检索结果-南通市图书馆

呼吸道合胞病毒感染不同气道上皮细胞的病变特点及易感性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2022年第2期38卷 371-377页

作者：金鑫杨丽张梅余本莉尚鲁俊杨斌崔玉霞范丽余福勋叶芝旭贵州省人民医院贵阳550025 贵州大学贵阳550025 中国卫生健康委员会肺脏免疫性疾病重点实验室贵阳550025

为了比较几种不同气道上皮细胞对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染后病变特点及易感性。采用RSV A2株感染Hep-2、A549、16HBE、BEAS-2B细胞后,奥林巴斯倒置免疫荧光显微镜观察细胞病变效应,免疫荧光检测RSV N蛋白... 详细信息

为了比较几种不同气道上皮细胞对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染后病变特点及易感性。采用RSV A2株感染Hep-2、A549、16HBE、BEAS-2B细胞后,奥林巴斯倒置免疫荧光显微镜观察细胞病变效应,免疫荧光检测RSV N蛋白表达及空斑实验测定细胞培养上清液中病毒滴度。结果显示RSV A2株感染Hep-2细胞后最早形成典型的合胞病变,A549细胞次之,16HBE及BEAS-2B形成病变的时间最晚。免疫荧光检测到RSV N蛋白表达特点与细胞病变特点一致。RSV A2在Hep-2上产生的病毒滴度最高,A549细胞次之,在16HBE上产生的病毒滴度最低。提示Hep-2、A549细胞对RSV具有高度易感性,以Hep-2最为敏感。而16HBE、BEAS-2B细胞对RSV感染不敏感,其中16HBE最不敏感。本研究可为选择合适的上皮细胞进行RSV相关研究奠定基础。

关键词：呼吸道合胞病毒(RSV) 上皮细胞细胞病变效应易感性病毒滴度

冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度FFA法的建立及验证

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国免疫学杂志 2023年第7期39卷 1500-1506页

作者：贾伟支百慧韩玲朱大永王荣张春赵慧刘大维吉林农业大学生命科学学院长春130118 长春百克生物科技股份公司长春130012 中国食品药品检定研究院北京102629

目的:建立并验证荧光灶法(FFA)检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度的可行性。方法:采用FFA分别检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗H1N1型、H3N2型、B型单一病毒收获液病毒滴度,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性和耐用性。结果:该... 详细信息

目的:建立并验证荧光灶法(FFA)检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度的可行性。方法:采用FFA分别检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗H1N1型、H3N2型、B型单一病毒收获液病毒滴度,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性和耐用性。结果:该方法专属性良好;准确度回收率均为80%~115%,病毒滴度的试验内及试验间精密度RSD值均病毒滴度呈线性关系,相关系数R2均>0.98;不同孵育温度的病毒滴度RSD值均病毒滴度检测。

关键词：流感病毒冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度 FFA

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

囊泡相关膜蛋白A调控牛病毒性腹泻病毒复制

微生物学通报 2022年第2期49卷 635-644页

作者：史慧君袁圆圆郭妍婷陈俊贞杨莉冉多良付强新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

[背景]牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)是致犊牛腹泻的重要病原之一,而目前BVDV与宿主因子互作机理研究较少,成为限制BVDV防控的重要原因。[目的]探明囊泡相关膜蛋白A(vesicle-associated membrane protein A,VAPA)... 详细信息

[背景]牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)是致犊牛腹泻的重要病原之一,而目前BVDV与宿主因子互作机理研究较少,成为限制BVDV防控的重要原因。[目的]探明囊泡相关膜蛋白A(vesicle-associated membrane protein A,VAPA)对BVDV复制的影响。[方法]根据GenBank中VAPA基因,使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向VAPA的向导RNA(small guide RNA,sgRNA),融合后克隆至慢病毒lentiCRISPR v2载体中,包装慢病毒后感染牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK),使用嘌呤霉素连续筛选5代,使用Western Blot检测VAPA蛋白敲除(knockout,KO)情况;BVDV感染VAPA KO细胞不同时间后,收集细胞提取总RNA,并将等质量的RNA反转录成cDNA,使用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫荧光分析(immunofluorescence assay,IFA)分别检测BVDV 5’-非翻译区(untranslated region,UTR)mRNA水平和双链RNA(double strand RNA,dsRNA)积累水平,于BVDV感染后不同时间观察致细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,并收集子代病毒液,使用Reed-Muench法计算子代病毒滴度变化。接种等量VAPAKO和乱码序列对照scramble细胞后不同时间进行活细胞计数,检测VAPA KO是否影响细胞活性。[结果]慢病毒感染后使用嘌呤霉素筛选,Western Blot检测VAPA蛋白明显降低,成功获得VAPAKO细胞;与对照scramble细胞相比,BVDV感染VAPAKO细胞后5’-UTR mRNA水平和dsRNA积累量均显著性降低,BVDV感染造成的CPE明显推迟并减轻,子代病毒滴度在12 h和36 h显著下降,在48 h极显著下降;与scramble细胞相比,VAPA KO细胞活性未受影响。[结论]VAPAKO后显著性抑制BVDV复制,为BVDV防控新技术的建立提供重要靶标。

关键词：囊泡相关膜蛋白A 牛病毒性腹泻病毒复制水平双链RNA 病毒滴度

低温常压等离子体提高MDBK细胞中IBRV病毒滴度的作用与机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2022年第2期38卷 422-430页

作者：缪宇杰韩佩宇戴晓峰管政兵江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学无锡医学院无锡214122

加强病毒的繁殖可以帮助MDBK细胞生产更多的IBRV病毒用于生产灭活病毒疫苗。已证明低温常压等离子体(Cold atmospheric plasma,CAP)是一种依靠活性氧来实现MDBK细胞中病毒显著增殖的物理方法,可有效增强病毒的传播,其中牛鼻气管炎病毒(I... 详细信息

加强病毒的繁殖可以帮助MDBK细胞生产更多的IBRV病毒用于生产灭活病毒疫苗。已证明低温常压等离子体(Cold atmospheric plasma,CAP)是一种依靠活性氧来实现MDBK细胞中病毒显著增殖的物理方法,可有效增强病毒的传播,其中牛鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotrachieitis virus,IBRV)和牛肾细胞(Madin-Darby Bovine Kidney,MDBK)分别被用作模型所需病毒和细胞系。CAP被证明与病毒感染具有协同作用,可以在G2/M期阻止宿主细胞分裂增殖,降低细胞膜电位,增加细胞内钙离子水平并诱导细胞选择性自噬。通过检测免疫相关蛋白表达,CAP被证明可以抑制病毒触发的免疫原性信号传导。综上所述,我们证明了CAP触发了宿主资源对病毒繁殖的最大化,这有利于病毒疫苗的生产,并为在医疗和卫生领域应用CAP开辟了新的可能。

关键词：低温常压等离子体(CAP) 牛鼻气管炎病毒(IBRV) 牛肾细胞(MDBK) 病毒滴度

SARS-CoV-2收获液滴度稳定性及灭活动力学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2023年第2期36卷 129-132,144页

作者：郭冰峰韩斌郝一楠王魁殷吉祥李岩李楠凌相平潘若文华兰生物疫苗股份有限公司河南新乡453003

目的对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)收获液在2~8℃环境下的滴度稳定性及β-丙内酯灭活剂对病毒的灭活效果进行研究。方法将3批(批号:202111001、202111002和202111003)SARS-CoV-2收获液于2~8℃放置12 d,每隔3 d(0、3、6、9、12 d)取样,采用Karber法检测病毒滴度;2~8℃过夜平衡的3批病毒收获液按1∶4000的体积分数加入β-丙内酯进行灭活,在不同的灭活时间点(0、0.5、1、1.5、2、3、4、8、16、24 h)取样检测病毒滴度,取灭活8.0、16、24 h的病毒液进行灭活验证,取灭活24 h的病毒灭活液进行透射电镜观察。结果2~8℃环境下,SARS-CoV-2的滴度随放置时间的延长不断降低,0~3 d滴度下降不明显,第12天滴度由最初的7.75、6和7.5 lgCCID50/mL降至5.75、4.625和6.25 lgCCID50/mL,表明2~8℃环境下病毒活力呈逐渐降低的趋势;随着灭活时间的增加,病毒滴度不断降低,灭活3 h后,病毒滴度已无法检出。透射电镜观察显示,灭活后的病毒颗粒完整,刺突蛋白分布均匀。结论2~8℃环境下保存的SARS-CoV-2毒力不稳定,应尽快进行后续的灭活纯化工艺;病毒灭活3 h后滴度已无法检出,可为灭活工艺的确定提供参考。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 病毒滴度灭活动力学灭活验证

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

发热伴血小板减少综合征病毒温度敏感性研究

中国人兽共患病学报 2022年第1期38卷 25-28页

作者：韦雪敏李书晗王耀陈梦婷赵丽王志玉万敏温红玲山东大学齐鲁医学院公共卫生学院微生物检验学系山东省“十三五”高等学校感染性疾病防控重点实验室济南250012 山东省医疗器械和药品包装检验研究院济南250101

目的研究发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)对温度的敏感性,为SFTSV的消毒和实验室生物安全防护提供依据。方法将SFTSV细胞培养上清液分装到250μL的PCR管中,100μL/管,分别放置在... 详细信息

目的研究发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)对温度的敏感性,为SFTSV的消毒和实验室生物安全防护提供依据。方法将SFTSV细胞培养上清液分装到250μL的PCR管中,100μL/管,分别放置在4℃冰箱,以及25℃、37℃、39℃、56℃、70℃金属浴中,处理预定时间后,再将其感染Vero细胞,采用间接免疫荧光法测定病毒滴度。结果随温度的升高,病毒滴度下降速度加快,在4℃、25℃、37℃和39℃放置24 h后病毒滴度由10^(7.25)/100μL分别下降到10^(7.00)/100μL、10^(6.75)/100μL、10^(6.50)/100μL和10^(5.00)/100μL。同一温度,随放置时间的延长,病毒滴度下降趋势也愈加明显,SFTSV在4℃、25℃、37℃放置72 h后,病毒滴度由10^(7.25)/100μL分别下降到10^(6.63)/100μL、10^(6.50)/100μL和10^(3.38)/100μL。SFTSV在39℃放置72 h失去感染性,在56℃作用180 min或70℃放置5 min即被灭活。结论SFTSV 70℃放置5 min即被灭活,但其在4℃和25℃条件下放置3 d,病毒滴度变化不明显,实验室和医务人员应重视个人防护和对被SFTSV污染过的物品的消毒。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒病毒滴度温度

狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上适应株的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2022年第7期35卷 785-789页

作者：廖辉吴琼焦龙甄祖刚杨文腰周荔葆辽宁成大生物股份有限公司辽宁沈阳110179

目的建立狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上的适应株,为狂犬病疫苗研究提供生产用毒株。方法将狂犬病病毒固定株PV2061接种于MRC-5细胞并进行连续性传代,通过对感染剂量(1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500)、收获天数(... 详细信息

目的建立狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上的适应株,为狂犬病疫苗研究提供生产用毒株。方法将狂犬病病毒固定株PV2061接种于MRC-5细胞并进行连续性传代,通过对感染剂量(1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500)、收获天数(4、7、10、13、16 d)及感染方式(混种感染、吸附感染、带毒传代)的优化,确定在MRC-5细胞上的培养条件,并分析不同层析介质(Sepharose 4FF、Sepharose 6FF)对狂犬病病毒分离纯化效果的影响。结果狂犬病病毒固定株PV2061能较好地适应MRC-5细胞,通过连续性传代,在第4代病毒滴度可达6.0 lgLD_(50)/mL以上,11~19代病毒滴度稳定在6.5 lgLD_(50)/mL。感染剂量在1∶100~1∶500范围内,病毒滴度均能达6.0 lgLD_(50)/mL以上;病毒峰值主要集中在8~13 d;混种感染和带毒传代优于吸附感染,病毒滴度均在5.5 lgLD_(50)/mL以上。与Sepharose 6FF相比,Sepharose 4FF能有效去除总蛋白质,两种介质对抗原回收率均在85%~120%范围内,牛血清白蛋白残留量均低于50 ng/mL。结论建立了MRC-5细胞传代适应的狂犬病病毒适应株MPV2061,为后续人用狂犬病疫苗生产工艺的研究提供了数据支持。

关键词：狂犬病病毒固定株二倍体细胞连续传代病毒滴度感染方式层析纯化

不同细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的比较

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2022年第8期35卷 918-921,927页

作者：杨振清刘喜苹文韬李涛艾晗段黎恒张玉平王文慧王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的比较两种不同厂牌聚苯乙烯细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的差异。方法采用不同浓度血清(10%、8%、5%),在两组不同厂牌细胞工厂(A组:无锡耐思生物科技有限公司,B组:美国康宁公司)中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB... 详细信息

目的比较两种不同厂牌聚苯乙烯细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的差异。方法采用不同浓度血清(10%、8%、5%),在两组不同厂牌细胞工厂(A组:无锡耐思生物科技有限公司,B组:美国康宁公司)中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,观察细胞形态变化并计数;在细胞长成致密单层后,接种SP-A株F基因型腮腺炎病毒,37℃培养7~9 d收获病毒液,经过滤后,获得疫苗原液。将病毒收获液、疫苗原液样品于4℃放置14 d、37℃放置7 d后检测病毒滴度,并按《中国药典》三部(2020版)要求检测相关安全性指标。结果两种不同厂牌细胞工厂培养的KMB17细胞生长状态和形态无明显差异,在细胞培养基的血清浓度为5%时,可获得较高滴度的病毒收获液;在该血清浓度下,两种不同厂牌细胞工厂培养的病毒收获液和疫苗原液感染性滴度均值为6.50 LgCCID50/mL,4℃放置14 d和37℃放置7 d后,A组与B组细胞工厂病毒滴度下降范围差异均无统计学意义(P>0.05);两种不同厂牌细胞工厂制备的病毒收获液和疫苗原液的无菌、分枝杆菌、支原体和细菌内毒素检查指标均符合《中国药典》三部(2020版)要求。结论两种不同厂牌细胞工厂均可用于制备SP-A株F基因型腮腺炎减毒活疫苗,本研究为F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化生产提供了实验依据。

关键词：细胞工厂 F基因型腮腺炎减毒活疫苗人二倍体细胞病毒滴度

两种保护剂对新型水痘-带状疱疹病毒（Oka-7S）保护效果评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2024年

作者：李航徐俊峰姜雪鸥魏波李萌房佳张夫坤长春祈健生物制品有限公司研究室

目的在不同病毒保护剂作用下，比较冻融、超声、温度对新型水痘-带状疱疹病毒（varicella-herpes zoster virus,VZV）(Oka-7S)的影响。方法采用-80℃低温对1和2号病毒保护剂条件下的Oka-7S株病毒样品（含胞内及胞外病毒样品）反复冻融... 详细信息

目的在不同病毒保护剂作用下，比较冻融、超声、温度对新型水痘-带状疱疹病毒（varicella-herpes zoster virus,VZV）(Oka-7S)的影响。方法采用-80℃低温对1和2号病毒保护剂条件下的Oka-7S株病毒样品（含胞内及胞外病毒样品）反复冻融4次，检测每次冻融后的病毒滴度；采用20 kHz对不同病毒保护剂条件下的Oka-7S株病毒样品（含胞内及胞外病毒样品）反复超声6次，检测每次超声后病毒滴度；在4、25、37℃条件，检测不同病毒保护剂条件下Oka-7S株病毒样品（含胞内及胞外病毒样品）的存活时间。结果 2号保护剂对Oka-7S株胞内及胞外病毒样品保护效果最好；-80℃低温条件下，Oka-7S株胞内病毒样品滴度更高，且冻融1次效果最好；超声条件下，2号保护剂能够使Oka-7S株胞内病毒释放更多的病毒颗粒，同时Oka-7S株胞外病毒样品滴度更高，且Oka-7S株胞内病毒样品在20 kHz,3 s效果最好，而Oka-7S株胞外病毒样品在20 kHz,1 s效果最好；Oka-7S株胞内及胞外病毒样品在4℃存活时间更久，且2号保护剂与1号保护剂相比，能够明显延长样品保存时间。结论不同保存条件下，2号保护剂在冻融、超声、温度条件下对病毒保护效果更好，且Oka-7S株胞内及胞外病毒样品的滴度损失更小。

关键词：水痘-带状疱疹病毒 Oka-7S 保护剂冻融超声温度病毒滴度