNF-α产生情况。结果:获得与GenBank中报道一致的hIL-24基因片段。SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,获得具有hIL-24免疫原性、相对分子质量约为18400目的蛋白。Ni2+-NTAagarose纯化得到单一条带蛋白,获得rhIL-24蛋白刺激的PBMCs,PBMCs分泌IL-6、IFN-γ、TNF-α的水平显著高于未刺激前分泌水平(P24具有与天然hIL-24蛋白相同的生物学活性。结论成功地构建了hIL-24的原核表达载体,在***中高效表达了rhIL-24蛋白,获得了与天然hIL-24蛋白具有相同生物学活性的rhIL-24。

关键词：白细胞介素24 干扰素Ⅱ型白细胞介素6 肿瘤坏死因子

Wnt信号通路和白细胞介素24对宫颈癌细胞放射敏感性的影响

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中国临床药理学杂志 2020年第2期36卷 158-161页

作者：王冬花姜祥兵龚世雄王中显王平武汉市第一医院妇产科湖北武汉430022

目的研究Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)抑制剂(XAV939)在过表达白细胞介素-24(IL-24)的宫颈癌细胞放射敏感性中的作用。方法将细胞实验分为以下2种情况。(1)2组:对照组、IL-24组;(2)4组:IL-24组、XAV939+IL-24组、放射+IL-24组和XAV939+... 详细信息

目的研究Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)抑制剂(XAV939)在过表达白细胞介素-24(IL-24)的宫颈癌细胞放射敏感性中的作用。方法将细胞实验分为以下2种情况。(1)2组:对照组、IL-24组;(2)4组:IL-24组、XAV939+IL-24组、放射+IL-24组和XAV939+放射+IL-24组。对照组转染pAdtrack CMV;IL-24组转染pAdtrack CMV-IL-24;XAV939+IL-24组的Siha细胞转染pAdtrack CMV-IL-24后,用10μmol·L-1XAV939处理;放射+IL-24组的Siha细胞转染pAdtrack CMV-IL-24后,用8 Gy剂量(X射线)单次照射;XAV939+放射+IL-24组的Siha细胞转染pAdtrack CMV-IL-24后,用10μmol·L-1XAV93处理,再用8Gy剂量单次照射。以实时定量-PCR法检测细胞中白细胞介素-24(IL-24)基因表达水平,以蛋白质印迹法测定IL-24、β-catenin、c-Myc和裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)表达水平,以四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖水平,以流式细胞仪检测细胞凋亡。结果对照组和IL-24组的IL-24基因表达水平分别为1.00±0.00和2.65±0.21;这2组的IL-24蛋白表达水平分别为0.38±0.04和0.71±0.08;这2组的β-catenin蛋白表达水平分别为0.98±0.12和0.52±0.06;这2组的c-Myc蛋白表达水平分别为0.65±0.05和0.34±0.03,IL-24组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P24组、XAV939+IL-24组、Radiation+IL-24组和XAV939+Radiation+IL-24组的细胞存活率分别为(62.25±6.14)%,(41.30±3.26)%,(36.58±2.17)%和(27.18±3.69)%;这4组的细胞凋亡率分别为(16.62±1.47)%,(26.58±2.78)%,(29.47±2.43)%和(35.18±2.96)%;这4组的Cleaved caspase-3蛋白表达水平分别为0.13±0.02,0.21±0.03,0.32±0.04和0.48±0.05,XAV939+IL-24组、Radiation+IL-24组与IL-24组比较,或者XAV939+IL-24组、Radiation+IL-24组与XAV939+放射+IL-24组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P24可抑制宫颈癌细胞中Wnt信号通路激活,XAV939可以增加过表达IL-24的宫颈癌细胞放射敏感性,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。

关键词：宫颈癌放射敏感性白细胞介素24 Wnt信号通路

腺病毒介导白细胞介素24对脑胶质瘤的作用及其作用机制

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中华神经外科杂志 2018年第7期34卷 741-745页

作者：张学军李毅肖顺武代垠刘胜远张俊延遵义医学院附属医院神经外科贵州省遵义563003 首都医科大学附属北京天坛医院神经外科

目的探讨腺病毒介导白细胞介素24（Ad-IL-24）对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的作用及其作用机制。方法将Ad-IL-24基因重组腺病毒感染脑胶质瘤U251细胞，设立Ad-IL-24组、Ad．绿色荧光蛋白（GFP）组、PBS组，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）... 详细信息

目的探讨腺病毒介导白细胞介素24（Ad-IL-24）对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的作用及其作用机制。方法将Ad-IL-24基因重组腺病毒感染脑胶质瘤U251细胞，设立Ad-IL-24组、Ad．绿色荧光蛋白（GFP）组、PBS组，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹实验检测各组的IL-24表达情况，通过MTT实验检测3组U251细胞的增殖活性，应用流式细胞仪检测U251细胞的凋亡情况，并采用qRT-PCR检测U251细胞中Survivin和Bax的表达情况。结果（1）PBS组和Ad-GFP组的U251细胞贴壁生长状态良好，Ad-IL-24组的贴壁生长细胞数量明显减少，Ad-IL-24组和Ad-GFP组的感染效率可达95％以上；（2）qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验结果均显示，PBS组和Ad-GFP组IL-24的表达水平均明显低于Ad-IL-24组（均P〈0．05）；（3）感染复数为100时，Ad-IL-24感染U251细胞48h后，可明显抑制U251细胞的生长，其抑制作用明显高于PBS组和Ad-GFP组（均P〈0．05），且随着时间的延长呈现先增强后减弱的时间依赖性（P〈0．05）；（4）感染复数为100时，Ad-IL-24感染U251细胞48h后，Ad-IL-24组的细胞凋亡率为（39．2±4．2）％，明显高于PBS组和Ad-GFP组[分别为（2．5±1．0）％和（4．94-2．3）％]（均P〈0．05）；（5）Ad-IL-24组Survivin的表达水平明显低于PBS组和Ad-GFP组（均P〈0．05），而Bax的表达水平明显高于PBS组和Ad-GFP组（均P〈0．05）。结论Ad-IL-24表达可明显抑制U251细胞的生长，诱导细胞凋亡。其作用机制可能为下调凋亡抑制基因Survivin的表达及上调凋亡促进基因Bax的表达。

关键词：神经胶质瘤细胞增殖细胞凋亡白细胞介素24 Survivin Bax

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肿瘤抑制因子——白细胞介素24的研究进展

中国免疫学杂志 2007年第4期23卷 381-385页

作者：高冬妮葛菁萍凌宏志闫作梅平文祥黑龙江省微生物高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院哈尔滨150080 哈尔滨基太生物芯片开发有限责任公司哈尔滨150090

在对肿瘤基因治疗的研究中,用成纤维细胞IFN-β(干扰素-β)和MEZ(Mezerein,蛋白激酶(活化剂抑制毒素)处理人的黑色素瘤细胞,产生了不可逆的生长阻遏和终末分化,并引起细胞程序性凋亡。为了研究并解释发生这种现象的原因,1995年Jiang等... 详细信息

在对肿瘤基因治疗的研究中,用成纤维细胞IFN-β(干扰素-β)和MEZ(Mezerein,蛋白激酶(活化剂抑制毒素)处理人的黑色素瘤细胞,产生了不可逆的生长阻遏和终末分化,并引起细胞程序性凋亡。为了研究并解释发生这种现象的原因,1995年Jiang等。采用了消减杂交的方法,[第一段]

关键词：白细胞介素24 肿瘤抑制因子肿瘤基因治疗黑色素瘤细胞干扰素-β 成纤维细胞蛋白激酶终末分化

重组人白细胞介素24对肺癌A549细胞生长和肿瘤血管生成影响的实验研究

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中华结核和呼吸杂志 2006年第3期29卷 203-205页

作者：朱晔涵叶震敏盛伟华蒋军红黄建安胡华成杨吉成苏州大学附属第一医院呼吸科 215007 苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室苏州大学附属第二医院呼吸科

白细胞介素24(IL-24)即黑色素瘤分化相关基因7(mda-7),除具有免疫刺激应答功能外,还有抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡和抑制肿瘤血管生成的作用,被认为是一种新的抑癌基因.本研究观察了pET-21a-IL-24重组质粒表达系统的表达产物--部分纯... 详细信息

白细胞介素24(IL-24)即黑色素瘤分化相关基因7(mda-7),除具有免疫刺激应答功能外,还有抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡和抑制肿瘤血管生成的作用,被认为是一种新的抑癌基因.本研究观察了pET-21a-IL-24重组质粒表达系统的表达产物--部分纯化人重组IL-24(rhIL-24)蛋白,在体内外对肺癌A549细胞、瘤体生长的抑制作用和抗肿瘤血管生成作用.

关键词：抑制肿瘤细胞生长抑制肿瘤血管生成白细胞介素24 A549细胞重组人肺癌实验研分化相关基因血管生成作用黑色素瘤