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白细胞介素12及白细胞介素2对大鼠肝癌的联合基因治疗研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2002年第4期9卷 233-236页

作者：杨家和范瑞芳钱其军尤天庚薛惠斌苏长青曹惠芳吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438

目的:研究利用小鼠白细胞介素12(mIL-12)和人白细胞介素2(hIL-2)基因对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。方法:构建携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录病毒载体,转染包装细胞后对实验性肝癌大鼠进行肝癌局部注射,观察对肝癌细胞的... 详细信息

目的:研究利用小鼠白细胞介素12(mIL-12)和人白细胞介素2(hIL-2)基因对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。方法:构建携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录病毒载体,转染包装细胞后对实验性肝癌大鼠进行肝癌局部注射,观察对肝癌细胞的生长抑制作用及其对大鼠的免疫功能变化、毒性反应。结果:携带mIL-12/hIL-2基因的重组逆转录病毒在肿瘤内局部注射明显抑制了肝肿瘤的生长。肝癌接种后第1,3,5,7天治疗组大鼠35d生存率分别为100％,100％,30％,10％。IL-12+IL-2治疗组平均生存时间明显高于生理盐水对照组(P12治疗组(P细胞明显增多。结论:肝癌局部注射携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长,早期治疗优于晚期治疗。

关键词：白细胞介素12 白细胞介素2 肝肿瘤基因治疗肝内注射动物实验

白细胞介素12的p35和p40在大肠埃希菌中的克隆表达

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中国微生态学杂志 2005年第1期17卷 13-15页

作者：周慧敏范晓磊张卓然郭君张健大连医科大学微生物教研室辽宁大连116027 吉林大学第三临床学院中日联谊医院吉林长春130031 大连医科大学中山学院生化教研室辽宁大连116001

目的用基因工程的方法在大肠埃希菌中克隆表达白细胞介素12(IL12)的两个亚单位基因p35和p40。方法从乳腺癌患者全血中分离淋巴细胞,利用RTPCR扩增获得了IL12的2个亚单位基因p35和p40,分别转化到大肠埃希菌中,获得了高效表达。结果薄层... 详细信息

目的用基因工程的方法在大肠埃希菌中克隆表达白细胞介素12(IL12)的两个亚单位基因p35和p40。方法从乳腺癌患者全血中分离淋巴细胞,利用RTPCR扩增获得了IL12的2个亚单位基因p35和p40,分别转化到大肠埃希菌中,获得了高效表达。结果薄层扫描分析结果表明,在BL21(DE3)中表达的重组蛋白IL12P35和IL12P40分别占菌体裂解液中蛋白总量的39%和30%。结论该实验结果为IL12在体外的批量生产奠定了基础。

关键词：大肠埃希菌 IL-12P40 白细胞介素12 亚单位薄层扫描体外乳腺癌克隆表达高效表达基因工程

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白细胞介素12研究进展

国外医学（分子生物学分册） 1993年第5期15卷 206-209页

作者：段聚宝王嘉玺军事医学科学院基础医学研究所北京100850

白细胞介素12(IL-12)是近年新发现的一种细胞因子,主要来源于B淋巴细胞系。它是目前发现的细胞因子中唯一由异二聚体组成的因子,两亚基的分子量分别为40 kD和35 kD。两亚基的基因定位于不同的染色体上。IL-12具有多种生物学效应,只存在... 详细信息

白细胞介素12(IL-12)是近年新发现的一种细胞因子,主要来源于B淋巴细胞系。它是目前发现的细胞因子中唯一由异二聚体组成的因子,两亚基的分子量分别为40 kD和35 kD。两亚基的基因定位于不同的染色体上。IL-12具有多种生物学效应,只存在单一亲和力的膜受体。对IL-12的研究将有助于确定其在抗肿瘤和抗感染免疫中的重要作用。

关键词：白细胞介素12 分子生物学

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白细胞介素12与慢性乙型肝炎

临床肝胆病杂志 2000年第3期16卷 138-139页

作者：邢同京章廉第一军医大学南方医院感染病科广州510515

白细胞介素12(Interlukin-12,IL-12)是一种由单核吞噬细胞产生的细胞因子.它主要作用于细胞毒性T细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK),是迄今为止所发现的最有效的CTL和NK细胞活性刺激因子.目前研究认为,IL-12能增强Th1应答和抑制Th2应答,在调... 详细信息

白细胞介素12(Interlukin-12,IL-12)是一种由单核吞噬细胞产生的细胞因子.它主要作用于细胞毒性T细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK),是迄今为止所发现的最有效的CTL和NK细胞活性刺激因子.目前研究认为,IL-12能增强Th1应答和抑制Th2应答,在调控Th细胞的分化上起重要作用.

关键词：慢性乙型肝炎白细胞介素12 动物模型

内蒙古蒙古族和汉族人群白细胞介素12通路相关基因多态性与寻常型银屑病相关性及与HLA-Cw^(*)0602交互作用研究

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中华皮肤科杂志 2021年第5期54卷 414-420页

作者：丁文媛孙志强黄艳平李欣郭燕张雪丽吕新翔韩建文内蒙古医科大学附属医院皮肤科呼和浩特010050

目的探讨白细胞介素12(IL-12)通路相关基因多态性与内蒙古蒙古族和汉族寻常型银屑病患者的遗传相关性及与HLA-Cw^(*)0602的交互作用。方法收集2012年12月至2018年3月于内蒙古医科大学附属医院住院的寻常型银屑病患者1409例为病例组,其... 详细信息

目的探讨白细胞介素12(IL-12)通路相关基因多态性与内蒙古蒙古族和汉族寻常型银屑病患者的遗传相关性及与HLA-Cw^(*)0602的交互作用。方法收集2012年12月至2018年3月于内蒙古医科大学附属医院住院的寻常型银屑病患者1409例为病例组,其中汉族1030例,蒙古族379例,健康对照组1483例,其中汉族965例,蒙古族518例。采集受试者外周静脉血5 ml提取DNA,选择位于IL-12B(rs2082412、rs2288831、rs3212227、rs3213094、rs7709212)、IL-23R(rs11209026、rs2201841、rs7530511)、IL-28RA(rs4649203)基因区域的9个单核苷酸多态性(SNP),利用二代测序法进行基因多态性检测,利用序列特异性引物PCR对HLA-Cw^(*)0602进行基因分型。利用PLINK1.07软件进行统计分析,χ^(2)检验比较两组等位基因频率,并计算等位基因的相对危险度估计值比值比(OR),R×C列联表卡方检验进行单倍型分析。结果IL-12B基因rs2082412、rs2288831、rs3212227、rs3213094、rs7709212等位基因频率在汉族病例组显著低于汉族对照组(P12B基因rs3213094等位基因频率在蒙古族病例组显著低于蒙古族对照组(P12B基因rs2082412、rs2288831、rs3212227、rs3213094、rs7709212等位基因频率显著低于汉族对照组(P0.05)。蒙古族HLA-Cw^(*)0602阳性或阴性病例组各等位基因频率与相应对照组差异均无统计学意义(P>0.005)。分析IL-12B基因区域的5个SNP构建单倍型,在汉族、蒙古族病例组和对照组中6个单倍型分析差异均无统计学意义(P>0.005)。基于HLA-Cw^(*)0602分层的IL-12B基因多态性单倍型分析,蒙古族、汉族7个单倍型无论HLA-Cw^(*)0602阳性和阴性病例组及对照组中的频率差异无统计学意义(P>0.005)。HLA-Cw^(*)0602阳性和阴性蒙古族病例组和对照组,单倍型GATGT频率在两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论IL-12通路相关基因多态性与内蒙古蒙古族、汉族人群寻常型银屑病具有相关性,且IL-12B与HLA-Cw^(*)0602在寻常型银屑病发病过程中可能存在交互作用。

关键词：银屑病白细胞介素12 遗传关联研究多态性单核苷酸汉族蒙古族 HLA抗原 HLA-Cw*0602 交互作用

日本血吸虫SjCTPI-Hsp70 DNA疫苗与白细胞介素12对水牛的联合免疫保护作用研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第6期24卷 433-436页

作者：喻鑫玲何永康熊铁赵雅琴石孟芝周杰刘宗传罗新松付晓贺宏斌 DA HARN 李岳生湖南省血吸虫病防治所岳阳414000 美国哈佛大学公共卫生学院

目的探讨中国大陆株日本血吸虫磷酸丙糖异构酶-热激蛋白(SjCTPI-Hsp70)DNA疫苗联合佐剂白细胞介素-12(IL-12)质粒DNA对水牛的免疫保护作用。方法实验采用双盲法,所用疫苗及制剂均在实验结束后解码。将购自非血吸虫病流行区45头8～10月... 详细信息

目的探讨中国大陆株日本血吸虫磷酸丙糖异构酶-热激蛋白(SjCTPI-Hsp70)DNA疫苗联合佐剂白细胞介素-12(IL-12)质粒DNA对水牛的免疫保护作用。方法实验采用双盲法,所用疫苗及制剂均在实验结束后解码。将购自非血吸虫病流行区45头8～10月龄健康水牛随机分为A组(SjCTPI-Hsp70+IL-12,300μg)、B组(SjCTPI+IL-12,300μg)和C组(空质粒pVAX+IL-12,300μg)等3组(每组15头),每头牛分别经肩部肌肉注射免疫3次,每次间隔28d。末次免疫后28d,每头牛经大腿内侧皮肤感染日本血吸虫尾蚴1000条。解剖前2d及当天分别收集粪便1次,用定量法计数虫卵和毛蚴。攻击感染后56d解剖,用生理盐水经胸主动脉灌冲法收集、计数成虫,检测每克肝组织虫卵数。结果A、B组减虫率分别为51.2%和41.5%(χ2=1.89,P>0.05),减雌虫率分别为48.9%和44.7%(χ2=0.35,P>0.05),减粪卵率分别为52.1%和38.3%(χ2=3.84,P12免疫水牛可获得一定的免疫保护性作用。

关键词：日本血吸虫磷酸丙糖异构酶-热激蛋白 DNA疫苗白细胞介素12 联合免疫水牛免疫保护

人白细胞介素12腺病毒载体构建及在人骨髓间充质干细胞中的表达

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第23期14卷 4186-4190页

作者：陈媛媛谭晓华马晶莹解放军北京军区总医院生物治疗中心北京市100700 山西医科大学山西省太原市030001

背景:研究表明,白细胞介素12是一种强有力的抗肿瘤细胞因子,骨髓间充质干细胞易于外源基因的导入和表达,且具有较弱的免疫抗原性和免疫调节功能,因此,利用携带白细胞介素12基因的间充质干细胞对于肿瘤的治疗具有极大的发展前景。目的:... 详细信息

背景:研究表明,白细胞介素12是一种强有力的抗肿瘤细胞因子,骨髓间充质干细胞易于外源基因的导入和表达,且具有较弱的免疫抗原性和免疫调节功能,因此,利用携带白细胞介素12基因的间充质干细胞对于肿瘤的治疗具有极大的发展前景。目的:构建人白细胞介素125型腺病毒载体(AdhIL-12),感染人骨髓间充质干细胞,检测白细胞介素12的表达。方法:提取成熟的树突状细胞的总RNA,用RT-PCR方法获得hIL-12p35和p40基因cDNA,p35和p40cDNA通过脑心肌炎病毒内部核酸进入位点连接,构建pDC515hIL-12p35/IRES/p40腺病毒穿梭质粒。采用AdMaxTM腺病毒载体体系,pDC515hIL-12p35/IRES/p40穿梭质粒与pBHGfrt△E1,3FLP骨架质粒共转染至293细胞,通过重组酶位点特异性重组获得AdhIL-12。AdhIL-12感染人骨髓间充质干细胞后经γ射线照射使细胞失去增殖能力,用hIL-12p70ELISA试剂盒检测细胞上清中白细胞介素12的水平。结果与结论:经测序证实,RT-PCR所获得的hIL-12p35和p40基因cDNA序列与GenBankNM_000882(762bp)和NM_002187(987bp)提供的序列完全一致。用AdMaxTM腺病毒载体体系可高效、快捷地获得所要包装的腺病毒载体,通过IRES连接hIL-12的两个亚基p40和p35可有效地表达IL-12p70蛋白;AdhIL-12腺病毒载体感染人骨髓间充质干细胞后可持续高水平分泌白细胞介素12,在以人骨髓间充质干细胞为载体细胞的基因治疗中有潜在的应用前景。

关键词：白细胞介素12 骨髓间充质干细胞腺病毒载体基因治疗干细胞

慢病毒介导人白细胞介素12转染鼠骨髓间充质干细胞可抑制CT26瘤体的生长

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中国组织工程研究 2018年第25期22卷 3944-3949页

作者：何杨林晨高琴宋京翔涂小煌解放军福州总医院普外科福建省福州市350025 解放军福州总医院普外科研究所福建省福州市350025 厦门大学附属东方医院普外科福建省福州市350025

背景:白细胞介素12作为最具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少。目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(h IL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响。方法:设计并合成引物,PCR扩... 详细信息

背景:白细胞介素12作为最具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少。目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(h IL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响。方法:设计并合成引物,PCR扩增并回收纯化后的p40和p35基因片段,行Overlap-ping PCR连接获得h IL-12的单链双亚基表达融合基因,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,构建慢病毒过表达重组体,再转染大鼠骨髓间充质干细胞,药物筛选培育出稳转株。32只裸鼠皮下注射CT26细胞悬液造模成功后,随机分为4组:瘤周分别注射0.2 m L h IL-12-BMSCs(h IL-12-BMSCs组)、0.2 m L PBS溶液(PBS组)、0.2 m L骨髓间充质干细胞(骨髓间充质干细胞组)、0.2 m L表达IL-12的慢病毒液(LV-IL-12组),统计并分析各组瘤体生长情况。结果与结论:(1)观察期内PBS组与骨髓间充质干细胞组肿瘤体积差异无显著性意义(P>0.05),表明骨髓间充质干细胞本身对CT26瘤体生长无明显促进或抑制作用;(2)注射7 d后h IL-12-BMSCs组与PBS组、PBS组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异均有显著性意义(P白细胞介素12对CT26瘤体生长有明显抑制作用;(3)注射10 d后h IL-12-BMSCs组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异有显著性意义(P12-BMSCs抑制CT26生长优于LV-IL-12;(4)结果表明,h IL-12-BMSCs对裸鼠CT26移植瘤体生长有明显的抑制作用。

关键词：结直肠癌人白细胞介素12 鼠骨髓间充质干细胞慢病毒载体干细胞福建省自然科学基金结直肠肿瘤白细胞介素12 骨髓间质干细胞慢病毒感染组织工程

人白细胞介素12两个亚基基因p35、p40拼接的新方法

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吉林大学学报（医学版） 2009年第2期35卷 309-313页

作者：杜珍武齐熙明王茜吴晓冬杨绍娟张桂珍吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130033 吉林大学药学院基因工程教研室吉林长春130021 河北省秦皇岛市第一医院中心实验室河北秦皇岛066000

目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人I... 详细信息

目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人IL-12p35、p40两个亚基基因片段以及连接肽基因核苷酸序列设计引物,其中p40基因下游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点,p35基因上游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点。通过聚合酶链反应(PCR)方法分别获得人IL-12p35与p40基因片段。利用KpnⅠ内切酶对p35与p40基因的PCR产物进行酶切,酶切产物回收后利用T4DNA连接酶进行连接,应用p40基因上游引物与p35基因下游引物对连接产物进行PCR扩增。利用KpnⅠ内切酶对连接产物进行酶切鉴定。将扩增的连接产物克隆入T载体,挑选阳性克隆并进行酶切鉴定,酶切鉴定正确的克隆进行拼接产物的核苷酸序列测序。结果:通过PCR分别获得约1000bp大小的p40基因片段与600bp大小的p35基因片段,两个基因酶切片段连接后PCR扩增获得1600bp左右的拼接产物,采用KpnI内切酶对拼接产物进行酶切后获得约1000和600bp大小的基因片段,分别与p40和p35基因片段大小一致。拼接产物的T载体经酶切鉴定可见1600bp大小的酶切产物,拼接产物测序结果与GenBank核酸数据库上的p40基因、p35基因以及连接肽基因核苷酸序列完全一致。结论:利用该基因分子拼接技术成功地将人白介素12两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接。建立了一种简单、方便、有效进行人白细胞介素12两个亚基基因拼接的新方法,为进一步研究IL-12的生物学功能以及基因治疗提供实验基础。

关键词：白细胞介素12 聚合酶链反应基因拼接