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丙型肝炎病毒核心蛋白与其结合蛋白HCBP12在HepG2细胞中的相互作用

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第四军医大学学报 2008年第16期29卷 1468-1471页

作者：李小权张树林成军王琦李国力洪源西安交通大学医学院第一附属医院儿科陕西西安710061 北京地坛医院传染病研究所北京100011

目的:使用哺乳动物双杂交系统探讨HCV-core与HCBP12在人肝癌细胞HepG2细胞中的相互作用.方法:PCR分别扩增含HCV core及HCBP12的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体,经测序正确后再分别克隆入哺乳动物双杂交的表达质粒PBIND和PACT中,并转染HepG2... 详细信息

目的:使用哺乳动物双杂交系统探讨HCV-core与HCBP12在人肝癌细胞HepG2细胞中的相互作用.方法:PCR分别扩增含HCV core及HCBP12的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体,经测序正确后再分别克隆入哺乳动物双杂交的表达质粒PBIND和PACT中,并转染HepG2细胞,48h后检测细胞中报告基因luciferase activity的表达水平.结果:Dual-Luciferase Activety系统检测显示PBIND-core与PACT-HCBP12实验组萤火虫荧光与海肾素荧光的比值明显高于其他阴性对照组,但低于阳性对照组.结论:哺乳动物双杂交系统证实HCV核心蛋白与其结合蛋白HCBP12在人肝癌细胞系中HepG2中有一定的相互作用,为进一步研究HCV-core和HCBP12的功能奠定基础.

关键词：肝炎病毒病毒核心蛋白质类 HCBP12 哺乳动物双杂交系统基因,报告

乙型肝炎病毒核心蛋白小干扰RNA载体的构建与验证

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中华实验和临床病毒学杂志 2014年第6期28卷 479-481页

作者：赵培庆柴巨川盖潇潇高立芬马春红梁晓红山东大学医学院免疫学研究所济南250012 淄博市中心医院中心实验室山东大学医学院检验科

目的构建针对乙型肝炎病毒核心蛋白的小干扰RNA真核表达载体,并验证其干扰效果.方法设计针对HBV基因组（ayw亚型）HBc基因的小干扰RNA序列（位于2147 bp ～2165 bp序列）,目的片段与载体成功连接后转入大肠埃希菌DH5α,酶切及测序验... 详细信息

目的构建针对乙型肝炎病毒核心蛋白的小干扰RNA真核表达载体,并验证其干扰效果.方法设计针对HBV基因组（ayw亚型）HBc基因的小干扰RNA序列（位于2147 bp ～2165 bp序列）,目的片段与载体成功连接后转入大肠埃希菌DH5α,酶切及测序验证其正确性.最后以脂质体转入HepG2.2.15细胞中,检测其干扰效果.结果成功构建针对乙型肝炎病毒核心蛋白的小干扰RNA真核表达载体,并命名为pshRNA-HBc..酶切及测序验证正确,pshRNA-HBc对HepG2.2.15细胞中HBc表达具有特异性干扰效果.结论构建针对乙型肝炎病毒核心蛋白的小干扰RNA真核表达载体,为后续研究HBc的生物学功能奠定良好基础.

关键词：肝炎病毒,乙型病毒核心蛋白质类

丙型肝炎病毒核心蛋白通过活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化的研究

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中华普通外科学文献（电子版） 2015年第6期9卷 431-436页

作者：周嘉嘉陈汝福邓小耿高文超郑上游程帝周泉波张杰中山大学孙逸仙纪念医院外科广州510120

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)对肝癌细胞信号转导子和转录激活子3(stat3)通路及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将含HCVc基因序列的重组质粒p EGFP-N3-HCVc转染人肝癌细胞Hep G2,Real-Time PCR和Western blotting检测HCVc、总stat... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)对肝癌细胞信号转导子和转录激活子3(stat3)通路及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将含HCVc基因序列的重组质粒p EGFP-N3-HCVc转染人肝癌细胞Hep G2,Real-Time PCR和Western blotting检测HCVc、总stat3、磷酸化stat3(p-stat3)及EMT指标蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的表达,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果划痕实验及Transwell实验结果显示,过表达HCVc可增强Hep G2细胞的迁移和侵袭能力;stat3通路抑制剂AG490处理可抑制Hep G2细胞的侵袭能力。RT-PCR和Western blotting结果显示,过表达HCVc后,Hep G2细胞中p-stat3、Vimentin及Snail在表达升高,E-cadherin表达下降;AG490处理可下调p-stat3、Vimentin及Snail表达,增强E-cadherin表达。结论 HCVc可活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化,增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。

关键词：病毒核心蛋白质类肝肿瘤肝炎丙型 stat3 上皮间质转化

丙型肝炎病毒1b基因型核心蛋白对HepG2细胞Bax与Bcl-2基因表达的影响

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临床肝胆病杂志 2011年第5期27卷 511-514页

作者：蒋孝华刘玲玲雷创周清平南华大学附属第一医院感染科湖南衡阳421001

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)1b基因型核心蛋白(C)对HepG2细胞B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,以探索1b型HCV C蛋白与HepG2细胞凋亡的关系。方法利用RT-PCR扩增出HCV-1b-C基因,经双酶切后连接pcDNA3.1(-),成功... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)1b基因型核心蛋白(C)对HepG2细胞B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,以探索1b型HCV C蛋白与HepG2细胞凋亡的关系。方法利用RT-PCR扩增出HCV-1b-C基因,经双酶切后连接pcDNA3.1(-),成功构建真核表达载体pcDNA3.1(-)/HCV-1b-C。利用脂质体转染HepG2细胞,RT-PCR及Western Blot检测其mRNA及蛋白的表达,RT-PCR及Western Blot检测转染成功后HCV-1b-C对HepG2细胞Bax与Bcl-2表达的影响,并设转染空质粒组及未处理组作对照。结果成功构建真核表达载体pcDNA3.1(-)/HCV-1b-C;瞬时转染HepG2细胞,成功表达HCV C mRNA及蛋白;转染C基因组的Bax的mRNA及蛋白相对表达量减少,与转染空质粒组及未处理组比较差异均有统计学意义(P蛋白相对表达量增多,与转染空质粒组及未处理组比较差异均有统计学意义(P蛋白转染HepG2细胞会导致Bax表达减少及Bcl-2表达增多,降低Bax/Bcl-2比值,可能是抑制HepG2细胞凋亡的机制之一。

关键词：肝炎病毒属病毒核心蛋白质类肝细胞 bcl-2相关X蛋白质基因,bcl-2 细胞凋亡

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丙型肝炎病毒核心蛋白对细胞凋亡的影响

世界华人消化杂志 2001年第10期9卷 1125-1128页

作者：刘重阳刘为纹陈东风杨建民房殿春第三军医大学大坪医院消化科重庆市400042 第三军医大学西南医院消化科重庆市400038

目的考察丙型肝炎病毒核心蛋白对细胞凋亡的影响,以期从另一个角度研究丙型肝炎病毒可能的致癌机理.方法应用流式细胞仪检测 HepG2-C 细胞和 HepG2-CMV 细胞对氨甲喋呤(MTX 10mg/L)和去血清的耐受.并进一步检测凋亡相关基因及产物的表达... 详细信息

目的考察丙型肝炎病毒核心蛋白对细胞凋亡的影响,以期从另一个角度研究丙型肝炎病毒可能的致癌机理.方法应用流式细胞仪检测 HepG2-C 细胞和 HepG2-CMV 细胞对氨甲喋呤(MTX 10mg/L)和去血清的耐受.并进一步检测凋亡相关基因及产物的表达.结果应用流式细胞仪检测 HepG2-C 细胞和 HepG2-CMV 细胞对氨甲喋呤(MTX 10mg/L)的耐受,结果 HepG2-C 细胞24小时和48小时的凋亡率分别为5.1%和9.6%,而 HepG2-CMV 细胞为6.8%和16%.而去血清2,4,6天的 HepG2-C 细胞凋亡率分别为6.6%,9.4%,11.5%,而 HepG2-CMV 细胞分别为11.4%、13.5%、16.1%.表明表达丙肝病毒核心蛋白的细胞 HepG2-C 较转染空载体的细胞 HepG2-CMV 耐受凋亡.在进一步分子机理的探讨中发现 HepG2-C 细胞 P53,C-myc,Bcl-2表达增加,而 Fas 表达减低,转录水平也发生同样的变化.结论丙肝病毒核心蛋白可能通过调节基因转录与表达,抑制某些因素引起的细胞凋亡.

关键词： C型肝炎样病毒属病毒核心蛋白质类肝肿瘤病因学脱噬作用

不同基因型丙型肝炎病毒Core蛋白HLA-DRB1*0311、0401表位预测

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临床肝胆病杂志 2011年第1期27卷 61-64页

作者：程玲洪国祜郭艳毛青第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆400038

目的预测各型丙型肝炎病毒(HCV)Core区的人类白细胞抗原(HLA)-DRB1*0311及0401抗原表位。方法从NCBI数据库中检索出十条包含六种分型的HCV完整氨基酸序列,使用生物信息学工具剪切Core区氨基酸序列并对其二级结构、可塑性、亲水性和抗原... 详细信息

目的预测各型丙型肝炎病毒(HCV)Core区的人类白细胞抗原(HLA)-DRB1*0311及0401抗原表位。方法从NCBI数据库中检索出十条包含六种分型的HCV完整氨基酸序列,使用生物信息学工具剪切Core区氨基酸序列并对其二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数进行预测,选择可能区域预测HLA-DRB1*0311及0401的抗原表位。结果 HCV Core区二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数预测分析可认为16～28、60～74、98～120区域或为抗原表位区域。HLA-DRB1*0311预测中,HCV-1a/b、4a、6a预测评分高的区域为28～36,HCV-2a/b为63～71,HCV-3a为29～37,HCV-5a为94～102。HLA-DRB1*0401中,HCV-1a、2b、4a、6a预测评分高区域为84～92,HCV～5a为120～128,HCV-1b中120～128可以预测到表位但评分低。结论 HCV Core区HLA-Ⅱ类分子抗原表位具有型间差异。

关键词：肝炎病毒属病毒核心蛋白质类基因型表位

丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达载体构建及在酵母中的表达

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军医进修学院学报 2002年第1期23卷 1-3页

作者：李克王琳成军张玲霞陆荫英李莉解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的 :为探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心 (core)蛋白的功能 ,在真核生物酵母细胞中表达HCV核心蛋白基因。方法 :用多聚酶链反应 (PCR)的方法在HCV全长质粒 pBRTM HCV为膜板扩增HCV核心蛋白基因 ,克隆到pGEM T载体中 ,双酶切后回收连接到酵... 详细信息

目的 :为探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心 (core)蛋白的功能 ,在真核生物酵母细胞中表达HCV核心蛋白基因。方法 :用多聚酶链反应 (PCR)的方法在HCV全长质粒 pBRTM HCV为膜板扩增HCV核心蛋白基因 ,克隆到pGEM T载体中 ,双酶切后回收连接到酵母表达质粒 pGBKT7中表达。提取酵母蛋白质 ,进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western免疫印迹分析。结果 :成功构建HCV核心蛋白基因酵母表达载体 ,Western免疫印迹显示了HCV核心蛋白在酵母细胞中表达。表达产物在胞内存在 ,分子量 2 2 0 0 0ku左右。结论 :HCV核心蛋白在酵母中表达成功。

关键词：丙型肝炎病毒属病毒核心蛋白质类基因表达载体酵母

丙型肝炎病毒核心蛋白上调基质金属蛋白酶组织抑制因子-1的表达

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胃肠病学和肝病学杂志 2013年第8期22卷 789-792页

作者：王巧侠李文凡成军西安市中心医院感染科陕西西安710003 甘肃省人民医院消化科北京地坛医院传染病研究所

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1基因表达的影响,以探讨HCV的致肝纤维化机制。方法聚合酶链反应(PCR)扩增TIMP-1的启动子DNA片段,克隆至真核报告载体pCAT3-basic中,构建pCAT3-TIMP-1p报告载体;... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1基因表达的影响,以探讨HCV的致肝纤维化机制。方法聚合酶链反应(PCR)扩增TIMP-1的启动子DNA片段,克隆至真核报告载体pCAT3-basic中,构建pCAT3-TIMP-1p报告载体;将该质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞,以酶链免疫吸附试验(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;将构建的pCAT3-TIMP-1p与HCV核心蛋白真核表达载体PcDNA3.1(-)-HCVcore共转染入人肝星状细胞系LX-2细胞,同时平行设立pCAT3-basic阴性对照组、pCAT3-control阳性对照组、pCAT3-TIMP-1p单独转染组,用ELISA法检测各组CAT的表达活性。结果成功获得TIMP-1基因启动子DNA片段,构建的pCAT3-TIMP-1p具有转录活性,与PcDNA3.1(-)-HCVcore共转染LX-2细胞后,ELISA法检测结果显示pCAT3-TIMP-1p吸光度值为0.833±0.040,同期单独转染LX-2细胞的pCAT3-TIMP-1p吸光度值为0.677±0.049,方差分析各组差异有统计学意义(F=132.401,P核心蛋白通过上调TIMP-1启动子的活性,促进TIMP-1基因的表达。

关键词：肝炎病毒启动子病毒核心蛋白质类基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 转录

丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定研究

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临床和实验医学杂志 2014年第16期13卷 1329-1331页

作者：张丹翟永贞冯国和中国医科大学附属盛京医院感染科辽宁沈阳110021

目的构建含丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心(core,C)蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体,为C蛋白与宿主蛋白相互作用机制研究奠定基础。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增HCV 1b基因型C蛋白基因,经EcoR I和Pst I双酶切后插入到诱饵载体pG... 详细信息

目的构建含丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心(core,C)蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体,为C蛋白与宿主蛋白相互作用机制研究奠定基础。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增HCV 1b基因型C蛋白基因,经EcoR I和Pst I双酶切后插入到诱饵载体pGBKT7中,构建含HCV C蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-Core,经酶切分析及核酸测序分析加以鉴定。醋酸锂法将pGBKT7-Core转化入酵母菌株Y2HGold,蛋白印迹法检测C蛋白的表达,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母细胞的毒性作用及对报告基因的激活作用。结果重组质粒pGBKT7-Core中的C蛋白基因为576 bp,经核酸测序分析与NCBI中注册的HCV 1b基因型C蛋白基因序列一致;转化酵母菌后检测到C蛋白的表达;HCV C蛋白对酵母菌Y2HGold无毒性,且对报告基因无激活作用。结论含HCV C蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体构建成功,表达稳定。

关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白质类酵母双杂交技术