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“痛泻要方”抑木组分调控肠道MiRNA-206-3p缓解腹泻型肠易激综合征内脏高敏的实验研究

“痛泻要方”抑木组分调控肠道MiRNA-206-3p缓解腹泻型肠易激综合...

引用

作者：肖瑾成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:建立腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠模型,对比观察痛泻要方拆方对IBS-D大鼠内脏敏感性、miR-206-3p、脑源性神经营养因子mRNA(BDNFmRNA)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响,探究痛泻要方抑木组分是否通过miRNA-206-3p、BDNF... 详细信息

目的:建立腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠模型,对比观察痛泻要方拆方对IBS-D大鼠内脏敏感性、miR-206-3p、脑源性神经营养因子mRNA(BDNFmRNA)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响,探究痛泻要方抑木组分是否通过miRNA-206-3p、BDNFmRNA、BDNF蛋白路径的方式调节IBS-D内脏高敏感,缓解大鼠的症状,进一步完善IBS-D的发病机制研究。方法:将45只成年雄性Wistar大鼠,采用随机抽样法分为空白组,模型组,抑木组(白芍防风组),白芍组,防风组,每组9只。除空白组外,其余大鼠均使用结直肠扩张联合慢性束缚应激连续刺激14天,构建IBS-D内脏高敏感模型,通过观察模型大鼠一般情况、AWR评分以及病理学观察判断模型是否成功,剔除造模失败大鼠。造模结束后使用中药浸膏治疗14天,空白组和模型组仅用蒸馏水灌胃,抑木组予以0.27g/ml的白芍防风浸膏灌胃,白芍组予以0.18g/ml的白芍浸膏灌胃,防风组予以0.09g/ml的防风浸膏灌胃。实验期间观察大鼠一般情况,大便性状,测量体重变化。治疗结束,处死大鼠后取末端结肠组织。首先使用基因测序初步测出各组间的差异miRNA,再使用miRBase、Target Scan网站对各组间的差异miRNA进行分析,获取每个miRNA交叉的基因,最后使用David网站进行GO和KEGG分析获得下游通路,通过以上网站对每个差异miRNA进行筛选,最终获得本实验所需的目标miRNA。使用荧光定量PCR方法测定miR206-3p、BDNFmRNA的表达量;使用酶联免疫吸附法测定BDNF蛋白的表达量。结果:1、一般情况:经药物治疗后的大鼠精神状态、活动量、皮毛色泽好转、食量增加,大便基本成形。2、大鼠体重:药物治疗前,各组大鼠体重增长均小于空白组(p防风组>白芍组,各组间白防组较白芍组明显(p0.05)。4.结肠病理:各组大鼠肠组织未见溃疡、炎细胞浸润,形态完整连续。5.高通量测序:经高通量测序后共获得28条差异miRNA,选取miR-206-3p作为研究重点。6.大鼠结肠miR-206-3p相对表达量:与模型组相比,空白组及三个治疗组中miR-206-3p的相对表达量均升高(p>0.05),三个治疗组间抑木组>防风组>白芍组,各组间差异不明显(p>0.05)。7.大鼠结肠BDNFmRNA相对表达量:与模型组相比,余四组大鼠结肠BDNFmRNA相对表达量均降低(p>0.05),治疗组间抑木组0.05)。8.大鼠BDNF蛋白表达量:与模型组相比,四组大鼠结肠BDNF蛋白表达量均降低(p>0.05),治疗组间抑木组0.05)。结论:1.采用结直肠扩张+慢性束缚应激造模法可导致大鼠超敏反应,腹泻增多,且大鼠肠道无器质性病变,可成功构建IBS-D模型大鼠。2.痛泻要方抑木组及拆分组可能通过上调miR-206-3p表达量,下调BDNFmRNA及BDNF蛋白方式改善IBS-D大鼠的肠道超敏反应,对IBS-D发挥治疗作用。3.大鼠结肠内miR-206-3p可下调BDNFmRNA及BDNF的表达量,为负调节作用。4.拆分组中,防风组在改善大鼠内脏高敏、腹痛腹泻方面优于白芍组。

关键词： IBS-D 痛泻要方痛泻要方拆方 miR-206-3p BDNF

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