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白念珠菌基因功能研究的策略

菌物学报 2020年第11期39卷 2149-2160页

作者：吕权真张景翔姜远英王彦海军军医大学药学系上海200433 同济大学医学院上海200092

白念珠菌是临床最常见的致病真菌,共有约6100个基因,阐明其基因功能,尤其是致病性和耐药性相关基因的功能对发现抗真菌的新策略和新靶点有举足轻重的意义。白念珠菌基因功能研究的策略主要包括基因敲除和基因表达调控,近年来,白念珠菌... 详细信息

白念珠菌是临床最常见的致病真菌,共有约6100个基因,阐明其基因功能,尤其是致病性和耐药性相关基因的功能对发现抗真菌的新策略和新靶点有举足轻重的意义。白念珠菌基因功能研究的策略主要包括基因敲除和基因表达调控,近年来,白念珠菌基因功能研究的技术手段不断发展,本文就常用技术的发展进行综述,对相关技术存在的不足和发展前景也进行了分析。

关键词：白念珠菌基因功能基因敲除基因表达调控

肉桂醛对白念珠菌定植下DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠治疗作用及对dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路的影响

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中国中药杂志 2020年第13期45卷 3211-3219页

作者：马克龙韩志君潘敏陈梦丽葛雨竹邵菁吴大强汪天明颜贵明汪长中安徽中医药大学中西医结合学院/生命科学学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽省中医药科学院新安医学教育部重点实验室安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

观察肉桂醛对白念珠菌(Candida albicans,Ca)定植+葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用,以及对dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路的影响。将C57BL/6小鼠随机分为正常组、DSS组、DSS+Ca组、肉桂醛(75 mg·kg^-1)组和美沙拉嗪(200 mg·kg^-1)组。DSS+Ca组小鼠每日灌服Ca(1×10^8 CFU/只),连续4 d后给予3.0%DSS溶液,自由饮用7 d;肉桂醛组和美沙拉嗪组则在DSS+Ca组的基础上,在给予DSS的同时,分别给予药物灌胃治疗;正常组和DSS组给予蒸馏水对照处理。每日观察小鼠的一般状态,记录小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI),平板培养检测小鼠粪便真菌载荷量。末次给药次日,人道处死小鼠,测量结肠长度,计算结肠黏膜损伤指数(colon mucosa damage index,CMDI),HE染色法进行组织病理学分析。ELISA法检测血清抗酿酒酵母抗体(anti-saccharomces cerevi-siae antibody,ASCA)、β-1,3-葡聚糖以及血清和组织中细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,IL-10)的含量。免疫荧光染色法检测结肠组织β-1,3-葡聚糖含量和巨噬细胞浸润程度。Western blot法和免疫组织化学染色法检测结肠组织dectin-1,TLR2,TLR4和NF-κB的蛋白表达情况。结果显示,肉桂醛可显著改善Ca定植下UC小鼠的一般状态,降低DAI评分和病理学评分;减轻肠道黏膜充血、糜烂和结肠缩短的程度;减少小鼠肠道Ca的载荷;下调血清ASCA和β-1,3-葡聚糖含量;降低血清和结肠组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8的含量,升高IL-10的含量,抑制结肠巨噬细胞的浸润,下调结肠组织dectin-1,TLR2,TLR4和NF-κB的蛋白表达水平。结果表明,肉桂醛对Ca定植下DSS诱导的小鼠UC具有治疗作用,其机制可能在于肉桂醛能够显著抑制Ca增殖,调节dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路,协调促炎因子和抗炎因子之间的平衡。

关键词：肉桂醛溃疡性结肠炎白念珠菌 dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路

白念珠菌IFD6基因高表达促进生物被膜形成

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第二军医大学学报 2010年第6期31卷 599-603页

作者：李莹李德东王彦刘凌聪黄海付守廷姜远英沈阳药科大学生命科学与生物制药学院药理学教研室沈阳110016 第二军医大学药学院药理学教研室上海200433

目的考察白念珠菌IFD6基因对生物被膜形成能力的影响。方法构建白念珠菌IFD6基因高表达质粒,将IFD6基因开放阅读框(ORF)置于pCaEXP高表达载体中MET3启动子的控制下,醋酸锂法转染白念珠菌CAI4,PCR鉴定IFD6基因的原位整合,real-timePCR筛... 详细信息

目的考察白念珠菌IFD6基因对生物被膜形成能力的影响。方法构建白念珠菌IFD6基因高表达质粒,将IFD6基因开放阅读框(ORF)置于pCaEXP高表达载体中MET3启动子的控制下,醋酸锂法转染白念珠菌CAI4,PCR鉴定IFD6基因的原位整合,real-timePCR筛选IFD6基因表达量明显升高的菌株。利用XTT法和激光共聚焦显微镜测定并观察IFD6基因高表达前后生物被膜形成能力的变化,利用细胞表面疏水性实验考察白念珠菌细胞表面疏水性的变化。结果通过酶切和测序验证IFD6基因高表达质粒构建正确;通过PCR验证IFD6基因高表达菌株构建正确,并通过real-timeRT-PCR筛选得到1株IFD6基因表达量相对较高的菌株。XTT法和激光共聚焦显微镜观察的结果一致显示IFD6基因高表达菌形成生物被膜的能力增强,细胞表面疏水性增加。结论 IFD6基因高表达能增加白念珠菌细胞表面疏水性,从而使白念珠菌生物被膜的形成能力增强。

关键词：白念珠菌 IFD6 生物膜

白念珠菌细胞壁结构及其与宿主相互作用的研究进展

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上海交通大学学报（医学版） 2021年第9期41卷 1246-1251页

作者：梅一堃谭镜璁王安君王慧刘宁宁上海交通大学公共卫生学院上海200025

白念珠菌是常见的人体条件致病真菌,其侵染人体造成的血液感染死亡率高达40%,在癌症患者中致死率高达70%,极大地增加了人体健康负担。白念珠菌细胞壁是抵御外界侵害的第一道防线,是真菌与宿主接触的第一靶点,因此细胞壁结构对于真菌-宿... 详细信息

白念珠菌是常见的人体条件致病真菌,其侵染人体造成的血液感染死亡率高达40%,在癌症患者中致死率高达70%,极大地增加了人体健康负担。白念珠菌细胞壁是抵御外界侵害的第一道防线,是真菌与宿主接触的第一靶点,因此细胞壁结构对于真菌-宿主相互作用以及宿主免疫识别至关重要,是抗真菌治疗极具前景的靶点之一。当白念珠菌细胞壁的完整性遭受破坏时,细胞壁的分子结构就会受到干扰,从而导致细胞裂解和死亡。该文综述了白念珠菌细胞壁各成分的特点及其对真菌-宿主相互作用和免疫识别作用机制的影响,以期为寻找治疗白念珠菌感染的特异性靶点、筛选或鉴定更多经济有效的抗真菌药物提供新的研究线索和理论依据。

关键词：白念珠菌细胞壁真菌-宿主相互作用免疫识别抗真菌药物

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下溃疡性结肠炎小鼠的作用机制研究

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中国中药杂志 2018年第14期43卷 2979-2984页

作者：王晓妹田歌段强军吴大强邵菁汪天明汪长中安徽中医药大学护理学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230038

研究白头翁汤正丁醇提取物（BAEB）对DSS诱导＋白念珠菌（CA）定植状态下的小鼠急性溃疡性结肠炎（UC）的作用机制。将小鼠随机分为正常对照组,DSS组,DSS＋CA组,BAEB高、中、低剂量组,阳性药Mesalazine组。观察小鼠一般情况,平板法检测... 详细信息

研究白头翁汤正丁醇提取物（BAEB）对DSS诱导＋白念珠菌（CA）定植状态下的小鼠急性溃疡性结肠炎（UC）的作用机制。将小鼠随机分为正常对照组,DSS组,DSS＋CA组,BAEB高、中、低剂量组,阳性药Mesalazine组。观察小鼠一般情况,平板法检测小鼠肠道内容物真菌载荷量,HE染色观察小鼠结肠病理变化;ELISA法检测小鼠血清ASCA及结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的含量变化。结果表明,与DSS模型组相比,DSS＋CA组小鼠一般状况及血清ASCA无明显变化,但肠道CA载荷量、组织病理损伤程度、结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的蛋白水平均超过DSS组,BAEB高剂量与Mesalazine治疗能改善结肠组织病理,降低IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的表达水平。上述结果提示,BAEB能有效改善DSS＋CA定植下的UC小鼠结肠病理及免疫性损伤,对肠道真菌过度定植相关肠炎的治疗具有重要价值。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物溃疡性结肠炎白念珠菌

碱性pH条件下白念珠菌钙离子通道CCH1和MID1基因对钙内流的影响及Crz1p转录因子对其的调控作用

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生物工程学报 2011年第6期27卷 917-925页

作者：王慧徐宁邢来君李明春魏东盛南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071

白念珠菌Candida albicans对环境pH的适应能力与其致病性有密切关系,钙信号转导途径介导许多环境压力的应答并伴随胞内钙离子浓度的瞬间变化。通过构建钙通道基因CCH1和MID1的缺失突变株,在碱性pH条件下,研究其对胞内钙内流的影响以及... 详细信息

白念珠菌Candida albicans对环境pH的适应能力与其致病性有密切关系,钙信号转导途径介导许多环境压力的应答并伴随胞内钙离子浓度的瞬间变化。通过构建钙通道基因CCH1和MID1的缺失突变株,在碱性pH条件下,研究其对胞内钙内流的影响以及转录因子Crz1p对CCH1和MID1基因的调控作用。使用二步法PCR介导的基因敲除技术构建cch1?/?和mid1?/?突变菌株,利用流式细胞术比较野生型和突变型菌株在碱性pH条件刺激下胞内钙的瞬间变化,进一步构建pPHO89-LacZ重组质粒并利用β-半乳糖苷酶体系分析CCH1和MID1基因缺失对外钙内流以及转录因子Crz1p对LacZ活性的影响,结果发现碱性pH条件引起的钙离子浓度的瞬间变化在cch1?/?和mid1?/?缺失突变株中明显减弱,LacZ活性也显著降低,且在crz1?/?缺失突变株中完全消失。最后利用实时定量PCR,确定转录因子Crz1p在碱性pH条件下对CCH1和MID1具有非钙调神经磷酸酶依赖性的调控作用。对钙信号途径在碱性pH压力应答中作用的研究,将为临床上白念珠菌感染的治疗和新药靶点导向提供重要的理论依据。

关键词：白念珠菌碱性pH CCH1 MID1 钙内流 Crz1p

白念珠菌生物膜模型的建立及其对漱口水抗性的研究

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离子交换与吸附 2010年第6期26卷 490-496页

作者：熊开容钟朗丁吴丁财符若文聚合物复合材料及功能材料教育部重点实验室中山大学化学与化学工程学院广东工业大学环境科学与工程学院

建立白念珠菌生物膜的体外模型,观察漱口水对不同发育时期生物膜的影响。以白念珠菌国际标准株ATCC10231为研究对象,将玻片置于培养皿形成生物膜,选取3种常见漱口水对不同阶段的白念珠菌生物膜的影响进行评价。结果显示,白念珠菌可以在... 详细信息

建立白念珠菌生物膜的体外模型,观察漱口水对不同发育时期生物膜的影响。以白念珠菌国际标准株ATCC10231为研究对象,将玻片置于培养皿形成生物膜,选取3种常见漱口水对不同阶段的白念珠菌生物膜的影响进行评价。结果显示,白念珠菌可以在玻片上形成几个典型时期的生物膜,建立的白念珠菌生物膜模型可用于观察抗菌剂对生物膜的影响,以进行抗菌剂的抗菌性能评价研究。实验还发现,中晚期的白念珠菌生物膜比早期的对漱口水更具抗性。

关键词：白念珠菌生物膜模型抗菌性能评价漱口水

穿心莲内酯衍生物炎琥宁对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响

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中国中药杂志 2014年第15期39卷 2924-2929页

作者：施高翔严园园邵菁张梦翔陆克乔汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合临床学院安徽合肥230038 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230038

目的:探讨穿心莲内酯(AG)衍生物炎琥宁(YHN)对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响。方法:构建白念珠菌生物膜大鼠皮下导管模型,采用YHN(40,20,10,5,2.5 mg·kg-1)腹腔注射治疗,设氟康唑(FLC)阳性对照组(80 mg·kg-1),7d后计数导管的菌落形成... 详细信息

目的:探讨穿心莲内酯(AG)衍生物炎琥宁(YHN)对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响。方法:构建白念珠菌生物膜大鼠皮下导管模型,采用YHN(40,20,10,5,2.5 mg·kg-1)腹腔注射治疗,设氟康唑(FLC)阳性对照组(80 mg·kg-1),7d后计数导管的菌落形成单位(CFU),XTT代谢法评估YHN对体外白念珠菌生物膜的影响;扫描电镜(SEM)观察YHN干预大鼠体内生物膜的形态变化;采用实时荧光定量PCR法检测白念珠菌黏附相关基因ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量。结果:YHN组导管片上CFU明显少于空白组;XTT代谢活性也显示YHN组低于空白组,且呈剂量依赖性;扫描电镜照片显示YHN能显著减少白念珠菌对大鼠体内导管的黏附;qRT-PCR结果显示,YHN可下调ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量。结论:YHN能抑制大鼠体内白念珠菌生物膜。

关键词：穿心莲内酯炎琥宁白念珠菌生物膜体内模型

基于高通量转录组测序研究三黄汤缓解白念珠菌定植下DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用机制

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中国中药杂志 2021年第15期46卷 3915-3925页

作者：马克龙韩志君孙娟檀小芬汪天明邵菁颜贵明汪长中安徽中医药大学中西医结合学院/生命科学学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中药饮片制造新技术安徽省重点实验室安徽合肥230012 安徽省中医药科学院新安医学教育部重点实验室安徽合肥230012

利用高通量转录组测序技术探讨三黄汤(Sanhuang Decoction,SHD)治疗白念珠菌(Candida albicans,Ca)定植小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用机制。采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合Ca灌胃方式构建Ca定植下DSS诱导的小鼠UC模型,并予以SHD灌肠治疗;观察小鼠一般状态、疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠长度和结肠黏膜损伤指数(colon mucosa damage index,CMDI)变化;HE染色法进行组织病理学分析;平板培养法检测小鼠肠道Ca载荷;ELISA法检测小鼠血清抗酿酒酵母抗体(anti-saccharomces cerevisiae antibody,ASCA)和β-1,3-葡聚糖的含量,以及血清和肠组织TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平;高通量转录组测序技术分析对照组、模型组和三黄汤组的差异表达基因,并对差异表达基因进行GO和KEGG pathway富集分析;qRT-PCR和Western blot检测差异基因显著富集的NOD样信号通路相关基因NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的表达水平。结果显示,SHD灌肠治疗可改善UC小鼠的一般状态,降低DAI评分;SHD能减少肠道Ca载荷,减轻肠道充血、糜烂和结肠缩短程度,并且降低血清β-1,3-葡聚糖含量,下调血清和肠道组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平;SHD组vs模型组有383个差异表达基因,显著富集于免疫系统过程、细菌防御反应和固有免疫反应等生物学过程,KEGG pathway分析提示差异基因显著富集于NOD样受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用和视黄醇代谢等信号通路;SHD下调UC小鼠结肠组织NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白表达水平。以上结果表明,SHD可缓解Ca定植的小鼠UC,其作用机制可能与其对NOD样受体信号通路调控有关。

关键词：三黄汤溃疡性结肠炎白念珠菌转录组测序 NOD样受体信号通路