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海军军医大学学报 2023年第5期44卷 616-621页

作者：周宇坤李青张昊瑞聂政宋洪元沈炜海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院眼科上海200433

一系列中药复方在临床实践和基础实验中被证明能够抑制病理性新生血管形成。中药小分子是中药复方中实际发挥药效的活性成分,特定中药小分子通过不同途径抑制血管内皮细胞生长因子的表达,从而抑制新生血管形成,为相关血管新生疾病的治... 详细信息

一系列中药复方在临床实践和基础实验中被证明能够抑制病理性新生血管形成。中药小分子是中药复方中实际发挥药效的活性成分,特定中药小分子通过不同途径抑制血管内皮细胞生长因子的表达,从而抑制新生血管形成,为相关血管新生疾病的治疗提供了新思路。新生血管形成在糖尿病性视网膜病变等视网膜新生血管疾病中扮演了重要的角色,也对恶性肿瘤的发生、发展具有重要作用。本文概述了新生血管形成的过程和机制,并以黄酮类、皂苷类、生物碱等中药小分子为主,讨论了中药小分子抑制新生血管形成的机制。

关键词：病理性新生血管形成视网膜新生血管肿瘤新生血管中药小分子黄酮类生物碱类皂苷类

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miR-375对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞功能的抑制作用及其机制

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中华实验眼科杂志 2017年第8期35卷 695-702页

作者：朱江任梅许治国 710004 陕西省眼科诊疗中心西安市第四医院眼科西安交通大学医学院附属广仁医院眼科

背景研究表明miR-375抑制肿瘤细胞的增生、凋亡、迁移和黏附，并对肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）含量的变化进行调控，进而影响血管的生成，但miR-375是否于预视网膜新生血管的形成鲜见报道。目的探讨miR-375对缺氧诱导的人视网... 详细信息

背景研究表明miR-375抑制肿瘤细胞的增生、凋亡、迁移和黏附，并对肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）含量的变化进行调控，进而影响血管的生成，但miR-375是否于预视网膜新生血管的形成鲜见报道。目的探讨miR-375对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞（HRCECs）功能的影响及其可能的作用机制。方法用IMDM完全培养液培养HRCECs，并将细胞分为正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋miR-375拟似剂组、CoCl2＋miR-375拟似剂对照组、CoCl2＋miR-375抑制剂组和CoCl2＋miR-375抑制剂对照组，待细胞生长至对数生长期后用200μmol／LCoCl2处理HRCECs以制备缺氧细胞模型；制备终浓度为50nmol／L的miRNA-脂质体复合物和小干扰RNA（siRNA）-脂质体复合物将miR-375和卷曲蛋白4（FZD4）siRNA转染各组细胞48h。采用MTT法检测各组细胞的增生情况（A值）并计算增生倍数；采用Transwell小室法检测各组迁移的细胞数目；采用ELISA法检测细胞培养液中VEGF和血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）含量；采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR．375mRNA和FZD4mRNA的相对表达量变化；采用Westernblot法分析细胞中Wnt通路相关蛋白的相对表达量变化；采用Matrigel小管形成实验检测细胞的体外形成血管的长度。将培养的细胞分为正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋mock组和CoCl2＋FZD4siRNA组，采用荧光素酶报告基因法探测miR-375靶基因FZD4的表达。结果miR-375处理组miR-375mRNA相对表达量明显高于正常对照组，miR-375拟似剂组细胞中miR-375mRNA相对表达量明显高于miR-375拟似剂对照组，miR-375抑制剂组细胞中miR-375mRNA相对表达量明显低于miR-375抑制剂对照组，差异均有统计学意义（t=-19．237、8．764，均P〈0．01），提示miR-375的转染效率较高。正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋miR-375拟似剂组、CoCl2＋miR-375拟似剂对照组、CoCl2＋miR-375抑制剂组、CoCl2＋miR．375抑制剂对照组间细胞增生倍数、迁移细胞数、细胞培养液中VEGF和VE—Cadherin含量以及体外小管形成长度的总体比较差异均有统计学意义（F=24．324、26．776、14．113、19．225、15．040，均P〈0．001），CoCl2＋miR-375拟似剂组细胞增生倍数、迁移细胞数体外小管形成长度及细胞分泌VEGF和VE—cadherin量均较CoCl2＋miR-375拟似剂对照组明显减少，而CoCl2＋miR-375抑制剂组较CoCl2＋miR-375抑制剂对照组明显增加，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋miR-375拟似剂组、CoCl：＋miR-375拟似剂对照组、CoCl2＋miR-375抑制剂组、CoCl2＋miR-375抑制剂对照组细胞中B—catenin、cyclinD1、MMP2和VEGF蛋白表达量的总体比较差异均有统计学意义（F=11．753、13．283、16．770、10．334，均P〈0．001），CoCl2＋miR-375拟似剂组细胞中B．catenin、cyclinDl、MMP2、VEGF蛋白表达量较CoCl2＋miR-375拟似剂对照组均明显下降，CoCl2＋miR-375抑制剂组较CoCl2＋miR-375抑制剂对照组明显增加，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。CoCl，处理组和CoCl2＋mock组细胞增生倍数、迁移细胞数和小管形成长度均较正常对照组明显增加，CoCl2＋FZD4siRNA组细胞增生倍数、迁移细胞数和小管形成长度均明显低于CoCl2＋mock组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论miR-375抑制缺氧条件下HRCECs的增生、迁移以及血管形成能力，其作用机制与miR-375直接靶向FZD4调控Wnt通路活性有关。

关键词：微小RNA/生理视网膜血管内皮细胞病理性新生血管形成信号转导/生理 Wnt相关蛋白/代谢细胞增生/药物作用基因表达调控

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