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重组减毒沙门氏菌疫苗候选株研究进展

中国禽业导刊 2023年第5期40卷 45-51页

作者：沈子城孟闯谢添刘炜高冉耿士忠扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

疫苗是人和动物疾病防控的有效措施之一。减毒沙门氏菌不仅可以被用作疫苗,也被用作疫苗载体制备表达外源基因的重组疫苗。目前,重组减毒沙门氏菌疫苗主要通过重组载体(含宿主菌-载体平衡致死系统)或重组染色体来表达外源靶基因。重组... 详细信息

疫苗是人和动物疾病防控的有效措施之一。减毒沙门氏菌不仅可以被用作疫苗,也被用作疫苗载体制备表达外源基因的重组疫苗。目前,重组减毒沙门氏菌疫苗主要通过重组载体(含宿主菌-载体平衡致死系统)或重组染色体来表达外源靶基因。重组靶基因的减毒沙门氏菌疫苗,进入动物或人体内后,不仅能够表达蛋白诱导相应的抗体,而且沙门氏菌也能促进细胞免疫应答,增强免疫效果。近些年,伴随着基因工程的发展,越来越多针对细菌、寄生虫和肿瘤的重组减毒沙门氏菌疫苗候选株被构建,具有良好的免疫保护能力,展现出良好的应用前景。本文重点介绍重组减毒沙门氏菌疫苗研究和应用的最新进展。

关键词：减毒沙门氏菌平衡致死系统细胞免疫应答重组疫苗免疫保护疫苗载体疫苗候选株寄生虫

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重组基因Ⅶ型新城疫病毒疫苗候选株的构建

广东畜牧兽医科技 2022年第6期47卷 10-14页

作者：周洁孙慧敏董嘉文李林林张俊勤黄允真汪招雄孙敏华广东省农业科学院动物卫生研究所农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广东省畜禽疫病防治研究重点实验室岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东广州510640 长江大学动物科学学院湖北荆州434025 浙江迪福润丝生物科技有限公司浙江杭州310052

新城疫是我国必须控制和净化的传染病之一,疫苗免疫是防控疾病的重要手段。为获得抗原性匹配的疫苗株,以新城疫LaSota疫苗株为骨架,替换当前流行的基因Ⅶ型毒株GM株的主要抗原性相关基因F(Fusion)和HN(Hemagglutinin-neuraminidase),拯... 详细信息

新城疫是我国必须控制和净化的传染病之一,疫苗免疫是防控疾病的重要手段。为获得抗原性匹配的疫苗株,以新城疫LaSota疫苗株为骨架,替换当前流行的基因Ⅶ型毒株GM株的主要抗原性相关基因F(Fusion)和HN(Hemagglutinin-neuraminidase),拯救获得重组病毒rLa-mGM。生物学特性测定表明,重组毒株的MDT为160 h,ICPI为0,EID_(50)为10^(-8.4)/0.2 mL。将rLa-mGM株繁殖后以10^(8.0) EID_(50)制备灭活疫苗,与商品化LaSota疫苗各免疫10只25日龄SPF鸡,0.2 mL/只。免疫后14天,其血清平均HI效价为7.6log2,商品化LaSota疫苗免疫鸡的血清平均HI效价为7.4log2。结果表明重组病毒免疫原性良好,可作为疫苗候选株。

关键词：新城疫基因Ⅶ型 LaSota疫苗株重组毒株 HI效价疫苗候选株

CA16疫苗候选株特异性免疫血清保护性的初步评价

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中国生物制品学杂志 2016年第10期29卷 1013-1016页

作者：谢忠平李华杨水芝谢天宏杨婷刘正玲岳磊宋霞中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价CA16 K168/8疫苗候选株免疫血清对不同CA16毒株的交叉中和能力及对致乳鼠麻痹CA16临床分离株的体内中和保护能力。方法将CA16 K168/8疫苗候选株病毒纯化液辅以弗氏佐剂经背部及侧腹部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,制备高效价... 详细信息

目的评价CA16 K168/8疫苗候选株免疫血清对不同CA16毒株的交叉中和能力及对致乳鼠麻痹CA16临床分离株的体内中和保护能力。方法将CA16 K168/8疫苗候选株病毒纯化液辅以弗氏佐剂经背部及侧腹部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,制备高效价免疫血清。采用微量细胞病变法检测中和抗体效价;用中和抗体效价终浓度为32 U的特异性免疫血清对18株不同CA16临床分离毒株及15株EV71毒株进行交叉中和指数检测;选取中和抗体效价为16、32、64、128、256 U的特异性免疫血清对可致乳鼠产生明显麻痹作用的CA16 FY-18株进行体内中和保护水平检测。结果获得的兔抗CA16 K168/8血清对14株CA16毒株的中和效价为1∶1 024~1∶6 144,GMT值为1∶3 153;可于体外完全中和18株不同CA16毒株,中和指数为100~5 623.4,平均值为794.1,而对15株EV71临床分离株中和指数仅为0.32~5.62,平均值为2.2;体内中和保护水平随抗体效价升高而增加,呈量-效关系,当中和抗体效价达128 U时,可完全保护乳鼠不发生临床麻痹反应。结论 CA16 K168/8疫苗候选株特异性免疫血清体内、外试验结果表明其具有良好的免疫保护性。

关键词：柯萨奇病毒A组16型疫苗候选株免疫血清交叉保护

7.2分支H5N1亚型禽流感病毒反向遗传疫苗候选株的构建

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 764-766页

作者：范俊李旭勇王金良郭晶邓国华施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为应对clade7.2 H5N1亚型禽流感病毒(AIV)持续发生的抗原性改变及其引发的潜在AIV的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果挑选合适的供体株制备疫苗候选株。本研究采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨... 详细信息

为应对clade7.2 H5N1亚型禽流感病毒(AIV)持续发生的抗原性改变及其引发的潜在AIV的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果挑选合适的供体株制备疫苗候选株。本研究采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以clade7.2 H5N1 AIV A/Chicken/Liao Ning/S4092/2011(CK/LN/S4092)基因组为模板经RT-PCR扩增其HA及NA基因,并对HA基因进行分子修饰,去除与H5亚型AIV致病力有关的HA蛋白裂解位点处的多个连续碱性氨基酸,使其获得低致病性AIV的分子特征(即将-PQIEGRRRKR-突变为-PQRETR-),从而构建出clade7.2 H5N1亚型AIV疫苗候选株rPR8-LN/S4092,为动物免疫试验奠定了基础。

关键词： clade 7 2 H5N1流感病毒反向遗传操作疫苗候选株

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H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的构建

中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 571-573页

作者：王增冯华朋朱鹏阳邬丽曾显营邓国华施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研制H9N2亚型禽流感病毒疫苗,本研究以具有良好抗原性的代表病毒株A/chicken/Hunan/S933/2008(H9N2)(HuN33)为HA和NA基因的供体,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的6个内部基因为骨架,利用反向遗传操作技术,救获了一株重组H9N2亚型禽... 详细信息

为研制H9N2亚型禽流感病毒疫苗,本研究以具有良好抗原性的代表病毒株A/chicken/Hunan/S933/2008(H9N2)(HuN33)为HA和NA基因的供体,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的6个内部基因为骨架,利用反向遗传操作技术,救获了一株重组H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株Re-9。该疫苗候选株既具有很好的抗原性又具有较高的鸡胚增殖特性,从而为有效防控H9N2亚型禽流感的流行提供了技术储备。

关键词： H9N2 禽流感病毒反向遗传疫苗候选株

H7N9亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立及其疫苗候选株的构建

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 407-409页

作者：李媛媛郭晶李旭勇王金良范俊梁立滨邓国华施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立H7N9亚型禽流感病毒(AIV)反向遗传操作系统,本研究以H7N9亚型(AIV)A/CK/Shanghai/S1053/2013(CK/53)株为亲本病毒,构建了该病毒株的8质粒反向遗传操作系统,并拯救出救获株rCK/53。全基因组序列测定结果表明,rCK/53与亲本病毒的核... 详细信息

为建立H7N9亚型禽流感病毒(AIV)反向遗传操作系统,本研究以H7N9亚型(AIV)A/CK/Shanghai/S1053/2013(CK/53)株为亲本病毒,构建了该病毒株的8质粒反向遗传操作系统,并拯救出救获株rCK/53。全基因组序列测定结果表明,rCK/53与亲本病毒的核苷酸序列完全一致。同时以A/PueaoRico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以CK/53的HA和NA的表面基因为供体,构建H7N9亚型AIV疫苗候选株CK53/PR8,疫苗株的8个基因来源与预期完全一致。对rCK/53以及疫苗候选株CK53/PR8在MDCK和A549两种细胞中进行生物学特性的比较,在A549中复制差异不显著,而在MDCK中48 h和72 h两者复制具有明显差异。rCK/53反向遗传操作系统的建立和疫苗候选株CK53/PR8的构建为进一步开展H7N9亚型AIV跨宿主传播机制、致病机理及进一步的免疫保护实验奠定了基础。

关键词： H7N9 禽流感病毒反向遗传操作系统疫苗候选株

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鸭源H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建

中国兽医科学 2009年第1期39卷 54-57页

作者：唐应华吴培培彭大新张文俊李彦芳汪文斌刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

H5N1亚型clade 2.3.4为我国南方地区的优势毒株。A/mallard/Huadong/S/2005(S)病毒在遗传进化上属于clade 2.3.4,而A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)病毒属于clade 2。通过删除S病毒和Y病毒的HA多碱性氨基酸序列,S病毒由PLRERRRKRGL改变为PLREGRGL,Y病毒由PQR-ERRKKRGL改变为PQREGRGL,使之成为低致病性特征的HA基因。将S病毒和Y病毒的NA基因和突变的HA基因分别组合,由A/Puerto Rico/8/34(PR8)病毒提供6个内部基因,进行拯救,共获得4个致弱病毒(SS,SY,YS,YY)。这4个致弱病毒对SPF鸡的静脉内致病指数(IVPI)为0,对10日龄SPF鸡胚无致病性。SS、SY、YS、YY病毒第10代鸡胚尿囊液的HA效价分别为9、11、111、1 lb。

关键词： H5N1 HA裂解位点反向遗传疫苗候选株

基因Ⅶ型新城疫病毒样颗粒作为疫苗候选株的免疫效果

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中国兽医学报 2017年第2期37卷 201-205页

作者：袁乾亮丁佳欣高一丹徐小红钱晶薛聪杨明曦李金斗冉雄胡国升尹仁福丁壮吉林大学动物医学学院吉林长春130062

利用昆虫细胞/杆状病毒表达载体系统,将已构建编码新城疫病毒(NDV)M、F和HN结构基因的3种单顺反子重组杆粒共感染悬浮培养的Sf9细胞以大量制备新城疫病毒样颗粒(ND VLPs)。收集细胞培养上清经超速离心浓缩,蔗糖密度梯度纯化后,利用Weste... 详细信息

利用昆虫细胞/杆状病毒表达载体系统,将已构建编码新城疫病毒(NDV)M、F和HN结构基因的3种单顺反子重组杆粒共感染悬浮培养的Sf9细胞以大量制备新城疫病毒样颗粒(ND VLPs)。收集细胞培养上清经超速离心浓缩,蔗糖密度梯度纯化后,利用Western blot检测和透射电镜观察。结果显示,3种目的蛋白均正确表达且组装形成与原病毒粒子形态相似的颗粒,测定其血凝活性效价可达12log2。动物试验结果表明,与LaSota灭活油乳苗相比,将纯化后的病毒样颗粒以含25μg蛋白的剂量或联合佐剂免疫商品蛋鸡后能产生较高水平的HI抗体,且可有效减少攻毒鸡只口咽、泄殖腔途径的排毒时间,从而减少病毒在健康鸡群中的传播感染机会;表明所研制的基因Ⅶ型ND VLPs可作为疫苗候选株具有很大的防控优势。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶ型病毒样颗粒疫苗候选株

口蹄疫抗原表位缺失标记疫苗候选株的构建及其应用

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口蹄疫抗原表位缺失标记疫苗候选株的构建及其应用

作者：张岩甘肃农业大学

学位级别：硕士

随着对FMDV研究深入，有学者发现在FMDV基因组中可以表达外源基因片段。通过对FMDV的基因组进行突变和插入，而达到获得新型产品用于应用的目的。本实验目的在于构建一株含有标记的口蹄疫疫苗候选株用于区分野毒感染与疫苗免疫。为了制... 详细信息

随着对FMDV研究深入，有学者发现在FMDV基因组中可以表达外源基因片段。通过对FMDV的基因组进行突变和插入，而达到获得新型产品用于应用的目的。本实验目的在于构建一株含有标记的口蹄疫疫苗候选株用于区分野毒感染与疫苗免疫。为了制备一个抗原表位缺失的口蹄疫标记疫苗株，以含有Asia1型口蹄疫病毒cDNA全长的感染性克隆pAsia1-FMDV作为框架，将3D蛋白的抗原决定簇进行突变。选取3D蛋白中的第27位氨基酸的组氨酸和31位的氨基酸天冬酰胺进行突变，将其分别突变为酪氨酸与精氨酸。把该抗原表位突变，从而导致该表位不能与对应单抗结合，继而获得口蹄疫抗原表位缺失毒株，也称之为负标记毒株。将含有负标记的重组质粒转染BHK-21细胞后，能够观察到明显的细胞病变效应（CPEs），通过RT-PCR和间接免疫荧光试验，表明重组的FMDV被成功拯救出。在对重组FMDV的生物学特性与亲本毒株比较后发现，重组病毒的生物学特性与亲本毒株相似。当重组病毒感染动物后，动物能够迅速的产生特异性的抗病毒抗体，利用间接免疫荧光反应能够在细胞上检测到病毒蛋白。依照重组病毒和亲本毒株的3D蛋白氨基酸序列分别合成了两条长度为21个氨基酸的合成肽，利用western blot试验来区分重组病毒与亲本毒株。

关键词：口蹄疫病毒口蹄疫病毒感染性克隆负标记疫苗候选株