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白头翁汤正丁醇提取物通过激活BMP信号通路治疗溃疡性结肠炎的作用机制研究

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1762-1773页

作者：蒋晓娟王亚东孙娟马克龙吴大强邵菁汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012

该研究旨在探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)通过激活骨形态发生蛋白(BMP)信号通路发挥对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用。C57BL/6小鼠分为6组:对照组、模型组、美沙拉嗪组及... 详细信息

该研究旨在探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)通过激活骨形态发生蛋白(BMP)信号通路发挥对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用。C57BL/6小鼠分为6组:对照组、模型组、美沙拉嗪组及BEPD低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组小鼠连续7 d自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立UC模型,然后进行不同浓度的BEPD和美沙拉嗪灌胃治疗。记录各组小鼠体质量和疾病活动指数(disease activity index,DAI)。处死小鼠后,取结肠组织进行组织学分析,采用阿利新蓝/过碘酸雪夫(AB/PAS)染色法检测杯状细胞的数量及黏液分泌状况,免疫组化法检测结肠组织中增殖标志物ki67、活化半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、粘蛋白2(mucin 2,Muc2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达,免疫荧光法检测结肠组织中紧密连接蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的水平,Western blot检测小鼠结肠组织中与BMP通路相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测小鼠结肠杯状细胞分化相关基因表达。在体外细胞学实验中,进一步验证BEPD含药血清对脂多糖(LPS)诱导下的LS174T杯状细胞屏障功能的保护作用及其机制。结果表明,BEPD显著缓解UC小鼠的一般症状,恢复杯状细胞分化功能,促进Muc2分泌和紧密连接蛋白的表达,并抑制炎症因子的分泌,同时激活BMP信号通路。因此,该研究提示BEPD可能通过激活BMP信号通路发挥治疗UC的作用,为药物干预UC提供了新的思路。

关键词：溃疡性结肠炎白头翁汤正丁醇提取物肠黏膜屏障骨形态发生蛋白(BMP)信号通路杯状细胞

白头翁汤正丁醇提取物对外阴阴道念珠菌病小鼠阴道黏膜上皮屏障的影响

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中国中药杂志 2020年第20期45卷 4991-4996页

作者：赵婷王亚东章康张梦翔段强军汪天明邵菁汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠阴道黏膜上皮屏障的影响。雌性SPF(specific pathogen free)级昆明种小鼠72只,随机分为空白组、VVC模型组、阳性药氟康唑组、BAEB治疗组(高、中、低剂量组)。隔天皮下注射苯甲酸雌二醇,于假发情期向小鼠阴道接种白念珠菌(2×106 CFU·mL-1)连续7 d,以构建VVC模型,之后药物治疗7 d。革兰染色观察小鼠阴道分泌物中白念珠菌形态;平板法检测小鼠阴道真菌载荷量;HE(hematoxylin-eosin staining)染色法观察小鼠阴道黏膜组织病理状况;MT(Masson′s trichrome staining),HE及PAS(periodic acid-schiff staining)染色法观察小鼠阴道黏膜上皮屏障的完整性;免疫组化法检测小鼠阴道黏膜上皮细胞mucin-1和mucin-4蛋白表达;Western blot法测定第0,3,7天黏膜上皮细胞mucin-1和mucin-4蛋白表达水平。结果发现,VVC模型组小鼠阴道内有大量白念珠菌丝生成及较高真菌载荷量,阴道黏膜结构不完整,外层角化层脱落,阴道上皮细胞增生,炎症浸润加剧,以及上皮细胞表面mucin-1和mucin-4蛋白表达显著增多;经BAEB治疗后,小鼠阴道内菌丝减少,真菌载荷量显著下降,炎症浸润减少,阴道黏膜组织损伤改善,上皮屏障修复并恢复完整性,mucin-1和mucin-4蛋白水平下调。上述结果表明,BAEB可能通过重塑阴道黏膜上皮屏障的完整性而发挥治疗VVC的作用。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物外阴阴道念珠菌病阴道黏膜上皮屏障黏蛋白

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白头翁汤正丁醇提取物抑制白念珠菌细胞膜

中国中药杂志 2017年第16期42卷 3185-3190页

作者：胡唐玲云云徐志庆段强军邵菁汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合临床学院安徽合肥230038 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230038

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞膜的抑制作用。以Spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;酶标仪检测BAEB干预后白念珠菌细胞内渗透压变化;荧光显微镜观察BAEB... 详细信息

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞膜的抑制作用。以Spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;酶标仪检测BAEB干预后白念珠菌细胞内渗透压变化;荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌细胞膜通透性的影响;高效液相检测白念珠菌细胞膜麦角甾醇的含量;q RT-PCR法检测细胞膜麦角甾醇生物合成相关基因的表达。结果显示,256,512,1 024 mg·L^(-1)BAEB干预下白念珠菌活性逐渐降低;512,1 024 mg·L^(-1)BAEB组白念珠菌胞内甘油含量显著性增多(P<0.05),与白念珠菌胞内渗透压相关的基因HOG1分别下调9.1,9.3,5.5倍;512,1 024 mg·L^(-1)BAEB组白念珠菌红色荧光细胞明显增多;1 024 mg·L^(-1)BAEB干预后麦角甾醇峰面积为35.884 95,有显著性差异(P<0.05);1 024 mg·L^(-1)BAEB干预组ERG1,ERG2,ERG3,ERG4,ERG5,ERG6,ERG10,ERG11,ERG13,ERG24,ERG25,ERG251,ERG26与UPC2分别下调6.58,4.89,4.15,9.24,3.41,9.84,3.08,7.50,5.53,5.90,2.45,3.25,1.98,10.07倍。BAEB可通过抑制麦角甾醇及其生物合成相关基因的表达,进而抑制白念珠菌细胞膜完整性。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物白念珠菌细胞膜麦角甾醇

白头翁汤正丁醇提取物通过下调NLRP3炎症小体及相关信号通路治疗小鼠外阴阴道念珠菌病的作用机制研究

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中国中药杂志 2022年第9期47卷 2516-2524页

作者：章康赵婷夏丹张梦翔吴大强汪天明邵菁汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

探讨白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对外阴阴道念珠菌病(VVC)小鼠的治疗作用,并从TLRs/MyD88与Dectin-1/Syk信号通路及其介导的NLRP3炎症小体角度阐明其作用机制。实验中将雌性KM小鼠随机分为空白对照组、VVC模型组、氟康唑组、BAEB治疗组... 详细信息

探讨白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对外阴阴道念珠菌病(VVC)小鼠的治疗作用,并从TLRs/MyD88与Dectin-1/Syk信号通路及其介导的NLRP3炎症小体角度阐明其作用机制。实验中将雌性KM小鼠随机分为空白对照组、VVC模型组、氟康唑组、BAEB治疗组(20、40、80 mg·kg^(-1))。除空白对照组外,其他各组均建立VVC模型,于第8天给予BAEB灌胃治疗,空白对照组给予生理盐水,持续7 d。每日观察小鼠状态,记录小鼠体质量,分别于小鼠阴道感染白念珠菌的第1、3、7、14天,平板法检测阴道灌洗液真菌载荷量,革兰染色观察阴道灌洗液中白念珠菌形态;处死小鼠后,HE、PAS染色法进行阴道组织病理学分析;ELISA检测阴道灌洗液中细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、S100a8)的含量;荧光分光光度计检测阴道组织中活性氧含量;Western blot检测阴道组织中NLRP3、ASC、caspase-1、Dectin-1、Syk、MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB的蛋白表达;免疫组化法检测阴道组织中NLRP3、Dectin-1、Syk、MyD88、TLR2、TLR4的表达和分布。结果显示,BAEB能改善VVC小鼠的一般状态,减少阴道分泌物中的真菌载荷和白念珠菌菌丝数量;降低阴道组织活性氧与阴道灌洗液中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和S100a8的含量,下调阴道组织中NLRP3、ASC、caspase-1、Dectin-1、Syk、MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB蛋白表达。上述结果表明,BAEB对于VVC小鼠的治疗作用可能与其下调TLRs/MyD88与Dectin-1/Syk通路关键蛋白及其介导的NLRP3炎症小体激活有关。

关键词：外阴阴道念珠菌病白头翁汤正丁醇提取物 NLRP3炎症小体 Dectin-1/Sky TLRs/MyD88

白头翁汤正丁醇提取物对外阴阴道念珠菌病小鼠阴道黏膜中性粒细胞趋化的影响

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中国中药杂志 2020年第2期45卷 361-366页

作者：姜晶晶云云张梦翔杨玉段强军汪天明邵菁汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学第二附属医院安徽合肥230001

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠阴道黏膜中性粒细胞趋化的影响。将SPF级雌性昆明小鼠72只,随机分为正常组,模型组,氟康唑组,... 详细信息

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠阴道黏膜中性粒细胞趋化的影响。将SPF级雌性昆明小鼠72只,随机分为正常组,模型组,氟康唑组,BAEB低、中、高剂量组,皮下注射苯甲酸雌二醇致假发情期,再阴道接种白念珠菌2×106 CFU·mL-1,药物治疗7 d。革兰染色法观察小鼠阴道分泌物中白念珠菌形态;平板法检测小鼠阴道真菌载荷;HE染色法观察小鼠阴道组织病理情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠灌洗液中LDH,IL-6,TNF-α水平;巴氏染色法观察阴道灌洗液中性粒细胞并计数;ELISA法检测阴道黏膜趋化因子中IL-8和MIP-2水平;qRT-PCR法检测小鼠阴道黏膜中IL-8和MIP-2的mRNA水平。结果表明,与正常组相比,VVC模型组阴道内有大量菌丝生成且大量的真菌载荷,阴道黏膜层结构完全破坏,中性粒细胞数量增多,IL-8和MIP-2的蛋白和mRNA水平上调。经BAEB治疗,与模型组相比,治疗组小鼠阴道内菌丝减少,真菌载荷量降低,黏膜损伤有所改善,炎症因子含量降低,IL-8和MIP-2的蛋白和mRNA水平均下调。上述结果提示,BAEB可能通过抑制趋化因子以阻断中性粒细胞向阴道腔的募集而发挥治疗VVC的作用。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物外阴阴道念珠菌病中性粒细胞趋化因子

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌VVC临床株黏附作用的影响

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中国真菌学杂志 2015年第1期10卷 25-30页

作者：张梦翔夏丹施高翔陆克乔邵菁吴大强汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合临床学院合肥230038 安徽省中医药科学院中西医结合研究所合肥230038

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal Candidiasis,VVC)白念珠菌临床分离株黏附作用的影响。方法平板法检测与BAEB共培养2 h、4 h时白念珠菌的CFU;XT... 详细信息

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal Candidiasis,VVC)白念珠菌临床分离株黏附作用的影响。方法平板法检测与BAEB共培养2 h、4 h时白念珠菌的CFU;XTT还原法检测与BAEB共培养2 h、4 h的白念珠菌代谢活性;试管法检测白念珠菌絮凝能力;水-烃两相法检测白念珠菌细胞表面疏水性(cell surface hydrophobicity,CSH);荧光显微镜观察菌体活力;扫描电镜观察白念珠菌细胞形态;qRT-PCR法检测黏附相关基因ALS1、CSH1、HWP1、ALS5、ALA1、INT1、MNT2与ALS3的表达。结果 512、1 024μg/m L BAEB可显著抑制黏附2 h、4 h时的白念珠菌的CFU及代谢活性;肉眼和倒置显微镜下观察发现512、1 024μg/m L BAEB可明显延缓絮凝产生的时间;256、512、1 024μg/m L的BAEB均能够显著减少白念珠菌的细胞表面疏水性;qRT-PCR检测表明1 024μg/m L的BAEB作用后,ALS1、CSH1、ALA1、ALS3、INT1、HWP1分别下调18.7%、36%、37.8%、29.6%、19.9%、21.6%,ALS5与MNT2未产生明显变化。结论 BAEB可能通过调节黏附相关基因抑制白念珠菌VVC临床株的黏附作用。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物外阴阴道念珠菌病白念珠菌黏附

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌细胞壁抑制作用研究

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中国真菌学杂志 2018年第5期13卷 262-267页

作者：胡唐玲施高翔徐志庆段强军邵菁汪天明吴大强汪长中安徽省六安市第二人民医院临床药学部六安237008 安徽中医药大学中西医结合学院合肥230012 中药复方安徽省重点实验室合肥230012

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of BaiTouWeng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞壁的抑制作用。方法以spot assay检测BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;流式细胞仪和酶标仪检测BAEB对白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖及几... 详细信息

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of BaiTouWeng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞壁的抑制作用。方法以spot assay检测BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;流式细胞仪和酶标仪检测BAEB对白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖及几丁质变化;qRT-PCR检测白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖合成相关基因FKS-1及几丁质合成相关基因CHS1、CHS2、CHS3、CHS8的表达;透射电镜观察BAEB对白念珠菌细胞壁结构影响。结果 BAEB干预后白念珠菌活性降低,256、512、1 024μg/mL BAEB组白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖暴露与几丁质暴露逐渐增多(P<0.05);1 024μg/mL BAEB干预组FKS1、CHS1、CHS2、CHS3、CHS8分别下调5.57、2.96、3.29、4.47、3.00倍;透射电镜观察BAEB干预后白念珠菌细胞壁结构有破损。结论 BAEB可通过增加β-1,3-葡聚糖和几丁质的暴露,抑制β-1,3-葡聚糖、几丁质及其生物合成相关基因的表达,进而破坏白念珠菌细胞壁完整性。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物白念珠菌细胞壁 β-1,3-葡聚糖几丁质

白头翁汤正丁醇提取物诱导白念珠菌生物被膜细胞凋亡

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中国真菌学杂志 2017年第1期12卷 13-18页

作者：施高翔汪云霞冯鑫邵菁汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合临床学院合肥230038 安徽省中医药科学院中西医结合研究所合肥230038

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对白念珠菌生物被膜细胞凋亡的影响。方法分别以DCFH-DA染色和JC-1染色,用流式细胞仪检测白念珠菌生物被膜细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(M... 详细信息

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对白念珠菌生物被膜细胞凋亡的影响。方法分别以DCFH-DA染色和JC-1染色,用流式细胞仪检测白念珠菌生物被膜细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Annexin V-FITC/PI染色染色荧光显微镜观察白念珠菌生物被膜细胞磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻并检测凋亡率;FITC-VAD-FMK染色观察白念珠菌生物被膜细胞metacaspase活性;DAPI染色观察白念珠菌生物被膜细胞核形态。结果≥128μg/mL BAEB处理后白念珠菌生物被膜细胞内活性氧水平显著升高,线粒体膜电位显著降低,PS外翻增加,凋亡率明显升高,metacaspase酶活性显著升高,细胞核出现固缩和碎裂。结论白头翁汤正丁醇提取物可诱导白念珠菌生物被膜细胞凋亡。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物白念珠菌生物被膜凋亡

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌VVC临床株体外生物膜形成的抑制作用

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中国真菌学杂志 2015年第6期10卷 321-327页

作者：张梦翔陆克乔夏丹夏雪施高翔邵菁吴大强汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合临床学院合肥230038 安徽省中医药科学院中西医结合研究所合肥230038 安徽医科大学口腔医学院合肥230032

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物（Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB）对分离自外阴阴道念珠菌病（vulvovaginal candidiasis,VVC）的白念珠菌临床分离株（以下简称VVC临床株）生物膜形成的影响。方法采用微量稀释... 详细信息

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物（Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB）对分离自外阴阴道念珠菌病（vulvovaginal candidiasis,VVC）的白念珠菌临床分离株（以下简称VVC临床株）生物膜形成的影响。方法采用微量稀释法测定BAEB对白念珠菌的最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration,MIC）;甲基四氮盐（XTT）还原法测定BAEB对白念珠菌生物膜代谢活性的影响,Time-kill法检测BAEB对白念珠菌活菌数的影响;结晶紫染色法测定BAEB对白念珠菌生物膜生物量（Biomass）的影响;扫描电镜（SEM）观察BAEB对白念珠菌生物膜形态结构的影响;激光共聚焦显微镜（CLSM）检测BAEB对白念珠菌生物膜荧光信号强度的影响;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测生物膜相关基因UME6、PES1和HSP90的转录水平变化。结果 BAEB对12株白念珠菌的MIC在64~256μg/mL之间,对白念珠菌生物膜的SMIC80（抑制80%生物膜形成的最低药物浓度）为1 024μg/mL或以上;Time-Kill曲线显示在12h之后,512、1 024μg/mL浓度的BAEB对白念珠菌均具良好的杀伤作用;结晶紫染色法表明512、1 024μg/mLBAEB能够减少其生物膜生物量;SEM观察到1 024μg/mL BAEB能够有效抑制白念珠菌在不同黏附介质上生物膜的完整度;CLSM显示512、1 024μg/mL的BAEB可以明显降低生物膜荧光信号强度;qRT-PCR检测显示在256、512、1 024μg/mL的BAEB作用下,UME6转录水平分别下调了72%、71%、77%,在512、1 024μg/mL的BAEB下HSP90转录水平上调了2.23和3.31倍,而PES1未有明显变化。结论 BAEB可以抑制白念珠菌VVC临床株体外生物膜的形成。

关键词：白头翁汤正丁醇提取物白念珠菌外阴阴道念珠菌病生物膜