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连翘水提液体外抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对细胞凋亡的保护作用

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应用与环境生物学报 2023年第2期29卷 364-369页

作者：张凯照许泽锴肖仕鑫郑钰胡会崔红杰吴异健黄小红福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福州350002 中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室(福建农林大学) 福州350002 福建省兽医中药与动物保健重点实验室(福建农林大学) 福州350002

连翘是中药配方的重要组分之一,具有良好的抗病毒活性,但其对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的作用尚未得到深入评估.为评估连翘体外MDRV增殖及对鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞凋亡的保护作用,通过四唑盐(MTT)法检测连翘水提液的安全浓度,并从3种给... 详细信息

连翘是中药配方的重要组分之一,具有良好的抗病毒活性,但其对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的作用尚未得到深入评估.为评估连翘体外MDRV增殖及对鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞凋亡的保护作用,通过四唑盐(MTT)法检测连翘水提液的安全浓度,并从3种给药方式中筛选出连翘水提液的最佳给药方式.在最佳给药方式下,通过半数细胞培养感染剂量(TCID_(50))检测MDRV在DF-1细胞的增殖情况,并采用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因mRNA的表达情况.结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度为0.25-4 mg/mL,最佳给药方式是先感染病毒再加中药,在此给药方式下,连翘水提液能极显著降低MDRV在24-48 h的病毒滴度(P增殖,并对MDRV引起DF-1细胞凋亡起到了缓解作用,具有良好抗病毒的活性,结果为进一步筛选出抗MDRV的候选药物提供了基础数据.

关键词：连翘番鸭呼肠孤病毒病毒增殖细胞凋亡

连翘苷抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对炎症因子表达的抑制作用

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福建农林大学学报（自然科学版） 2023年第3期52卷 337-343页

作者：许泽锴郑钰张凯照胡会沈沛津吴异健黄小红福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福建福州350002 中西兽医结合与动物保健福建省高等学校重点实验室福建福州350002

探讨连翘苷对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)增殖及对炎症相关细胞促炎因子和趋化因子基因表达水平的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测连翘苷对鸡胚成纤维细胞DF-1的安全质量浓度为0~125.00μg·mL^(-1),并筛选出最佳的给药方式为:先感染病毒再给药连... 详细信息

探讨连翘苷对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)增殖及对炎症相关细胞促炎因子和趋化因子基因表达水平的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测连翘苷对鸡胚成纤维细胞DF-1的安全质量浓度为0~125.00μg·mL^(-1),并筛选出最佳的给药方式为:先感染病毒再给药连翘苷.采用半数组织培养感染剂量(TCID50)检测MDRV在DF-1细胞中的增殖情况,结果表明,给药24~48 h时,连翘苷能使MDRV滴度极显著下降(P增殖,并降低细胞炎症因子基因的表达水平,具有良好的抗病毒和抗炎的双活性.

关键词：连翘苷番鸭呼肠孤病毒病毒增殖炎症因子

美国白蛾核型多角体病毒增殖和保存的影响因素

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应用昆虫学报 2023年第1期60卷 58-68页

作者：胡天义孙丽昕郭同斌王新周晓宇赵正萍耿薏舒郝德君南京林业大学南方现代协同创新中心南京210037 徐州市林业技术推广服务中心徐州221009 湖南省林业科学院长沙410004

【目的】明确美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nudeopolyhedroviurs,HcNPV)的最佳增殖方法和最适保存条件,为HcNPV标准化生产提供理论依据和技术支撑。【方法】利用活体增殖法,探究不同饲毒虫龄-病毒浓度组合、持续饲毒时间、... 详细信息

【目的】明确美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nudeopolyhedroviurs,HcNPV)的最佳增殖方法和最适保存条件,为HcNPV标准化生产提供理论依据和技术支撑。【方法】利用活体增殖法,探究不同饲毒虫龄-病毒浓度组合、持续饲毒时间、幼虫饲毒温度和密度对HcNPV增殖量的影响,筛选最佳的HcNPV活体增殖方法;并利用生物活性测定法,研究不同病毒保存处理方式、保存时间、保存温度和保存剂对HcNPV活性的影响,明确最佳的保存条件。采用喂食法处理美国白蛾幼虫,利用血球计数板统计HcNPV增殖数量,以半数致死时间(LT_(50))为指标评价病毒的杀虫活性。【结果】当饲毒浓度为1×10^(6)OB·mL^(﹣1)、虫龄为5龄时病毒的增殖量为1.16×10^(10)OB/头,显著高于其他供试浓度和龄期;以3龄幼虫作为供试虫龄,饲毒浓度为1×10^(6)OB·mL^(﹣1)时,研究发现最佳饲毒温度为20℃,病毒增殖量达5.06×10^(9)OB/头;随着持续饲毒时间的延长,病毒增殖量显著降低,从3.42×10^(9)OB/头降低至0.97×10^(9)OB/头;幼虫饲毒密度为100头/箱(0.05头/cm^(2))时,病毒增殖量显著高于200-500头/箱,增殖量为4.94×10^(9)OB/头。不同保存方法对HcNPV杀虫活性具有不同程度的影响。以病毒虫浆法和虫尸干燥粉碎法保存的病毒感染美国白蛾3龄幼虫的LT_(50)显著低于病毒液法和病毒干粉法;当保存时间不超过12个月时,病毒杀虫活性无显著变化;保存温度范围为﹣20-25℃时,病毒的杀虫活性未出现显著变化;筛选出最佳的保存剂为蔗糖(50%)和氯化钠(5%),LT_(50)分别为4.94 d和4.97 d。【结论】在幼虫密度为0.05头/cm^(2)的养虫箱中,使用浓度为1×10^(6)OB·mL^(﹣1)的HcNPV饲喂美国白蛾5龄幼虫一次,20℃下可获得最高产量的病毒;感病幼虫虫尸研磨成匀浆,添加蔗糖(50%)或氯化钠(5%)作为辅助剂,置于﹣20℃的冰箱内保存,可在12个月内保证HcNPV的最佳活性。

关键词：美国白蛾核型多角体病毒病毒增殖保存杀虫剂

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猪圆环病毒体外高效增殖研究进展

中国兽医学报 2023年第4期43卷 812-817页

作者：雷白时薛拥志李秀丽包银莉张武超赵款袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省人畜共患病原微生物分析与防控重点实验室河北保定071001 河北北方学院动物科技学院河北张家口075131 龙岩学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建龙岩364012

猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus diseases,PCVDs)主要通过疫苗产品进行预防,病毒增殖水平与疫苗研发密切相关,随着新发病原PCV3和PCV4的出现和广泛流行,对于实现此类病毒体外高效增殖,已经成为开展相应病毒病原学、发病机制及... 详细信息

猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus diseases,PCVDs)主要通过疫苗产品进行预防,病毒增殖水平与疫苗研发密切相关,随着新发病原PCV3和PCV4的出现和广泛流行,对于实现此类病毒体外高效增殖,已经成为开展相应病毒病原学、发病机制及其疫苗研究方面的瓶颈。鉴于4种猪圆环病毒(PCV)在基因组结构、复制机制等方面的相似性,现对其中已实现体外培养的PCV2,在促进其病毒增殖方面的方法和研究进展进行总结和概括,以期进一步提升现有PCV2增殖水平,并对实现PCV3或PCV4的体外培养提供助力,从而促进PCV疫苗的研发和相关病原学与发病机制的深入研究。

关键词：猪圆环病毒体外培养病毒增殖研究进展

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适应非洲猪瘟病毒增殖的传代细胞系研究进展

病毒学报 2023年第4期39卷 1107-1117页

作者：路皓东左媛媛戈胜强韩乃君王振忠张永强吴晓东蔡玉梅王志亮山东农业大学泰安271001 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室青岛266032 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 青岛266032 南京农业大学南京210095

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)疫苗研发以及深入研究的一个很大障碍在于缺少可稳定有效增殖ASFV的传代细胞系。尽管如此,目前可增殖ASFV的传代细胞系研究取得了一定的进展,本文对应用于ASFV增殖的传代细胞系的种类、优... 详细信息

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)疫苗研发以及深入研究的一个很大障碍在于缺少可稳定有效增殖ASFV的传代细胞系。尽管如此,目前可增殖ASFV的传代细胞系研究取得了一定的进展,本文对应用于ASFV增殖的传代细胞系的种类、优缺点以及在疫苗研发的应用现状进行简要综述,以期为可增殖ASFV的传代细胞系研究及ASFV疫苗研制提供参考。

关键词：非洲猪瘟病毒传代细胞系病毒增殖

长链非编码RNA(lncRNA)-MSTRG.22610.1对BHV-1体外复制影响的研究

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中国预防兽医学报 2024年第3期46卷 278-284,299页

作者：姜坤生王禹淳马金柱于立权宋佰芬黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业大学动物医学院北京100193

本研究室前期将牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)感染牛肾细胞(MDBK),通过转录组测序筛选到了转录显著差异的长链非编码RNA-MSTRG.22610.1(lncRNA-MSTRG.22610.1),为了探究其在MDBK中对BHV-1复制的影响,本研究采用CCK-8法筛选对细胞无毒性的聚凝... 详细信息

本研究室前期将牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)感染牛肾细胞(MDBK),通过转录组测序筛选到了转录显著差异的长链非编码RNA-MSTRG.22610.1(lncRNA-MSTRG.22610.1),为了探究其在MDBK中对BHV-1复制的影响,本研究采用CCK-8法筛选对细胞无毒性的聚凝胺、嘌呤霉素的最佳浓度;将重组慢病毒r ZHLV-U6-Zs Green1-puro-MSTRG.22610.1和r ZHLV-U6-Zs Green1-puro(对照慢病毒)按照不同的MOI分别感染MDBK细胞,48 h后观察荧光,采用Image J软件检测并计算各慢病毒感染细胞后出现绿色荧光细胞的比率,出现绿色荧光细胞的比率达80%的细胞对应的MOI即为最佳MOI。筛选结果显示聚凝胺与嘌呤霉素的最佳工作浓度分别为5μg/mL及3μg/m L,慢病毒感染的最适MOI为80。将r ZHLV-U6-Zs Green1-puro-MSTRG.22610.1和对照慢病毒分别以最佳条件感染MDBK细胞并培养及传代,传至8~10代,每代均观察细胞形态及细胞中的绿色荧光,并通过RT-q PCR检测第6、8、10代细胞中lncRNA-MSTRG.22610.1的转录水平,以构建并鉴定稳定表达lncRNA-MSTRG.22610.1的MDBK细胞系1T及对照细胞系1NC。结果显示,每代1T细胞、1NC细胞的状态均良好并均与阴性对照MDBK细胞的形态无差别,且每代1T及1NC细胞均出现绿色荧光。RT-q PCR结果显示,与1NC及阴性对照细胞相比,1T细胞系中lncRNA-MSTRG.22610.1的转录水平极显著升高(P增殖的细胞系,且该细胞系的遗传稳定性较强。将BHV-110倍倍比稀释后分别感染传至10代的1T与1NC细胞,24 h后采用Reed-Muench法计算各组细胞中的病毒滴度。结果显示,1T、1NC及MB细胞(感染BHV-1的MDBK细胞)的病毒滴度分别为105.15 TCID50/0.1 m L、104.41TCID50/0.1 m L及104.58 TCID50/0.1 m L。与MB和1NC细胞相比,1T细胞中的病毒滴度显著升高(P病毒复制的分子机制及深入了解BHV-1感染的分子机制提供参考依据。

关键词：长链非编码RNA 牛肾细胞牛疱疹病毒I型慢病毒过表达病毒增殖

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甲型流感病毒NP及相关宿主因子研究进展

中国病原生物学杂志 2024年第3期19卷 360-366页

作者：高三利孙欣王盛羽宋鸿遵义医科大学微生物学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学贵州省普通高等学校传染病与生物安全特色重点实验室

甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)严重威胁人类健康。病毒核心是核糖核蛋白复合物(viral ribonucleoprotein complexes,vRNPs),是病毒基因组转录和复制的最小功能单位。核蛋白(nucleoprotein,NP)是vRNP的重要组成部分之一,在流感病... 详细信息

甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)严重威胁人类健康。病毒核心是核糖核蛋白复合物(viral ribonucleoprotein complexes,vRNPs),是病毒基因组转录和复制的最小功能单位。核蛋白(nucleoprotein,NP)是vRNP的重要组成部分之一,在流感病毒整个生命周期起着关键作用。机体存在多种宿主因子通过NP影响病毒增殖。本文就通过NP影响vRNP核输入、病毒基因组转录和复制、vRNP核输出以及vRNP组装这几个方面的宿主因子进行综述,以期为治疗IAV新靶点的发现及新药物的研发提供参考。

关键词：甲型流感病毒核蛋白NP 宿主因子病毒增殖相互作用综述

斑马鱼maoc1通过促进自噬溶酶体降解病毒磷蛋白抑制SVCV增殖

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斑马鱼maoc1通过促进自噬溶酶体降解病毒磷蛋白抑制SVCV增殖

作者：宋亚楠大连海洋大学

学位级别：硕士

在水产养殖的过程中,鱼类病毒病一直是制约养殖鱼类产量提高的重要因素,其具有病程短、爆发集中、致死率高等特点。其中,病原体为鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)的鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)是一... 详细信息

在水产养殖的过程中,鱼类病毒病一直是制约养殖鱼类产量提高的重要因素,其具有病程短、爆发集中、致死率高等特点。其中,病原体为鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)的鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)是一种导致养殖鲤科鱼类大量死亡的病毒病。研究SVCV感染宿主的机制,与宿主蛋白互作实现免疫逃逸的方式及宿主抵御SVCV的策略对了解SVCV致病机理与指导病害防治都具有重要意义。鱼类虽然同时拥有抵御病原体感染的先天性免疫和获得性免疫系统,但感染SVCV后宿主如何直接抵抗病毒增殖却鲜有报道,其分子机制也尚不清楚。在本研究中,我们鉴定了一个能够被SVCV感染显著诱导,名为maoc1的新基因。首先,利用CRISPR/Cas9技术成功构建了maoc1缺失的斑马鱼品系;研究发现,与野生型斑马鱼相比maoc1基因缺陷的斑马鱼更容易感染SVCV且存活率显著降低,与此同时其体内病毒复制数和抗病毒基因诱导水平显著提高;进一步研究表明,maoc1与SVCV的磷蛋白相互作用,并通过自噬-溶酶体途径降解磷蛋白,从而限制SVCV的增殖。这些发现揭示了斑马鱼对SVCV感染的独特防御机制。SVCV磷蛋白在病毒复制和病毒实现免疫逃逸过程中起着重要作用。本研究发现maoc1通过直接结合并促使磷蛋白经自噬-溶酶体途径降解从而抑制SVCV复制;证明maoc1是一个被SVCV诱导且具有抗病毒的能力的新基因。因此,本研究不仅揭示了maoc1在对抗SVCV感染中的重要作用,还展示了一种独特的宿主应对病毒入侵的防御机制。

关键词： SVCV 病毒增殖 maoc1 磷蛋白自噬

规模化生产中实际感染复数对轮状病毒增殖的影响

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国际生物制品学杂志 2023年第2期46卷 86-89页

作者：石晨姜志军杨欣哲阮波刘生笙刘玉晴左豪杰唐义谭臻白萱乔建王英徐葛林杨晓明武汉生物制品研究所有限责任公司轮状病毒疫苗室国家联合疫苗工程技术研究中心武汉430207 中国生物技术股份有限公司北京100029

目的探索轮状病毒疫苗规模化生产中实际感染复数(multiplicity of infection,MOI)对病毒增殖的影响。方法用荧光灶试验方法检测接种Vero细胞的轮状病毒接种液的病毒滴度,实际MOI即为接种液病毒数量除以细胞数量。通过致细胞病变的天数... 详细信息

目的探索轮状病毒疫苗规模化生产中实际感染复数(multiplicity of infection,MOI)对病毒增殖的影响。方法用荧光灶试验方法检测接种Vero细胞的轮状病毒接种液的病毒滴度,实际MOI即为接种液病毒数量除以细胞数量。通过致细胞病变的天数及单次病毒收获液的滴度反映规模化生产中实际MOI对轮状病毒增殖的影响。结果规模化生产中,MOI在0.002~0.074范围内影响轮状病毒致细胞病变的进程,与轮状病毒增殖量呈弱相关性,单次病毒收获液滴度均在7.0 lg荧光灶形成单位(fluorescent focus unit,FFU)/ml以上,符合质量标准(不低于6.5 lgFFU/ml)。结论轮状病毒疫苗规模化生产中,实际MOI与轮状病毒增殖量呈弱相关性。

关键词：轮状病毒疫苗 Vero细胞感染复数病毒增殖规模化生产