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病毒灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测弱阳性结果的影响

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中华检验医学杂志 2020年第4期43卷 358-363页

作者：段秀枝王旭楚俞攀刘伟伟李翔张乐乐张巩唐沪强陈勤吴先国陶志华浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

目的:探讨病毒灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测弱阳性结果的影响。方法:回顾性研究浙江大学医学院附属第二医院2020年1至2月2019新型冠状病毒不同浓度的3例实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测阳性患者的鼻咽拭子标本。采用... 详细信息

目的:探讨病毒灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测弱阳性结果的影响。方法:回顾性研究浙江大学医学院附属第二医院2020年1至2月2019新型冠状病毒不同浓度的3例实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测阳性患者的鼻咽拭子标本。采用不灭活处理和56℃30 min水浴、56℃60 min干浴及60℃30 min干浴3组灭活处理方式对鼻咽拭子保存液标本进行病毒灭活,提取RNA,然后3种商品化新型冠状病毒核酸实时荧光RT-PCR试剂分别进行检测,用循环阈值(Ct)评价病毒灭活对2019新型冠状病毒核酸检测结果影响。结果:灭活前ORF1ab基因Ct值分别为23.28±0.28、25.25±0.25、28.93±0.44、32.06±0.47、35.20±0.38、32.89±0.38、36.24±0.23、33.30±0.46,灭活后ORF1ab基因Ct值分别为灭活组1:23.60±0.20、27.29±0.30、31.83±0.51、37.41±0.46,灭活组2:24.25±0.34、27.18±0.42、31.84±0.61、34.99±1.01、34.89±0.45,灭活组3∶23.37±0.17、26.89±0.52、32.05±0.50;灭活前N基因Ct值分别为24.38±0.09、26.64±0.11、30.35±0.12、33.29±0.33、36.93±0.11、34.50±0.12、35.63±0.12,灭活后N基因Ct值分别为灭活组1:24.66±0.11、28.52±0.14、32.71±0.14、37.00±0.13,灭活组2:25.41±0.10、28.79±0.15、33.29±0.28,灭活组3:23.37±0.11、28.68±0.11、33.54±0.13、37.18±0.23。灭活前后扩增Ct值比较差异无统计学意义(ORF1ab基因:t=-1.416;N基因:t=-1.379,P均>0.05),3组灭活处理组间Ct值差异也无统计学意义(ORF1ab基因:t=-0.460;N基因:t=-0.132,P均>0.05)。但不同稀释倍数下的灭活组(1,2,3)与未灭活组Ct值比较,未灭活组和灭活组(1,2,3)Ct值差异有统计学意义。10×稀释:ORF1ab Ct值:未灭活组:25.25±0.25,灭活组1,2,3分别为27.29±0.30、27.18±0.42和26.89±0.52,t(ORF1ab)=-7.327,P灭活组:26.64±0.11,灭活组1,2,3分别为28.52±0.14、28.79±0.15和28.68±0.11,t(N)=-19.340,P灭活组:28.93±0.44,灭活组1,2,3分别为31.83±0.51、31.84±0.61和32.05±0.50,t(ORF1ab)=-9.462,P灭活组:30.35±0.12,灭活组1,2,3分别为32.71±0.14、33.29±0.28和33.54±0.13,t(N)=-18.583,P灭活后2019新型冠状病毒核酸检测阳性率下降,未灭活组阳性检出率(7/11、8/11、5/11)和灭活组(灭活组1:4/11、4/11、3/11,灭活组2:3/11、3/11、3/11,灭活组3:3/11、3/11、2/11)比较,差异有统计学意义(Z=-2.670,P灭活组之间(灭活组1:4/11、4/11、3/11,灭活组2:3/11、3/11、3/11,灭活组3:3/11、3/11、2/11)差异无统计学意义(χ^2=4.413,P>0.05),3种试剂阳性检出率比较(试剂1:7/11、4/11、3/11、3/11,试剂2:8/11、4/11、3/11、3/11,试剂3:5/11、3/11、3/11、2/11),差异无统计学意义(χ^2=1.199,P>0.05)。结论:病毒灭活处理会使2019新型冠状病毒核酸降解,导致检测Ct值增加,使低浓度标本出现假阴性结果。

关键词：冠状病毒属病毒灭活核酸类实时聚合酶链反应

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理化因素对非洲猪瘟病毒灭活效果的研究

华南农业大学学报 2023年第3期44卷 348-356页

作者：龚浪孙英硕许润达陈熊男高琦黄钊陈孝军郑佳琛郭彦辰吴芮霞曾凡亮王衡张桂红华南农业大学兽医学院广东广州510642

[目的]了解我国非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的生物学特性及理化抗性,提高猪场生物安全水平以防控非洲猪瘟。[方法]通过红细胞吸附试验和qPCR试验验证不同理化因素(包括静置、温度、UVC照射、室内外干燥、阳光暴晒和... 详细信息

[目的]了解我国非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的生物学特性及理化抗性,提高猪场生物安全水平以防控非洲猪瘟。[方法]通过红细胞吸附试验和qPCR试验验证不同理化因素(包括静置、温度、UVC照射、室内外干燥、阳光暴晒和消毒剂)对ASFV的灭活效果。[结果]UVC照射30 min即可灭活病毒,照射时间越长,ASFV核酸降解越严重;室内干燥2.5 d、室外干燥1.5 d、阳光暴晒30 min均可灭活ASFV,但不能降解ASFV核酸;常见消毒剂对ASFV的杀灭效果良好,各消毒剂按照推荐稀释浓度室温作用15或30 min,除碘酸混合溶液外均能使ASFV完全失活;温度升高(4、25和37℃)会增强消毒剂的消毒作用;有机物FBS的存在会削弱消毒剂的作用,且随FBS体积分数增加(0、10%和30%)消毒剂的消毒效果会降低。[结论]本文系统研究了常见的理化因素对ASFV灭活效果的影响,有助于全面了解ASFV生物学特性,对非洲猪瘟的防控具有重要指导意义。

关键词：非洲猪瘟病毒理化抗性消毒剂病毒灭活核酸降解

过硫酸氢钾复合物粉对4种常见水产病原微生物的杀灭效果

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南方水产科学 2023年第4期19卷 148-157页

作者：李声平董靖杨移斌宋怿刘绍春艾晓辉中国水产科学研究院长江水产研究所湖北武汉430223 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院北京100039 岳阳渔美康生物科技有限公司湖南岳阳414199

为验证过硫酸氢钾复合物粉在水产养殖中消毒的有效性,评价了其对草鱼(Ctenopharyngodon idella)呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)、斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)病毒(Channel catfish virus,CCV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)4种水产常见致病病原的杀灭效果,和有机物、温度、pH 3种因素对杀菌效果的影响,并在此基础上开展了过硫酸氢钾复合物粉对池塘养殖水体中目标菌的杀灭试验,和对患嗜水气单胞菌的病鲫(Carassius auratus)的药效试验。结果显示,过硫酸氢钾复合物粉对4种致病微生物均具有显著的杀灭效果。降低菌悬液中有机物浓度、适当提高作用温度或适当降低消毒液pH,均能促进过硫酸氢钾复合物粉消毒液的杀菌效果。通过目标菌的杀灭试验和药效试验,进一步确定了该消毒剂在实际使用中对目标菌杀灭的有效性和对鲫感染嗜水气单胞菌后的显著治疗效果。研究表明,过硫酸氢钾复合物粉是潜在的水产用消毒剂。

关键词：过硫酸氢钾复合物粉消毒病毒灭活杀菌效果

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过氧乙酸/乙醇对异体皮性能的影响

中国组织工程研究 2022年第10期26卷 1537-1543页

作者：胡凯陈维明骆井万李淼汪晶晶李矛沈亚俊陈金发白玉龙常州市亘从生物力学研究中心江苏省常州市213003 上海亚朋生物技术有限公司上海市201201 首都医科大学附属北京同仁医院北京市100730 首都医科大学附属北京口腔医院北京市100050

背景:过氧乙酸/乙醇是一种理想的动物源及同种异体组织病毒灭活试剂,其对病原微生物杀灭效果显著,但是未见其对异体皮其他性能影响的研究报道。目的:研究过氧乙酸/乙醇处理对异体皮性能的影响。方法:配制3种不同浓度的过氧乙酸/乙醇溶液... 详细信息

背景:过氧乙酸/乙醇是一种理想的动物源及同种异体组织病毒灭活试剂,其对病原微生物杀灭效果显著,但是未见其对异体皮其他性能影响的研究报道。目的:研究过氧乙酸/乙醇处理对异体皮性能的影响。方法:配制3种不同浓度的过氧乙酸/乙醇溶液,2.3 g/L过氧乙酸+体积分数24%乙醇(设为P/E-1)、1.8 g/L过氧乙酸+体积分数4.8%乙醇(设为P/E-2)、15.33 g/L过氧乙酸+体积分数24%乙醇(设为P/E-3)。采用不同浓度的过氧乙酸/乙醇溶液分别处理异体皮15,30,45,60 min,通过外观、组织学染色、力学性能、糖胺聚糖含量检测等评价皮肤结构性能变化,并检测经处理后皮肤的化学试剂残留情况和细胞毒性。结果与结论:①各浓度过氧乙酸/乙醇溶液处理不同时间的异体皮外观无明显差异;②苏木精-伊红染色显示,与未处理的异体皮相比,P/E-1与P/E-2处理15 min后的皮肤细胞外基质结构无明显变化,处理15 min以上的皮肤细胞外基质结构相对疏松,但保留了结构的完整性;P/E-3处理15 min时,皮肤真皮层中出现大孔,处理15 min以上后真皮层出现较多孔洞,细胞外基质结构被严重破坏;③同一浓度溶液处理下,处理时间越长,皮肤的糖胺聚糖含量、拉伸强度和弹性模量越低;相同处理时间下,P/E-1处理组拉伸强度最大、P/E-3处理组最小,P/E-2处理组断裂伸长率最大、P/E-3处理组最小,P/E-3处理组韧性最小;④试剂残留检测显示,过氧乙酸和乙醇可从异体皮去除,残留量在规定的限度要求内,无明显的细胞毒性;⑤结果显示在相同的处理时间下,P/E-1组皮肤的性能及结构与原材料最接近。

关键词：材料病毒灭活异体皮脱细胞真皮基质过氧乙酸/乙醇法

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重组细菌活载体疫苗研究进展

中国预防兽医学报 2022年第2期44卷 219-224,231页

作者：陈妍卉刘军亭于潜刘久源裴翊峰庞富生高栋鹏董浩吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心/生命科学学院吉林长春130118

目前,动物传染病的防治主要依赖于疫苗,而疫苗主要采用减毒疫苗或灭活疫苗。虽然减毒疫苗和灭活疫苗的研制技术成熟,但仍有较多的不足之处。减毒疫苗是选择具有活性的无毒或毒力较弱的非致病性病原体所制成的疫苗,能够诱导机体产生细胞... 详细信息

目前,动物传染病的防治主要依赖于疫苗,而疫苗主要采用减毒疫苗或灭活疫苗。虽然减毒疫苗和灭活疫苗的研制技术成熟,但仍有较多的不足之处。减毒疫苗是选择具有活性的无毒或毒力较弱的非致病性病原体所制成的疫苗,能够诱导机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应,但在接种后可能会出现毒力返强的现象[1]。因此,出于安全考虑,预防疾病一般首选灭活疫苗,但灭活疫苗在灭活后可能出现病毒灭活不全的现象。

关键词：减毒疫苗灭活疫苗细胞免疫反应体液免疫反应活载体疫苗病毒灭活毒力返强预防疾病

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牛源肝素钠特性与病毒灭活研究

药物生物技术 2022年第2期29卷 127-131页

作者：李志敏刘力波孙鹏戚亦宁田志鹏白文举崔洁河北常山生化药业股份有限公司河北石家庄050800 方达医药技术(上海)有限公司上海201203

对牛源肝素钠特性及制备工艺的病毒去除/灭活能力进行研究。采用分子排阻色谱法、羊血浆法、SAX-HPLC法等对牛源肝素钠与猪源肝素钠的分子量、效价、双糖等特性进行分析研究;通过核磁共振(NMR)波谱法对牛源肝素钠、猪源肝素钠进行分析,... 详细信息

对牛源肝素钠特性及制备工艺的病毒去除/灭活能力进行研究。采用分子排阻色谱法、羊血浆法、SAX-HPLC法等对牛源肝素钠与猪源肝素钠的分子量、效价、双糖等特性进行分析研究;通过核磁共振(NMR)波谱法对牛源肝素钠、猪源肝素钠进行分析,并对获得的^(1)H-NMR谱和^(13)C-NMR谱进行对比;采用指示病毒,验证高温、高pH、离子交换、氧化处理等步骤的病毒去除/灭活能力。相对于猪源肝素钠,牛源肝素钠重均分子量(M_(r))低约5%,效价低约23%,其主要双糖含量、NMR波谱图也有一定差别;病毒去除/灭活验证表明,处理前后病毒感染性滴度下降值达4个Log_(10)值以上。特性研究表明牛源肝素钠与猪源肝素钠存在一定差别,病毒去除/灭活验证研究证明制备工艺能够有效去除/灭活病毒。

关键词：牛源肝素钠分子量效价双糖核磁共振病毒灭活

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胶原蛋白海绵的制备及安全性评价

中国组织工程研究 2022年第22期26卷 3460-3466页

作者：刘超远高田芳黄伟杭州协合医疗用品有限公司浙江省杭州市310018

背景:自动物体提取胶原蛋白并经冻干工艺得到胶原蛋白海绵,可赋予材料良好的临床止血性能,同时可实现在机体中的自身降解,但所提取的胶原蛋白也存在携带病毒及体内免疫原性风险。经过酸酶结合工艺处理去除胶原端肽、并灭活病毒,实现材... 详细信息

背景:自动物体提取胶原蛋白并经冻干工艺得到胶原蛋白海绵,可赋予材料良好的临床止血性能,同时可实现在机体中的自身降解,但所提取的胶原蛋白也存在携带病毒及体内免疫原性风险。经过酸酶结合工艺处理去除胶原端肽、并灭活病毒,实现材料良好的生物安全性。目的:规模化生产制备胶原蛋白海绵,并对其进行免疫原性及病毒灭活有效性的整体生物安全性评价。方法:通过酸酶结合法从牛跟腱中提取胶原蛋白,经冷冻干燥工艺得到胶原蛋白止血海绵。将1,4片胶原蛋白海绵分别埋植于Wistar大鼠腹部皮下,埋植1,4,8,12周后对大鼠体征、血常规、T淋巴细胞增殖、免疫球蛋白含量等指标进行检测。取3批次的牛跟腱粉碎后中间体样品,分别浸泡于伪狂犬病毒、水泡性口炎病毒、猪细小病毒和猪脑心肌炎病毒液中,检验酸酶结合法处理的胶原蛋白海绵对病毒灭活的有效性。结果与结论:(1)于无菌车间规模化提取胶原蛋白,经冷冻干燥后得到胶原蛋白海绵,并完成内外包装和辐照灭菌的生产全过程;(2)埋植1,4片胶原蛋白海绵大鼠的生理体征、血常规、NK细胞杀伤活性、T淋巴细胞增殖状态及免疫球蛋白含量等指标均表现正常;(3)酸酶法工艺灭活的3批次牛跟腱粉碎后中间体样品均无可以检测到的病毒,可使病毒滴度下降4个logs以上;同时,对未能检测到的病毒滴度样品进行了敏感细胞接种盲传3代,结果未显示细胞病变;(4)免疫原性和病毒灭活检测表明,所制备的胶原蛋白止血海绵有着良好的生物安全性。

关键词：胶原蛋白海绵止血材料端肽免疫原性冷冻干燥酸酶结合法病毒灭活

气态臭氧对不同食品和包装材料上3种模式噬菌体的消毒效果评价

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食品安全质量检测学报 2023年第20期14卷 236-244页

作者：陈君然彭艳艳李海川张静敏胡开蕾胡云峰天津科技大学食品科学与工程学院天津300457

目的采用φ6、φX174和MS23种被广泛接受的模式噬菌体评价气态臭氧对食品和包装材料的消毒效果。方法以食品、包装材料及其不同模式噬菌体为研究对象,从臭氧通入量、处理时间、模式噬菌体对数减少及其消杀效果等方面评价其对食品及包装... 详细信息

目的采用φ6、φX174和MS23种被广泛接受的模式噬菌体评价气态臭氧对食品和包装材料的消毒效果。方法以食品、包装材料及其不同模式噬菌体为研究对象,从臭氧通入量、处理时间、模式噬菌体对数减少及其消杀效果等方面评价其对食品及包装材料的影响。结果气态臭氧对除花生仁外的各种食品中的φ6有很好的去除效果[降低大于1.6个对数级(log),灭活大于97.00%],对花生仁上的φX174和MS2的影响很小[降低小于0.19个对数级(log),灭活50.00%],吸附在大豆上的病毒替代品被有效消毒(降低大于1.16个对数级);气态臭氧能有效灭活包装材料上的φ6、φX174和MS2,明显降低牛皮纸、塑料和玻璃板上φ6和MS2的含量[降低大于0.83个对数级(log),灭活大于84.44%],适度降低φX174的含量。结论气态臭氧可以有效地去除φ6、φX174和MS2,但对不同材料上不同模式噬菌体的灭活效果存在一定的差异。

关键词：臭氧替代病毒 φ6 φX174 MS2 病毒灭活

病毒灭活和滤除白细胞对冷沉淀凝血因子质量的影响

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北京医学 2023年第2期45卷 151-153,157页

作者：平娜娜兰静张雅莉陕西省血液中心成分科西安710061

目的探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活和(或)滤除白细胞对冷沉淀凝血因子质量的影响。方法选取陕西省血液中心2020年2月采集的400 ml全血60袋,随机分成冷沉淀组(对照组)、去白冷沉淀组、灭活冷沉淀组和去白灭活冷沉淀组,每组15袋,采用单因... 详细信息

目的探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活和(或)滤除白细胞对冷沉淀凝血因子质量的影响。方法选取陕西省血液中心2020年2月采集的400 ml全血60袋,随机分成冷沉淀组(对照组)、去白冷沉淀组、灭活冷沉淀组和去白灭活冷沉淀组,每组15袋,采用单因素方差分析比较4组凝血因子Ⅷ和FIB含量。结果对照组、去白冷沉淀组和灭活冷沉淀组Ⅷ因子含量[(141.76±32.66)IU,(135.23±33.78)IU和(117.06±32.39)IU]均高于质量标准(≥80 IU),且符合率均>75.0%;去白灭活冷沉淀组凝血因子Ⅷ含量低于对照组[(101.09±37.47)IU比(141.76±32.66)IU],差异有统计学意义(P 75.0%。结论病毒灭活或滤除白细胞制备的凝血因子Ⅷ和FIB含量均符合国家相关标准,值得在临床推广应用。

关键词：亚甲蓝光化学法病毒灭活滤除白细胞凝血因子Ⅷ 纤维蛋白原