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中国危重病急救医学 2011年第11期23卷 645-649页

作者：黄栋方芳许峰贵州省人民医院儿科贵阳550002 重庆医科大学附属儿童医院重症监护病房

目的观察高氧暴露后肺泡上皮细胞内活性氧（R0s）水平与Toll样受体（TLRs）基因、蛋白表达变化及其与信号通路功能之间的关系，探讨高氧所致肺损伤炎症反应的可能机制。方法将体外培养的人肺腺癌A549细胞株分为空气对照组、高氧组、N-... 详细信息

目的观察高氧暴露后肺泡上皮细胞内活性氧（R0s）水平与Toll样受体（TLRs）基因、蛋白表达变化及其与信号通路功能之间的关系，探讨高氧所致肺损伤炎症反应的可能机制。方法将体外培养的人肺腺癌A549细胞株分为空气对照组、高氧组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理组；高氧组细胞在〉90％0。的高氧环境中暴露2、6、12、24及48h，NAC预处理组细胞予以ROS清除剂NAC预处理后高氧暴露6h。于相应时间点用流式细胞术检测细胞内ROS含量以及TLR2／4蛋白在细胞中的分布和表达；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PcR）法检测TLR2／4mRNA表达；用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中自细胞介素（IL-6、IL-8）的含量。结果A549细胞有TLR2／4表达，并且以细胞质内表达为主。与空气对照组比较，高氧组暴露2h细胞内ROS含量（荧光强度）即明显增高（11．820±3．123比7．223±1．170，P〈0．01），随高氧暴露时间延长呈进行性增高，于48h达高峰（113．837±5．247，P〈0．01）；高氧暴露2hTLR2／4mRNA表达至高峰（TLR2mRNA：1．820±0．056比1．263士0．023；TLR4mRNA：2．080±0．220比1．317±0．107，均P〈0．01），随高氧暴露时间延长，TLR2／4mRNA表达虽仍有增多，但无显著变化；高氧暴露后TLR2／4蛋白表达显著增高，6h表达至高峰（TLR2蛋白：8．370±1．548比3．930±0．277；TLR4蛋白：25．803±5．783比8．867±2．230，均P〈0．01），以细胞质内表达为主；随高氧暴露时间延长，细胞上清液中IL-6（ng／L）、IL-8（ng／L）水平呈进行性增高，于48h达高峰（IL-6：2213．41±69．99比9．76±1．47；IL-8：11520．38±429．93比159．56±20．80，均P〈0．01）。在NAC预处理情况下，高氧刺激后，细胞内ROS水平明显降低（14．050±1．257比31．180±2．336，P〈0．01），细胞TLR2／4mRNA和蛋白表达显著降低（TLR2mRNA：1．270±0．061比1．683±0．025；TLR4mRNA：1．507±0．058比1．650±0．139；TLR2蛋白：3．458±0．258比8．370±1．548；TLR4蛋白：11．611±3．403比25．803±5．783，均P〈0．05），细胞上清液中IL-6、IL-8水平显著下降（IL-6：8．42±0．70比73．51±16．70；IL-8：134．94±5．19比772．82±96．05，均P〈0．05），与空气对照组比较差异均无统计学意义。结论A549细胞在高氧暴露后，细胞内ROS能够激活人肺泡上皮细胞TLR2／4的表达，导致前炎症细胞因子IL-6和IL-8的大量释放。

关键词：活性氧肺泡上皮细胞 Toll样受体2/4 白细胞介素-6/8

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