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贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株糖蛋白基因差异研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第7期32卷 595-599页

作者：李世军余春王定明唐青陶晓燕李浩庄妍周敬祝王月田克诚唐光鹏贵州省疾病预防控制中心贵阳550004 中国疾病预防控制中心病毒所

目的分析贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株的糖蛋白基因（G基因）差异，为狂犬病疫苗研制及有效防控措施的制定提供科学依据。方法以RT-PCR扩增贵州省近几年人和犬狂犬病病毒阳性脑组织标本G基因序列，对扩增产物进行序列测定后采用... 详细信息

目的分析贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株的糖蛋白基因（G基因）差异，为狂犬病疫苗研制及有效防控措施的制定提供科学依据。方法以RT-PCR扩增贵州省近几年人和犬狂犬病病毒阳性脑组织标本G基因序列，对扩增产物进行序列测定后采用生物信息学软件对序列与疫苗株G基因序列进行比较分析。结果贵州省狂犬病病毒阳性标本经RT-PCR扩增、测序与拼接后得到8株狂犬病病毒G基因全长序列，与我国常用狂犬病疫苗毒株在核苷酸和推导的氨基酸水平上的同源性分别为82．0％～94．1％和87．6％-97．5％，与人用疫苗株中的CTN株G基因核苷酸和氨基酸序列同源性最高（分别为87．0％～94．1％和93．7．％～97．5％），而在兽用疫苗株中与Flury株的核苷酸和氨基酸同源性最高（分别为83．9％～84．6％和91．1％～93．0％）。在所测定序列中以来自贵州省2005年的GZ09与人用疫苗毒株CTN和动物用疫苗株Flury株G同源性最高，而以2010年的GZ30与人用疫苗毒株CTN和动物用疫苗株Flury株G基因同源性最低。系统进化树分析显示，本次所测定的序列和9株疫苗株与狂犬病病毒基因1—7型中的基因1型代表毒株聚类在同一分支，与疫苗毒株中的CTN亲缘进化关系最近，而与其他疫苗株相对较远，所测定序列中以2005年的GZ09与CTN疫苗株同源性最近，而其他序列与CTN毒株的亲缘进化关系相对较远。结论本研究从狂犬病病毒G基因水平证明贵州省狂犬病病毒流行毒株与常用的疫苗株同属狂犬病病毒基因1型，与人用疫苗株中的CTN毒株及兽用疫苗株中的Flury株差异最小，且随着时间的推移贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株G基因的差异越来越大，该研究结果将为狂犬病疫苗研制及有效防控措施的制定提供科学依据。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白基因疫苗毒株差异

河南省PRV血清学调查及鉴别野毒/疫苗毒株二重FQ-PCR方法的建立

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河南省PRV血清学调查及鉴别野毒/疫苗毒株二重FQ-PCR方法的建立

作者：杨雯慧河南科技大学

学位级别：硕士

为了更好的了解河南省猪伪狂犬的流行状况,本次调查通过对本实验室2007-2014年以来血清学数据进行汇总,按照不同时间、不同地区、不同生长阶段猪群划分,从时间、空间、畜间三个角度全面分析近几年河南省PR的流行趋势。比较分析得出:2007... 详细信息

为了更好的了解河南省猪伪狂犬的流行状况,本次调查通过对本实验室2007-2014年以来血清学数据进行汇总,按照不同时间、不同地区、不同生长阶段猪群划分,从时间、空间、畜间三个角度全面分析近几年河南省PR的流行趋势。比较分析得出:2007年-2010年河南省猪伪狂犬g E抗体阳性率呈逐年下降趋势,但在2010年以后河南省猪伪狂犬g E抗体阳性率持续升高;将2014年检测1373头猪血清抗体数据,按照区域划分为豫东、豫西、豫北、豫南、豫中5个地区,结果显示豫北地区PRV野毒感染率高达66.67%,其次是豫中和豫南地区分别59.51%、53.9%;将2014年766头背景清晰的血清学数据,按照猪不同饲养阶段进行分群,得出母猪和后备母猪的阳性率分别高达64.21、50%,其次是育肥猪野毒的阳性率为49.01%。虽然疫苗的免疫接种是预防和控制猪伪狂犬病的根本措施,但近几年PR仍呈高爆发趋势,因此如何鉴别野毒和疫苗毒株感染成为了一个重要的问题。本研究根据Gen Bank中PRV-g D/g E基因序列,选取高度保守序列设计2对特异性引物和2条MGB探针。采用矩阵法筛选最佳引物和探针浓度,优化最佳退火温度。分别对该方法进行灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性试验,并对疑似PRV感染的疑似样品进行临床应用性试验,同常规PCR方法进行了对比。结果显示,经过优化后的最佳引物浓度组合PRV-g E/p1、PRV-g D/p1/p2均为0.7μmol/L,PRV-g E/p2为0.8μmol/L;探针分别为Probe-PRV-g E为0.4μmol/L、Probe-PRV-g D为1.4μmol/L;最佳退火温度为60℃。p GEM-T/PRV-g E最低检出限均为1×101拷贝/μL,灵敏度为常规PCR的10倍;p GEM-T/PRV-g D最低检出限为1×102,灵敏度为常规PCR相同。对9种病毒和3种疫苗进行特异试验,结果表明该方法具有良好的特异性,而且可以对野毒株和疫苗毒株进行鉴别。将p GEM-T/PRV-g E和p GEM-T/PRV-g D质粒等体积混合均匀,对1×107、1×105、1×102拷贝/μL分别进行3次重复,表明该方法具有较好的重复性;对以55份临床疑似阳性样品分别进行二重FQ-PCR和常规PCR检测,二重FQ-PCR检出阳性样品30份,其中双阳性基因19份,g D阳性11份,常规PCR检出阳性样品25份,其中双阳性15份,g D阳性10份。结果显示,二重FQ-PCR比常规PCR方法阳性样品检出率高比常规PCR更灵敏。成功建立了鉴别猪伪狂犬病野毒株与疫苗毒株的二重FQ-PCR的方法。通过检测g D扩增结果阳性,g E扩增结果阴性,则判定为PR疫苗毒株感染;g D扩增曲线为阳性,同时g E也为阳性的则判定为PR野毒感染。本方法的建立,不仅可以用于PRV早期病毒感染诊断,而且同时能够鉴别野毒株/疫苗毒株感染,对PRV的防制和净化具有重要意义。

关键词：猪伪狂犬血清学二重荧光定量PCR 野毒株疫苗毒株鉴别

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鸡传染性法氏囊病疫苗毒株的生物学特性研究

河南农业科学 2003年第1期32卷 40-42页

作者：李学伍肖治军张改平邓瑞广杨艳艳赵东柴书军邢广旭河南省农业科学院生物技术研究所河南郑州450002

鸡传染性法氏囊病(IBD)是目前危害养鸡业最严重的疫病之一,该病在世界各地广泛流行,主要侵害雏鸡的中枢免疫器官--法氏囊.临床上主要表现为尖峰式死亡,不同发病鸡群死亡率不同,死亡鸡具有典型的病理剖检变化.IBD在我国已持续存在20多年... 详细信息

鸡传染性法氏囊病(IBD)是目前危害养鸡业最严重的疫病之一,该病在世界各地广泛流行,主要侵害雏鸡的中枢免疫器官--法氏囊.临床上主要表现为尖峰式死亡,不同发病鸡群死亡率不同,死亡鸡具有典型的病理剖检变化.IBD在我国已持续存在20多年,由于IBD疫苗及IBD卵黄抗体的广泛应用,鸡群暴发IBD导致大批死亡的现象已基本得到控制.

关键词：变异鸡传染性法氏囊病疫苗毒株生物学特性

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疫苗毒株的数量控制是蓝耳病防控的关键

北方牧业 2018年第12期 15-16页

作者：郭春和中山大学国家生猪产业技术体系研发中心猪病研究室

一、猪蓝耳病流行情况猪蓝耳病病毒（PRRSV）主要分两类,高致病性毒株（变异毒株）和经典毒株,国内还是以高致病性毒株为主,据测算,其实验室检测到的90%以上的蓝耳病毒株都属于高致病性毒株。

关键词：疫苗毒株蓝耳病病毒数量控制防控高致病性猪蓝耳病流行情况变异毒株

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蓝耳病疫苗毒株给我们带来了什么?

今日养猪业 2016年第9期 32-34页

作者：徐卫康赵建增华威特(江苏)生物科技有限公司华威特(北京)生物制药有限公司

临床上不能认为蓝耳病疫苗毒株与流行毒株相似就预测疫苗会产生保护性免疫力,因为确实有经典株流行猪场免疫经典毒株疫苗后仍不能控制蓝耳病,反而在换用变异毒株疫苗后疫情逐渐得到缓解。

关键词：蓝耳病疫苗毒株变异毒株流行毒株弱毒疫苗免疫原性致病性保护性免疫力结构蛋白编码区细胞免疫应答

鉴别猪流行性腹泻疫苗毒株与野毒株巢式PCR检测方法的建立及初步应用

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广东畜牧兽医科技 2015年第2期40卷 36-38页

作者：刘琪冯晓声周如月贾爱卿王贵平广东海大畜牧兽医研究院广东广州511400

根据Gen Bank中猪流行性腹泻病毒(PEDV)的基因序列分别设计两对引物,在完成最佳条件筛选、特异性、敏感性试验的基础上,建立一种快速区分PEDV疫苗毒株与野毒株的巢式PCR检测方法。建立的PCR快速检测方法能分别对PEDV疫苗毒株和野毒株扩... 详细信息

根据Gen Bank中猪流行性腹泻病毒(PEDV)的基因序列分别设计两对引物,在完成最佳条件筛选、特异性、敏感性试验的基础上,建立一种快速区分PEDV疫苗毒株与野毒株的巢式PCR检测方法。建立的PCR快速检测方法能分别对PEDV疫苗毒株和野毒株扩增出特异性片段,片段大小分别为774 bp、150bp。该方法对传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(Po RV)、猪瘟病毒(HCV)、伪狂犬病病毒(PRV)则不能扩增出特异性片段。该方法具有快速、灵敏、特异、通用等特点,可用于实验室的快速诊断、分子流行病学的调查和野毒株的分离鉴定。

关键词： PEDV 野毒株疫苗毒株巢式PCR

新城疫Ⅰ系和Ⅱ系疫苗毒株在鸡胚细胞中增殖规律的研究

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中国预防兽医学报 1984年第3期 22-25页

作者：肖俊杰赵余放西北农学院牧医系

新城疫Ⅰ、Ⅱ系疫苗毒株可在鸡胚细胞中生长和引起细胞病变效应(CPE),并可从中获得高滴度的病毒。因此,目前在国内外已有用鸡胚细胞代替鸡胚生产疫苗的方法。但是,关于Ⅰ、Ⅱ系疫苗株病毒在鸡胚细胞内的增殖以及向培养液中释放的规律,... 详细信息

新城疫Ⅰ、Ⅱ系疫苗毒株可在鸡胚细胞中生长和引起细胞病变效应(CPE),并可从中获得高滴度的病毒。因此,目前在国内外已有用鸡胚细胞代替鸡胚生产疫苗的方法。但是,关于Ⅰ、Ⅱ系疫苗株病毒在鸡胚细胞内的增殖以及向培养液中释放的规律,至今研究尚少。本试验以荧光抗体技术及红细胞凝集试

关键词：新城疫鸡胚细胞培养液鸡红细胞鸡病疫苗毒株荧光抗体染色

三重TaqMan实时定量RT—PCR检测鉴别野生型猪瘟病毒、猪瘟兔化疫苗毒株、牛病毒性腹泻病毒

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中国猪业 2011年第6期5卷 70-71页

在这项研究中，在GenBank提供瘟病毒属基因组序列，设计三对引物和TaqMan探针：猪瘟病毒（CSFV）基因组的NS5A两个目标区域可以区分野生型猪瘟病毒和猪瘟兔化疫苗（HCLV），

关键词： TaqMan探针猪瘟病毒牛病毒性腹泻病毒疫苗毒株野生型 PCR检测实时定量 GenBank

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传染性囊病疫苗毒株引起的免疫抑制持续时间

动物医学进展 1983年第3期 40-41页

作者：杨佩琼

作者证明了一日龄小鸡接种传染性囊病一疫苗毒株引起对19号菌株流产布氏杆菌反应的抑制可持续4周,法氏囊的组织学检查证明在初期损伤后伴随着体液性应答的产生,出现囊淋巴细胞逐渐重新长出。传染性囊病(IBD)对法氏囊的不利影响和IBD活... 详细信息

作者证明了一日龄小鸡接种传染性囊病一疫苗毒株引起对19号菌株流产布氏杆菌反应的抑制可持续4周,法氏囊的组织学检查证明在初期损伤后伴随着体液性应答的产生,出现囊淋巴细胞逐渐重新长出。传染性囊病(IBD)对法氏囊的不利影响和IBD活毒疫苗使用中所包含的内在危险性已有充分的文献论据(Thornton和Patlison1975,Maskef等1979)。

关键词：疫苗毒株预防接种传染性囊病免疫接种防疫淋巴器官腔上囊法氏囊免疫抑制