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卵巢透明细胞癌模型的建立

卵巢透明细胞癌模型的建立

作者：孙玉洁滨州医学院

学位级别：硕士

研究背景卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)是上皮性卵巢癌(EOS)的一个特殊亚型,在上皮性卵巢癌中的发病率为EOC的4%～25%[1],其发病可能与种族有关,在日本人群中高达25%[2,3],其恶性程度高,且易早期复发,对一线铂类... 详细信息

研究背景卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)是上皮性卵巢癌(EOS)的一个特殊亚型,在上皮性卵巢癌中的发病率为EOC的4%～25%[1],其发病可能与种族有关,在日本人群中高达25%[2,3],其恶性程度高,且易早期复发,对一线铂类化疗药物具天然耐药性的特点,是EOC当中是预后最差的一个亚型,尽管OCCC的治疗方法经过几十年的努力,并且取得了令人欣慰的进展,但该病的5年生存率仍然较低,约为20%[4]。卵巢透明细胞癌具有不同于其他上皮性卵巢癌的独特特点,但是目前对于OCCC的诊断、治疗等方面缺少可靠的特异性的方法,进行的基础研究大多是基于体外单层细胞培养条件下,并且缺乏体内相关的研究。这就需要合适的动物模型来填补体内研究空缺的现状,同时也需要一种更便捷稳定的OCCC模型,加快对OCCC的基础研究,为临床诊疗提供更广阔思路。良好的动物模型可以为临床早期诊断及干预措施提供较好的理论基础[2]。癌症模型研究主要有动物模型和体外模型,动物模型主要的实验对象是裸鼠、小鼠、大鼠,裸鼠和小鼠存在免疫缺陷,容易建立癌症模型,但不能很好的模拟体内癌细胞生长相关的免疫反应等相关微环境,而且成本较高,大鼠多采用腹腔移植模型,主要研究肿瘤化疗治疗研究,不能较好的反应肿瘤的发生发展,大鼠原位移植方法有埋线法和组织块移植,埋线法采用二甲苯蒽为诱导剂,但成瘤时间长,约5-8个月,而且卵巢癌类型与成活率不确定,组织块可确保模型类型,但要经过移植、成瘤、移植包埋的复杂过程[34]。体外模型研究为二维(2D)培养以及三维(3D)培养两种模式,而基于3D模式下的分子水平的研究更少。有研究表明,3D模式下培养细胞,形成的结构能够更近似模拟体内复杂的疾病微环境,且细胞的生长方式也更接近体内生长[43,44]。目前利用正常免疫的大鼠建立卵巢癌模型较少,利用细胞悬液原位注射法也较少,而且对OCCC的体内研究存在空白。ARID1A是一个抑癌基因,定位于细胞核,在全身很多组织中大量表达,如胰腺、脾脏、小肠、前列腺、直肠、卵巢等[45]。ARID1A突变在妇科肿瘤当中最为常见,尤OCCC中比例最高[46]。在OCCC中,该基因表达缺失,而且在不同的期别中,ARID1A突变的频率也是不同的,与OCCC的化学耐药性也有关[14]。目的探究利用Wistar大鼠建立人卵巢透明细胞癌原位移植瘤模型的可行性,利用正常免疫大鼠采用细胞悬液原位移植法探究建立OCCC动物模型的可行性,使OCCC动物模型的建立可行化且方法简便,为OCCC的体内研究提供基础,填补体内研究的空缺。为探寻人卵巢透明细胞癌的早期诊断检测方法、有效的靶向治疗及预测预后提供更广阔的平台。方法根据本实验研究目的,主要的研究内容和方法总共分成了三大部分,概述如下:***2细胞的二维培养和三维培养对ES2细胞进行二维培养(即普通单层细胞培养),通过对ES2细胞进行传代培养、计数,对ES2细胞的生长曲线图进行绘制,为OCCC动物模型建立的时机提供基础。实验过程中,以鼠尾胶原作为培养的支架材料,尝试建立ES2细胞的三维培养,即使ES2细胞呈立体结构生长模式,探究ES2细胞作为OCCC体外模型的可能性。2.利用Wistar雌性大鼠建立OCCC模型将购买的24只实验雌性Wistar大鼠适应性饲养7天,随机平均分成3大组,每一组有8只大鼠。将处于对数生长期的ES2细胞制备成不同浓度的细胞悬液,按照1×108(E1组)、5×107(E2组)、1X107(E3组)个细胞/只的剂量,用微量注射器将细胞悬液原位注射,分别接种至每组雌性Wistar大鼠的左侧卵巢包膜下。从模型建立手术后第14天起,每7天从每组中随机选择1只大鼠进行卵巢样本取材,对样本进行病理学检查来鉴定模型。3.卵巢透明细胞癌模型的鉴定将取下的Wistar大鼠卵巢组织进行固定、包埋、切片,行HE染色及ARID1A免疫组化染色。结果***2细胞在二维模式培养下,贴壁生长,呈不规则梭型,而在三维模式下生长成大小不等的小细胞团,最终形成较大的细胞团块,这个团块可维持2周左右。2.相同浓度的ES2细胞接种于Wistar大鼠卵巢包膜下,E1组7周左右成模,E2组7周左右成模,E3组8周左右成模。3.卵巢样本经HE染色,与人OCCC组织病理学形态比较,有较高的相似度。4.在成模卵巢中的ARID1A免疫组化染色表现为ARID1A表达缺失,与人OCCC组织中的表达有较高的一致性。结论1.经过鉴定成模的卵巢组织与人OCCC的病理学以及分子生物学特点有相似性,本实验研究的OCCC模型建立方法具有可行性,具有操作简便、价格低廉、稳定、成活率高、成模率可观等优点,若提高接种细胞数并采用荧光传染或影像学技术辅助,可动态观察卵巢组织变化情况,成活率和成模率可能

关键词：卵巢透明细胞癌 OCCC/OCCA ES2细胞疾病模型/动物异种移植原位移植大鼠

磁共振成像对血管内皮生长因子基因治疗犬脑梗塞有效性评价的实验研究

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磁共振成像对血管内皮生长因子基因治疗犬脑梗塞有效性评价的实验...

作者：武柏林河北医科大学

学位级别：硕士

第一部分：一种不开颅的微创家犬局灶性脑梗塞动物模型。研究目的：建立一种适合医学影像学相关研究的家大局灶性脑梗塞疾病模型。方法：10只健康成年家犬，分为手术组7只和假手术对照组3只。右侧股动脉穿刺插管，在DSA透视下将导管... 详细信息

第一部分：一种不开颅的微创家犬局灶性脑梗塞动物模型。研究目的：建立一种适合医学影像学相关研究的家大局灶性脑梗塞疾病模型。方法：10只健康成年家犬，分为手术组7只和假手术对照组3只。右侧股动脉穿刺插管，在DSA透视下将导管尖端经腹主动脉、主动脉弓选择到一侧颈内动脉，注入直径约800μm的与造影剂充分混合的聚氯乙烯酒精(PVA)颗粒栓子3～5枚。假手术对照组除不注入栓子外，其他操作步骤与手术组完全相同。分别从DSA造影、MR弥散加权成像(DWI)和灌注加权成像(PWI)、神经功能评分、形态学检查等方面评价模型效果。结果：次日动物苏醒后表现出从轻度半身不遂到死亡不同程度的神经功能缺陷(2只动物于当日夜死亡)。4只手术组动物出现同侧大脑中动脉区的DWI高信号和PWI的灌注下降，DSA造影出现相应部位的血管走行中断。光镜观察可见病变组织水肿，神经元固缩、核溶解等缺血表现。另3只动物于同侧半球大脑前动脉、大脑后动脉合并或单独出现缺血表现。假手术组动物形态学、MR、DSA检查及神经功能评分均未见异常改变。结论：该方法建立的家犬局灶性脑梗塞疾病模型创中文摘要伤小、操作简单、动物存活率高，适于影像学及其他亚急性慢性为主的实验研究。第H部分：MRI对VEGF基因治疗脑梗塞效果的评价．研究目的：血管内皮细胞生长因子（VEGF）被认为可以通过强大的促毛细血管新生作用促使梗塞后侧枝循环重建，对脑梗塞临床治疗具很大潜力。为促使VEGF临床应用研究的进展，拟用无创性的可多次重复进行的Kl：L检查结合MR新技术弥散加权成像p 讨灌注加权成像oWI）追踪观察VEGF质粒对局灶性脑梗塞家犬疾病模型的治疗效果，并与形态学检查和免疫组化染色结果相对照。方法：18只健康成年家犬，股动脉插管，选择颈内动脉推往栓子到达大脑中动脉制成脑梗塞动物模型。依处死时间不同（次日、一周和二周）随机分成3 组，每组动物数为 3只、7只门只对照）和 8只门只对照人组内又依处理因素不同分成2个亚组，实验组颅骨打孔给予人pCD。／hVEGF;。;重组质粒600卜g，对照组给予等量生理盐水。手术次日处死的3 只动物全部为生理盐水对照组。手术结束后进行MR扫描，每间隔1小时重复一次直至术后4小时。扫描序列为＊、TZWI、3D一TOFMRA、DWI、PWI。术后24刁时、3天、l 周、2周重复上述序列扫描，并参照Purdy的方法法对动物进行神经功能缺陷评分。动物处死前经心脏灌注固定，以 2 中文摘要 MR图像为依据选择病变部位分别进行HE染色、免疫组化染色、并进行电镜观察。 MR图像经工作站后处理选择两侧半球参数相除得出的TZr、ADCr、relCBV、MTT及以TZWI为依据测得的梗塞体积变化作为Nlt评价指标。方差分析法分析不同时间不同处理组之间的差异。根据CD34免疫组化染色结果计数每高倍视野下的毛细血管数，根据VEGF免疫组化染色结果计数免疫反应阳性细胞数，反应局部VEGF 蛋白的含量，用方差分析法分析组间结果的差异。将免疫组化结果与MRJ表现对照进行相关分析。结果：术后1小时DWI可见到梗塞区明显的高信号，且随时间的延长信号逐渐增高。HE染色显示病变区水肿，神经细胞核固缩，细胞结构不清等缺血表现。电镜观察发现线粒体和尼氏体肿胀，结构模糊，病变区可见大量的脂褐素颗粒。后续MR扫描显示病变区ADCr由超急性期的下降开始呈上升趋势，其中对照组

关键词：磁共振成像弥散加权成像灌注加权成像脑梗塞疾病模型/动物血管内皮生长因子基因治疗犬

中药熏洗促进大鼠失神经支配骨骼肌损伤修复的实验研究

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中药熏洗促进大鼠失神经支配骨骼肌损伤修复的实验研究

作者：刘傲霜湖北中医学院

学位级别：硕士

目的研究熏洗一号方促进失神经支配骨骼肌损伤修复的机理。方法120只雄性SD大鼠,随机取90只大鼠造模成功后,随机分为熏洗一号方组、丹参组和模型组,剩余30只设为空白对照组,不做处理。各组实验动物分别在术后7天、14天和21天处死,股直... 详细信息

目的研究熏洗一号方促进失神经支配骨骼肌损伤修复的机理。方法120只雄性SD大鼠,随机取90只大鼠造模成功后,随机分为熏洗一号方组、丹参组和模型组,剩余30只设为空白对照组,不做处理。各组实验动物分别在术后7天、14天和21天处死,股直肌肌腹组织块取材,常规HE染色,分别观察失神经支配后骨骼肌结构,乙酰胆碱酯酶活性,NGF、bFGF免疫组织化学染色和骨骼肌匀浆液Na-K-ATP酶改变。结果***染色结果:术后7天:失神经早期骨骼肌中绝大多数肌丝肌节排列尚规则,可见到着色变浅。熏洗一号方组,肌纤维未见明显改变,部分肌纤维充血或坏死,但形态完整,有血管内皮充血。丹参组肌纤维水肿,肌纤维排列紊乱。术后14天:熏洗一号方组,肌纤维周围无明显增生的胶原纤维。丹参组肌纤维坏死或变性。模型组肌纤维增生显著,深入肌梭,代替肌肉组织,肌纤维排列紊乱。术后21天:熏洗一号方组,肌纤维排列尚整齐,极少有胶原纤维组织长入肌组织。丹参组肌细胞皱缩,纤维组织增生明显。模型组肌丝排列明显紊乱,大量纤维组织增生。2.乙酰胆碱酯酶活性:术后7天:各组乙酰胆碱酯酶活性较弱,丹参组和模型组与空白对照组相比(P＜0.05),熏洗一号方组与空白组相比(P＞0.05)。术后14天:熏洗一号方组乙酰胆碱酯酶活性增强,但与空白组相比(P＞0.05),丹参组分别与模型组和空白对照组相比(P＜0.01)。术后21天:熏洗一号方组乙酰胆碱酯酶活性强,接近于正常,染色均匀,运动终板结构规则,呈椭圆形或卵圆形花纹状结构,与空白组相比(P＞0.05);模型组和丹参组乙酰胆碱酯酶活性弱,与空白对照组相比(P＜0.01)。3.免疫组织化学染色观察:(1)NGF表达:术后7天:熏洗一号方组,肌梭梭内纤维肌细胞染色阳性,成纤维细胞、血管内皮细胞染色较弱。丹参组肌梭肌细胞染色弱阳性。模型组肌梭变小,未见明显染色。术后14天:熏洗一号方组,增生的胶原纤维染色阳性,血管内皮细胞染色阳性,肌梭未见明显染色。丹参组丹参组成纤维细胞染色阳性。模型组肌梭萎缩,肌细胞染色阴性。术后21天:熏洗一号方组,增生的胶原纤维组织染色弱阳性。丹参组纤维组织未见染色。(2)bFGF表达:术后7天:熏洗一号方组肌细胞和成纤维细胞染色阳性。丹参组成纤维细胞染色阳性。模型组成纤维细胞染色阳性。术后14天:熏洗一号方组骨骼肌基底膜染色强阳性,成纤维细胞染色阳性,肌梭内有少量肌细胞染色阳性。丹参组核肌梭内成纤维细胞染色阳性。模型组肌梭内细胞染色很浅。术后21天:熏洗一号方组肌梭肌细胞染色阳性,神经末梢处成纤维细胞染色强阳性。丹参组血管内皮细胞有散在阳性细胞。模型组未见染色,肌纤维边缘不规则相对大于正常。4.骨骼肌匀浆液Na-K-ATP结果:术后7天各组Na-K-ATP酶组间比较没有统计学意义(P＞0.05)。术后14天熏洗一号方组与空白对照组对比(P＜0.05)。术后21天,熏洗一号方组与空白对照组对比(P＜0.01),且熏洗一号方组Na-K-ATP酶含量最高。结论1.失神经支配骨骼肌损伤的修复与NGF和bFGF的变化有关,骨骼肌失去神经营养因子(NGF)的营养发生萎缩。bFGF能促进运动神经纤维的再生,对神经肌肉接头的形成具有重要作用,能促进神经损伤后肌肉功能的恢复。2.熏洗一号方能延缓神经肌肉运动终板(Motor endplate,MEP)与效应器的变性。3.熏洗一号方能改善失神经支配骨骼肌的营养供应、延缓骨骼肌的萎缩。

关键词：中药熏洗失神经支配/骨骼肌疾病模型/动物 AchE

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肝脂消煎剂治疗脂肪肝的实验研究

肝脂消煎剂治疗脂肪肝的实验研究

作者：董志刚辽宁中医学院

学位级别：硕士

目的：观察中药肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠的治疗作用，探讨其可能的作用机制，为中医中药治疗脂肪肝的研究提供一定的理论依据，为研制和开发治疗脂肪肝的药物奠定基础。方法：用高脂饮食和白酒灌胃，复制大鼠脂肪肝模型... 详细信息

目的：观察中药肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠的治疗作用，探讨其可能的作用机制，为中医中药治疗脂肪肝的研究提供一定的理论依据，为研制和开发治疗脂肪肝的药物奠定基础。方法：用高脂饮食和白酒灌胃，复制大鼠脂肪肝模型，并与西药东宝肝泰进行对比，分别观察并检测各组大鼠：(1)对血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)的影响;(2)对血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性的影响;(3)对肝组织中TG、TC含量的影响;(4)对肝微粒体后上清超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)的影响;(5)对血浆环磷酸腺苷(cAMP)的影响(6)肝组织病理学改变。结果：模型对照组以上各项检测值与正常对照组比较均有明显差异，表明脂肪肝状态下，除血清、肝组织中TG、TC明显升高之外，还存在着不同程度的肝细胞损伤或破坏。肝脂消煎剂能明显降低血清及肝组织中TG、TC，降低血清ALT、AST活性;提高肝细胞微粒体后上清SOD，降低LPO含量;提高血浆cAMP含量，并能使之恢复致正常对照组水平。同时肝脏病理学观察结果显示，肝脂消组结构完整，细胞水样变性消失，胞质内圆形脂滴明显减少。其作用均明显优于西药东宝肝泰组。结论：肝脂消煎剂治疗脂肪肝的作用机制为： 1、调整脂质代谢作用。 2、减轻肝细胞脂肪变性。 3、对肝细胞质膜、线粒体膜有保护、修复作用，有效治疗脂肪性肝炎。 4、抗脂质过氧化作用，提高SOD活性、降低LPO含量。

关键词：肝脂消煎剂脂肪肝疾病模型/动物脂质过氧化

抗原致敏大鼠离体肺片VCAM-1表达及药物调节作用

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抗原致敏大鼠离体肺片VCAM-1表达及药物调节作用

作者：杨晓红浙江大学

学位级别：硕士

背景：支气管哮喘是由嗜酸细胞，肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症，嗜酸细胞浸润和气道高反应性为主要特征。其中嗜酸细胞浸润和激活在哮喘发病机制中起重要作用。当哮喘患者被抗原激发后8-48小时后，嗜酸细胞就... 详细信息

背景：支气管哮喘是由嗜酸细胞，肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症，嗜酸细胞浸润和气道高反应性为主要特征。其中嗜酸细胞浸润和激活在哮喘发病机制中起重要作用。当哮喘患者被抗原激发后8-48小时后，嗜酸细胞就聚集浸润在肺局部。通过释放多种毒性蛋白，如主要碱基蛋白(MBP)和嗜酸细胞阳离子(ECP)，参与引起支气管哮喘的病理改变如气道高反应性、血浆蛋白渗出、腺体分泌亢进和上皮细胞破坏。支气管哮喘的严重程度和在肺部聚集浸润的嗜酸细胞的数目呈正相关，抑制嗜酸细胞在肺部的聚集能够减轻支气管哮喘患者的症状，抑制病情发展。已知有多种机制参与了哮喘气道炎症嗜酸性粒细胞的趋化、浸润、激活及释放炎症介等。近几年来很多实验研究发现细胞粘附分子特别其中的VCAM-1／VLA-4系统与过敏性炎症的炎症细胞特别嗜酸细胞的粘附、跨内皮移动、浸润有密切关切。一般认为肺部VCAM-1的表达上调是由多种因素调控的，在抗原激发后的比较短的时间内表达上调，参与白细胞和内皮细胞的牢固粘附。甚至有部分实验报道正常情况时内皮细胞只表达少量的ICAM-1，而没有VCAM-1的表达。但是我们在整体人鼠哮喘模型中，发现VCAM-1在正常的人鼠肺部就有一定的表达，在抗原致敏后表达即增加，抗原攻击不能进一步增加其表达。因此对哮喘时VCAM-1的表达机制值得耶江大学颐土学位论文进一步的探讨和研究．日的：在离体肺片水平上进一步观察致域大鼠肺VCAM·I的表达情况，对鳖体动物实验的结果进行进一步的补充和证实，进一步验证VCAM．！表达I 升高是泛成致鳗状奋的一种基本改变，而抗原攻击不能进一步上瞩VCAM－l 的表达．同时观亲抗炎症药物糖皮质激蠢地塞米松、R三烯受体桔抗剂 ONO－10781 Pranluk8St，4－氧－8－【对－（4－苯丁氧基）苯甲田氦基卜2－（5－四哇基）－4H－卜苯并毗哺半水台物｝和速激肽 NK－l 受体桔抗剂 SR－140333《（S）－l（2－【3，4－HR苯基－l（3－异丙氧基乙酞基）－赈咬基－3］乙基－l）－4－苯基－I－偶氮二环【2，2，2］辛烷氯化物 I对离体肺片 VCA M．l 表沾的影响，进一步探讨影响肺部VCAM－！表达的冈紊．方法：用卵白蛋白（OVA，lmghl）致敏 SD大鼠后 15大，脸主动脉放血取肺纽织，用切片机切成约 500 P m的肺簿片，孵育丁 35切．5“C泅有混合气体门5％O2＋5＄CO／的 Kreb’s液体中·预孵育 Ih后，加人各种药物或生理盐水（对照），10 min后加OVA （1 ughl）或生理盐水，继续听育3 h，取出肺片保存于－70”C。为检测听育过程中肺片活性，以比色法渊定乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）活性。蛋R免疫印迹法测定不同组别大鼠离体肺薄片的yCAM－1的表达．统计学处理：结果以Z土 s表示，采用SPSS for’indo’s 8．0统计软包，以on e、syA及卜t6St作差异的显著性分析。间结果： 1．致欧大鼠离体防簿片在听育过程中向eb’S t中忑放LDH．在开始第一个小时肺片LDH释放较多且不稳定，但在接下来的二个小时中LDH f放较少．2－浙江大学硕士学垃论文且比牧稳定，而OVA攻击对肺片的活性并未造成有统计意义的影响． 2．整体OVA致敏及离体OVA攻击对人鼠肺薄片VCAM－I表达的影响：在我们的实验条件下，未致敏大鼠肺薄片未经OVA攻击对肌钒即可测到有一定员 VCAM一衰达（n＝8．相对灰度为 1．08土 0．14）．未致敏人鼠离体肺薄片卵白勾蛋白攻击后 VCAM－l的表达（n＝8，相对灰应为 1．0610．20）与对照纽相比没有增加．致敏大鼠离体肺薄片未经OVA攻击VC＾M－！表达（ps，相对灰度为 1．38士 ***）明显增加（Ped．

关键词：血管细胞粘附分子-1(VCAM-1) 白三烯cysLT受体拮抗剂/ONO-1078 速激肽NK-1受体拮抗剂/SR-140333 地塞米松哮喘/病因疾病模型/动物大鼠

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大鼠失神经支配骨折修复的实验研究

大鼠失神经支配骨折修复的实验研究

作者：张双明湖北中医学院

学位级别：硕士

目的研究强骨胶囊促进大鼠失神经支配骨折愈合的作用机理。方法雄性SD大鼠,10%水合氯醛腹腔麻醉,在距坐骨结节0.5cm处切断坐骨神经,横形截断股骨中段,建立失神经支配骨折动物模型,造模成功后,将大鼠随机分为强骨胶囊大剂量组、强骨胶... 详细信息

目的研究强骨胶囊促进大鼠失神经支配骨折愈合的作用机理。方法雄性SD大鼠,10%水合氯醛腹腔麻醉,在距坐骨结节0.5cm处切断坐骨神经,横形截断股骨中段,建立失神经支配骨折动物模型,造模成功后,将大鼠随机分为强骨胶囊大剂量组、强骨胶囊中剂量组、强骨胶囊小剂量组、丹参组和空白对照组,每组30只。强骨胶囊大剂量组,给予强骨胶囊180mg/kg/d灌胃,每日一次;强骨胶囊中剂量组,给予强骨胶囊90mg/kg/d灌胃,每日一次;强骨胶囊小剂量组,给予强骨胶囊45mg/kg/d;丹参组,给予丹参注射液40mg/kg/d,灌胃,每日一次;空白对照组,遭摸后不作处理。各组大鼠分别在术后1周、2周和3周取骨折中心上下各1cm全段股骨标本,测算骨痂体积。骨痂取材切片,常规HE染色,观察骨痂结构。NGF、BMP-2和bFGF免疫组织化学染色,凝胶成像分析系统计算每个视野阳性细胞数。检测血清Ca、P和ALP。结果(1)骨痂体积测算结果:术后1周,各组骨折处均可见增粗。强骨胶囊大剂量组和强骨胶囊中剂量组骨痂体积值大于丹参组(P＜0.05)和空白对照组(P＜0.05),强骨胶囊小剂量组骨痂体积值大于空白对照组(P＜0.05)。术后2周,各组骨痂体积均有不同程度的增大。强骨胶囊大剂量组和强骨胶囊小剂量组骨折断端新生软骨量增多,骨痂外直径增生显著。强骨胶囊大剂量组骨痂体积明显大于丹参组(P＜0.01)、空白对照组(P＜0.01)和强骨胶囊小剂量组(P＜0.01),中剂量组骨痂体积明显大于空白对照组(P＜0.01)和丹参组(P＜0.05),强骨胶囊小剂量组大于丹参组(P＜0.05)和空白对照组(P＜0.05)。术后3周,强骨胶囊大剂量组骨缺损消失,骨痂外直径增粗,骨痂生长更明显,强骨胶囊中剂量组和强骨胶囊小剂量组骨折处有骨性骨痂形成,丹参组和空白对照组骨痂增生不明显。强骨胶囊大剂量组和强骨胶囊中剂量组骨痂体积达到高峰且大于丹参组(P＜0.01)和空白对照组(P＜0.01),强骨胶囊大剂量组也大于强骨胶囊小剂量组(P＜0.05),强骨胶囊小剂量组大于丹参组(P＜0.05)和空白对照组(P＜0.05)。(2)HE染色结果:术后1周,强骨胶囊大剂量组成骨细胞数目多于其余各组,其它各组以血肿和炎性渗出为主要表现,软骨细胞较少。术后2周,强骨胶囊大剂量组可见软骨骨痂和骨性骨痂,软骨细胞团周边有少量编织骨形成。强骨胶囊中剂量组有少量新生骨小梁,骨折断端内外形成骨样组织。其余各组纤维性骨痂生成明显。术后3周,强骨胶囊大剂量组类骨质较多,外骨痂明显增多。强骨胶囊中剂量组骨小梁排列不规则。强骨胶囊小剂量组骨折处新生软骨已接近全部骨化。丹参组新生血管丰富,骨小梁排列紊乱。空白组纤维骨痂消失,代之以软骨骨痂与骨性骨痂。(3)免疫组化染色结果:NGF:术后1周,强骨胶囊大剂量组骨折断端纤维母细胞与少量的软骨细胞NGF阳性颗粒染色呈淡棕黄色,阳性细胞数明显多于中剂量组(P＜0.01)和强骨胶囊小剂量组(P＜0.01),强骨胶囊中剂量组多于空白对照组(P＜0.05)。术后2周,强骨胶囊中剂量组和强骨胶囊小剂量组成骨细胞胞浆内有阳性颗粒,强骨胶囊中剂量组阳性颗粒多于丹参组(P＜0.05)和空白对照组(P＜0.05)。强骨胶囊大剂量组阳性细胞数明显多于丹参组(P＜0.01)和空白对照组(P＜0.01)。术后3周,强骨胶囊中剂量组和强骨胶囊小剂量组骨痂成骨细胞染色阳性,强骨胶囊中剂量组和强骨胶囊小剂量组阳性细胞数多于大剂量组(P＜0.05)。强骨胶囊大剂量组成骨细胞轻度着色染色阳性。BMP-2:强骨胶囊大剂量组BMP-2阳性细胞数在术后1、2周时呈上升趋势,第2周时达到高峰,第3周时降低。中剂量组BMP-2阳性细胞数在术后第3周时高于其他组,与空白对照组和丹参组相比差异有显著性(P＜0.01)。bFGF:术后1周,强骨胶囊大剂量组和强骨胶囊中剂量组纤维骨痂中的成纤维细胞和血管内皮细胞,未分化间充质细胞及幼稚的成骨细胞有较均匀的棕色细颗粒状bFGF呈阳性表达,强骨胶囊中剂量组阳性细胞数明显多于强骨胶囊小剂量组(P＜0.05)、对照组(P＜0.05)和丹参组(P＜0.05)。术后2周,强骨胶囊大剂量组和强骨胶囊中剂量组在成骨细胞和幼稚的软骨细胞、新生骨基质和外骨膜成骨细胞bFGF表达阳性,阳性细胞数上升至高峰,明显多于空白对照组(P＜0.01)和丹参组(P＜0.01)。术后3周,强骨胶囊大剂量组阳性细胞数量及阳性反应程度较前明显下降,着色程度较前减弱,与空白对照组和丹参组相比有统计学意义(P＜0.05)。其它各组染色较浅,阳性细胞数明显减少。(4)血清Ca、P和ALP结果:术后1周,各组之间血清Ca浓度无明显差异(P＞0.05);术后2周,强骨胶囊中剂量组血清Ca浓度高于其他组,与丹参组相比(

关键词：失神经支配/骨折疾病模型/动物大鼠细胞因子

熏洗一号方对大鼠失神经支配骨骼肌乙酰胆碱酶与Na^+-K^+-ATP酶影响的实验研究

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中国中医骨伤科杂志 2008年第6期16卷 38-40页

作者：刘傲霜陈洪波张双明武汉经济技术开发区神龙医院湖北中医学院针灸骨伤系湖北中医学院

目的:研究中药熏洗一号方对失神经支配骨骼肌乙酰胆碱酶与Na+-K+-ATP酶的影响。方法:雄性SD大鼠120只,造模成功后随机分为熏洗一号方组、丹参组、模型组和空白对照组,每组各30只。各组实验动物分别在术后7d、14d和21d处死,股直肌肌腹组... 详细信息

目的:研究中药熏洗一号方对失神经支配骨骼肌乙酰胆碱酶与Na+-K+-ATP酶的影响。方法:雄性SD大鼠120只,造模成功后随机分为熏洗一号方组、丹参组、模型组和空白对照组,每组各30只。各组实验动物分别在术后7d、14d和21d处死,股直肌肌腹组织块取材,常规HE染色,分别观察失神经支配后骨骼肌结构,乙酰胆碱酯酶活性和骨骼肌匀浆液Na+-K+-ATP酶改变。结果:⒈HE染色:按优劣排列依次为熏洗一号方组、丹参组、模型组。⒉乙酰胆碱酯酶活性:随着试验观察时间的推移,熏洗一号方组乙酰胆碱酯酶活性逐渐增强,最后接近正常水平,染色均匀,运动终板结构规则,呈椭圆形或卵圆形花纹状结构,与空白组相比(P>0.05);模型组和丹参组乙酰胆碱酯酶活性弱,与空白对照组相比(P0.05)。术后14d熏洗一号方组与空白对照组对比(P<0.05)。术后21d,熏洗一号方组与空白对照组对比(P<0.01),且熏洗一号方组Na+-K+-ATP酶含量最高。结论:熏洗一号方能延缓神经肌肉运动终板(Motor endplate,MEP)与效应器的变性,改善失神经支配骨骼肌的营养供应、延缓骨骼肌的萎缩。

关键词：中药熏洗失神经支配/骨骼肌疾病模型/动物乙酰胆碱酯酶 Na^+-K^+-ATP酶