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中国动物检疫 2008年第9期25卷 37-39页

作者：季新成王振宝王文陈新民刘晓晖王陆宝新疆出入境检验检疫局乌鲁木齐830063 新疆农业大学乌鲁木齐830006 新疆动物防疫监督总站乌鲁木齐830001 江苏畜牧兽医职业技术学院泰州225300

采用SYNBIOTICS公司酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒对来自新疆15个不同地区(包括4个养牛场)共635份牛血清进行了牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测,共检出阳性血清329份,最高感染率达90%,最低感染率为5%,平均感染率为51.8%,结果显... 详细信息

采用SYNBIOTICS公司酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒对来自新疆15个不同地区(包括4个养牛场)共635份牛血清进行了牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测,共检出阳性血清329份,最高感染率达90%,最低感染率为5%,平均感染率为51.8%,结果显示该病已在全疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律。对其中的106份血清用Institute Pourquier公司ELISA试剂盒重新检测,发现两试剂盒的符合率为90.6%,Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒敏感性稍高。从该106份血清中再次随机抽取其中的35份用病毒中和实验(VN)检测方法进行了检测,检测结果与SYNBIOTICS公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品7份,两者符合率88.6%;与Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品6份,两者符合率85.7%。试验结果表明,与VN相比,ELISA检测试剂盒具有操作简便,敏感性高等优点。

关键词：牛传染性鼻气管炎血清抗体 ELISA 病毒中和实验流行病学

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棉铃虫核多角体病毒包埋型病毒粒子体外感染Hz-AM1细胞的研究

棉铃虫核多角体病毒包埋型病毒粒子体外感染Hz-AM1细胞的研究

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作者：姜婷中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）

学位级别：硕士

杆状病毒区别于其它病毒的一个重要的特点是在其生活史中具有两种不同的病毒形态:出芽型病毒粒子(budded virus, BV)和包埋型病毒粒子(occlusion derived virus, ODV)。这两种病毒粒子具有相同的核衣壳,但囊膜组成不同,这种差异赋予了BV... 详细信息

杆状病毒区别于其它病毒的一个重要的特点是在其生活史中具有两种不同的病毒形态:出芽型病毒粒子(budded virus, BV)和包埋型病毒粒子(occlusion derived virus, ODV)。这两种病毒粒子具有相同的核衣壳,但囊膜组成不同,这种差异赋予了BV和ODV具有不同的感染机制,发挥不同的功能。BV是进行组织和细胞之间感染的病毒形式,膜融合蛋白在感染过程中发挥重要作用;而ODV主要参与口服感染,目前为止,已经鉴定了四种与口服感染相关的基因( pif )。本文以棉铃虫核多角体病毒( Helicoverpa armigera single nucleopolyhedrovirus, HaSNPV)为研究对象,研究发现ODV同样能感染体外培养的昆虫细胞,并且感染效率受pH的影响;中和试验发现病毒pif基因(p74, pif-1, pif-2和pif-3)决定了HaSNPV ODV感染体外培养细胞的能力。另外,构建了重组棉铃虫核多角体病毒(vHa/lacZ),通过报告基因hsp70/lacZ可以在感染棉铃虫幼虫后经过解剖染色观察到病毒感染的进程,可用于进一步研究棉铃虫核多角体病毒的发病机理。论文第一章综述了杆状病毒的基本结构特点、感染周期、感染途径、感染后的病理变化以及主要结构基因与功能,其中着重介绍了杆状病毒口服感染的相关基因。另外,还介绍了杆状病毒作为真核表达系统的应用,以及在生物防治与基因治疗等方面的应用。第二章介绍了HaSNPV的包埋型病毒粒子感染体外培养的Hz-AM1细胞的研究,阐明了ODV可以感染体外培养的昆虫细胞,并且感染效率受pH值的影响,最高的感染效率在pH 8.0左右,当pH>8.0时感染效率逐渐降低。随后克隆并表达了p74和Ha111基因片段,制备了抗体,中和实验表明,HaSNPV p74, pif-1, pif-2和pif-3特异性的抗体单独均能中和HaSNPV ODV感染HzAM1细胞的能力,但仅在使用四种抗体时才表现协同作用,该结果说明口服感染相关基因(pif)同样参与了ODV感染体外培养的细胞。论文第三章介绍了重组杆状病毒vHa/lacZ的构建,并通过解剖染病幼虫初步研究了棉铃虫核多角体病毒的发病进程。

关键词：棉铃虫核多角体病毒包埋型病毒粒子口服感染相关基因(pif) 病毒中和实验重组杆状病毒vHa/lacZ

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抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体制备及鉴定

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体制备及鉴定

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作者：何建辉中国农业科学院

学位级别：硕士

本研究应用细胞融合方法,以基因重组表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒的主要结构蛋白GP5免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。经多次细胞克隆及间接ELISA筛选,获得两株能稳定分泌抗PRRSV及一株抗重组谷胱甘肽... 详细信息

本研究应用细胞融合方法,以基因重组表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒的主要结构蛋白GP5免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。经多次细胞克隆及间接ELISA筛选,获得两株能稳定分泌抗PRRSV及一株抗重组谷胱甘肽转移酶(GST)抗体的杂交瘤细胞株,并对其特性作了鉴定。经单克隆抗体亚类分型鉴定,三株单克隆抗体依次为IgG1、IgG2a和IgG2a。所筛选的杂交瘤细胞株的染色体计数均在杂交瘤细胞染色体范围之内。采用ELISA方法对腹水和细胞上清液中单抗效价进行了测定,三株单抗的小鼠腹水中单抗效价≧1:105,杂交瘤细胞上清中效价≧1:104。用叠加实验结果表明所筛选的两株单抗的叠加率为86.2%,由此证明他们针对两个不同的表位。SDS-PAGE电泳结果显示,所筛选的单抗重链分子量为45kD左右,轻链分子量为25kD左右。特异性实验证明3株单抗均有很好的特异性,均不与猪瘟和猪圆环病发生交叉反应。病毒中和试验结果表明所纯化的两株单抗,只有4B4有中和PRRSV的能力,效价达1:256,当该抗体稀释到1:512时其中和能力为可疑,1:1024时无中和能力。而8C9基本上没有中和活性,在接毒36 h后均出现明显的CPE,其最低稀释倍数(1:2)时出现CPE的程度与病毒对照没有差别。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白杂交瘤技术单克隆抗体病毒中和实验

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美国禽肺病毒研究

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中国家禽 2001年第10期23卷 51-51页

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