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基于对免疫功能的调节探讨柴银颗粒对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证的治疗作用

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中国中药杂志 2020年第13期45卷 3020-3027页

作者：鲍岩岩时宇静郭姗姗耿子涵高英杰包蕾赵荣华孙静张贵民关永霞崔晓兰中国中医科学院中药研究所北京100700 鲁南制药集团股份有限公司山东临沂276006 中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006

根据国家主管部门对新型冠状病毒肺炎中医病证的分类,确定在寒湿证小鼠模型基础上感染人冠状病毒229E(HCoV-229E),形成人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证病证结合模型,该模型可模拟《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》中医治疗普通型病证... 详细信息

根据国家主管部门对新型冠状病毒肺炎中医病证的分类,确定在寒湿证小鼠模型基础上感染人冠状病毒229E(HCoV-229E),形成人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证病证结合模型,该模型可模拟《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》中医治疗普通型病证。具体步骤如下:建立寒湿证小鼠模型,在此模型基础上感染HCoV-229E,实验分为正常对照组,感染对照组,寒湿对照组,寒湿感染组(模型组),柴银颗粒高(8.8 g·kg^-1·d^-1)、低(4.4 g·kg^-1·d^-1)剂量组。感染当天给予柴银颗粒治疗,连续给药3 d。末次给药第2天解剖取肺组织,计算肺指数及抑制率;提取肺组织核酸,实时荧光定量RT-PCR法检测病毒载量;分离血液白细胞,流式细胞术检测T和B淋巴细胞百分比;提取肺组织蛋白,ELISA法检测IL-6,IL-10,TNF-α及IFN-γ含量。体外实验采用细胞病变(CPE)抑制法,从药物的最大无毒浓度开始,测定柴银颗粒对HCoV-229E的抑制作用,按Reed-muench法计算50%细胞毒性浓度(TC50)、最大无毒浓度(TC0)、50%细胞抑制浓度(IC^50)及药物治疗指数(TI)。结果显示,柴银颗粒高、低剂量能显著降低人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠的肺指数(P毒肺炎疫毒袭肺证小鼠外周血CD4^+ T淋巴细胞、CD8^+ T淋巴细胞、总B淋巴细胞百分比(P毒肺炎疫毒袭肺证小鼠肺组织炎症因子IL-10,TNF-α,IFN-γ含量(P毒核酸表达,病毒对照组HCoV-229E病毒核酸表达量为1.48×10^7 copies/mL,柴银颗粒在3.13,1.56 mg·mL^-1剂量时可明显降低HCoV-229E病毒核酸表达,核酸表达量分别为9.47×10^5,9.47×10^6 copies/mL。柴银颗粒对小鼠人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证有较好的疗效,可能通过增强机体免疫能力,降低肺细胞炎性因子表达发挥作用。

关键词：新型冠状病毒肺炎疫毒袭肺证柴银颗粒人冠状病毒小鼠模型

热炎宁合剂在评价人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证中的应用

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中国中药杂志 2020年第7期45卷 1465-1472页

作者：包蕾时宇静耿子涵孙静赵荣华杜成强褚亚军崔晓兰中国中医科学院中药研究所北京100700 清华德人西安幸福制药有限公司陕西西安710043

前期研究中,该实验室根据国家《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》中医临床分型,建立了人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型。该研究采用人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型,评价热炎宁合剂的有效性,为临床应用提供动物实验支持... 详细信息

前期研究中,该实验室根据国家《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》中医临床分型,建立了人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型。该研究采用人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型,评价热炎宁合剂的有效性,为临床应用提供动物实验支持。将小鼠分为正常组,HCoV-229E感染组,寒湿组,寒湿+HCoV-229E感染组,热炎宁大、小剂量组,其中寒湿组、寒湿+HCoV+229E感染组、热炎宁2个剂量组给予寒湿刺激造模7 d,第5天选择HCoV+229E感染组、寒湿+HCoV+229E感染组、热炎宁2个剂量组感染HCoV-229E病毒,感染当天热炎宁给药治疗,给药3 d,第4天取血并解剖取肺组织,计算肺指数和抑制率;流式技术检测外周血液中T和B淋巴细胞百分比;RT-PCR技术检测肺组织核酸病毒载量;ELISA法检测血清中胃动素、胃泌素含量以及肺组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-10含量。热炎宁合剂能显著降低人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠的肺指数(P肺组织病毒载量(P肺组织中TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-10含量(P毒肺炎疫毒袭肺证,其在改善肺部病变,增强小鼠胃肠道功能,提高小鼠自身免疫机能,降低体内细胞因子表达方面均具有明显疗效,为临床研究提供实验依据。

关键词：新型冠状病毒肺炎疫毒袭肺证热炎宁合剂小鼠模型

体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型的效用特点

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中国实验方剂学杂志 2021年第2期27卷 66-73页

作者：赵荣华孙静郭姗姗包蕾耿子涵鲍岩岩周冠儒高英杰崔晓兰时宇静中国中医科学院中药研究所生物安全实验室北京100700 武汉健民大鹏药业有限公司武汉430000

目的:研究药物—体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证动物模型的药理作用特点。方法:按体质量等级将48只Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组,人冠状病毒229E感染组,寒湿组,人冠状病毒肺炎疫毒袭肺复合模型组,体外培育牛黄高、低剂... 详细信息

目的:研究药物—体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证动物模型的药理作用特点。方法:按体质量等级将48只Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组,人冠状病毒229E感染组,寒湿组,人冠状病毒肺炎疫毒袭肺复合模型组,体外培育牛黄高、低剂量组,每组8只。采用寒湿环境诱导+人冠状病毒229E感染形成复合动物病证结合模型,在感染当天给予体外培育牛黄(0.128,0.064 g·kg^(-1)),灌胃给药,连续3 d,观察小鼠一般状态,小鼠肺指数和肺指数抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肺组织病毒载量;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清胃动素(MTL),胃泌素(GAS)含量,以及小鼠肺组织细胞因子白细胞介素(IL)-10,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α及γ-干扰素(IFN-γ)含量;采用流式细胞术检测小鼠血中CD4^(+)T淋巴细胞,CD8^(+)T淋巴细胞及B淋巴细胞。结果:体外培育牛黄高、低剂量组可明显改善模型小鼠的一般状态,与空白组比较,模型组小鼠肺指数显著升高(P肺组织核酸表达显著升高(P肺部组织细胞免疫因子TNF-α,IL-10和IL-6均显著增高(P肺指数均显著降低(P肺组织核酸表达显著降低(P肺组织中IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ含量均显著降低(P肺组织炎性渗出,肺间质水肿及瘀血等病理表现。结论:体外培育牛黄对人冠状病毒感染致疫毒袭肺证小鼠复合模型的药理作用有明显的改善效用,可显著改善小鼠行为及排泄物状态、降低模型小鼠肺指数、提高肺指数抑制率、降低小鼠肺组织核酸表达、减轻肺组织病理损伤、调节免疫机能和抑制炎性因子释放等作用环节发挥作用,为临床用药提供依据。

关键词：新型冠状病毒肺炎体外培育牛黄中医病机疫毒袭肺证免疫机能炎性因子