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分析化学 1997年第8期25卷 898-901页

作者：郭立安耿信笃西北大学现化分离科学研究所!西安710069

对在疏水相互作用色谱（ＨＩＣ）中报道的３种测定蛋白质Ｚ值的方法进行了讨论和比较，从线性参数、各种Ｚ值的物理意义Ｚ值的准确性等结果看，计量置换保留模型中的计量参数Ｚ是一个在ＨＩＣ中好的和通用的描述蛋白质保留特征的表征参数。

关键词：高效液相色谱蛋白质疏水相互作用色谱计量置换保留模型

疏水相互作用与亲水相互作用组合色谱纯化缩宫素

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过程工程学报 2010年第3期10卷 598-602页

作者：张晓鸥宋茂谦王长海 Jan-Christer Janson 顾铭大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系辽宁大连116024 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 Department of Physical and Analytical Chemistry Uppsala Biomedical CentreUppsala University

将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合,建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺.先以纯水为流动相,采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集,后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化,两步纯化后,峰面... 详细信息

将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合,建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺.先以纯水为流动相,采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集,后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化,两步纯化后,峰面积纯度达93.5%,提高了5.96倍,总回收率为50.1%,与用C18为介质的传统两步反相色谱纯化的结果相当.本方法有机溶剂用量仅为传统反相色谱的1/7,且两种介质都能耐受极端pH值清洗条件,重复利用率高.

关键词：聚己内酰胺琼脂糖凝胶疏水相互作用色谱亲水相互作用色谱缩宫素纯化

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谷胱甘肽键合柱对蛋白的选择性研究

化学学报 2012年第15期70卷 1637-1642页

作者：柯从玉孙妩娟张群正郑莉西安石油大学化学化工学院西安710065

通过将谷胱甘肽键合到硅胶表面合成了同时具有弱阳离子交换(WCX)、疏水(HIC)和氢键作用的多功能色谱填料,该固定相在HIC和WCX模式下对蛋白都有很好的分离效果.实验通过计量置换保留模型对蛋白在谷胱甘肽键合柱上的色谱保留行为及机理进... 详细信息

通过将谷胱甘肽键合到硅胶表面合成了同时具有弱阳离子交换(WCX)、疏水(HIC)和氢键作用的多功能色谱填料,该固定相在HIC和WCX模式下对蛋白都有很好的分离效果.实验通过计量置换保留模型对蛋白在谷胱甘肽键合柱上的色谱保留行为及机理进行了研究,结果发现,在流动相盐浓度较低时蛋白根据自身等电点高低通过静电作用力得以分离,而在高盐浓度下疏水和氢键作用力共同决定蛋白的保留.这种多作用力保留模式可有效提高色谱柱的选择性,尤其为蛋白质、多肽及氨基酸的高效分离提供新的解决思路.

关键词：多功能色谱填料离子交换色谱疏水相互作用色谱计量置换保留模型蛋白质分离

磷霉素改性氧化锆疏水作用色谱固定相性能研究

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磷霉素改性氧化锆疏水作用色谱固定相性能研究

中国化学会第26届学术年会分析化学分会场

作者：何海波余琼卫冯钰锜达世禄上海大学理学院化学系武汉大学化学与分子科学学院

＜正＞疏水相互作用色谱因其操作条件温和,能很好地保持蛋白质的生物活性和立体构像,从而被广泛地应用于蛋白质等生物大分子的分离和纯化。本文利用磷霉素一端具有磷酸基团,另一端为有一定的疏水性的环氧丙基的有利分子结构,通过其与氧... 详细信息

＜正＞疏水相互作用色谱因其操作条件温和,能很好地保持蛋白质的生物活性和立体构像,从而被广泛地应用于蛋白质等生物大分子的分离和纯化。本文利用磷霉素一端具有磷酸基团,另一端为有一定的疏水性的环氧丙基的有利分子结构,通过其与氧化锆之间的强Lewis酸碱作用发展了以氧化锆

关键词：磷酶素改性氧化锆疏水相互作用色谱碱性蛋白质

来源： cnki会议评论

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液相色谱法分离纯化烟草疫霉菌激发子

分析化学 2000年第9期28卷 1133-1135页

作者：马志超浙江大学华家池校区分析测试中心!杭州3110029

利用阴离子交换色谱和疏水相互作用色谱从烟草疫霉菌培养液中分离了一种新的９０ＫＤ激发子蛋白，讨论了阴离子交换色谱流动相的最佳ｐＨ值，建立了疏水相互作用色谱，硫酸铵与三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ）缓冲液／水洗脱模式，简化了... 详细信息

利用阴离子交换色谱和疏水相互作用色谱从烟草疫霉菌培养液中分离了一种新的９０ＫＤ激发子蛋白，讨论了阴离子交换色谱流动相的最佳ｐＨ值，建立了疏水相互作用色谱，硫酸铵与三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ）缓冲液／水洗脱模式，简化了纯化步骤和活性损失的危险。

关键词：阴离子交换色谱疏水相互作用色谱烟草疫霉菌激发子

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动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响

色谱 2009年第5期27卷 717-723页

作者：闵一陈刚耿信笃西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室陕西西安710069

依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白... 详细信息

依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的“条件板高”对流动相线速（u）的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色谱饼的1/5～1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此,用装填有HIC填料的色谱饼（10mm×20mm i.d.）在12min内便可完全分离7种标准蛋白。还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）进行了复性并同时纯化,在50min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39%,比活〉1×10^8IU/mg。可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到“三高”。

关键词：疏水相互作用色谱蛋白分离分离度色谱饼动力学因素生物工程粒细胞集落刺激因子

用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶及其折叠中间体的分子构象变化

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西北大学学报（自然科学版） 2007年第6期37卷 879-885页

作者：耿信笃刘振岭柯从玉李建军西北大学现代分离科学研究所/合成与天然功能分子化学教育部重点实验室陕西西安710069

目的用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶（α-Chy）及其折叠中间体的分子构象变化。方法用疏水色谱法对不同脲变条件下的α-Chy进行分离，对收集的不同馏分用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（HPHIE-MALDI-TOF-MS）进行检测，... 详细信息

目的用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶（α-Chy）及其折叠中间体的分子构象变化。方法用疏水色谱法对不同脲变条件下的α-Chy进行分离，对收集的不同馏分用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（HPHIE-MALDI-TOF-MS）进行检测，并用紫外和荧光光谱对其分子构象变化进行了验证。结果确认了脲变α-Chy中仅有一个稳定的折叠中间体存在，发现二者的z值均随脲浓度的增加而减小。在脲浓度范围为0～3．0mol·L^-1时，α-Chy折叠中间体的Z值远小于天然α-Chy的Z值，而脲浓度为4．0mol·L^-1和5．0mol·L^-1时，折叠中间体的Z值稍大于天然α-Chy的Z值。结论α-Chy折叠中间体的分子构象随脲浓度改变基本呈连续性变化。而天然α-Chy的分子构象随脲浓度呈不连续性变化。进一步发现α-Chy的Z值与其复性回收率之间存在着相似的变化规律。中间体的保留机理服从计量置换保留理论（SDT-R），且得到的参数Z可用来表征天然α-Chy和其折叠中间体的分子构象变化。

关键词：蛋白折叠分子构象疏水相互作用色谱基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱 (MALDI-TOF-MS) 计量置换 α-糜蛋白酶(α-Chy) 折叠中间体

用疏水色谱复性并同时纯化蛋白质的机理及其应用

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中国科学（B辑） 2002年第5期32卷 460-471,T001页

作者：耿信笃白泉西北大学现代分离科学研究所

变性蛋白表面的疏水氨基酸残基有与疏水色谱固定相（STHIC）颗粒相互作用的倾向,两者之间的疏水相互作用能够抑制变性蛋白分子间的相互聚集.同时疏水色谱固定相还能在分子水平上给变性蛋白分子提供足够高的能量,使其瞬时脱水并折叠成其... 详细信息

变性蛋白表面的疏水氨基酸残基有与疏水色谱固定相（STHIC）颗粒相互作用的倾向,两者之间的疏水相互作用能够抑制变性蛋白分子间的相互聚集.同时疏水色谱固定相还能在分子水平上给变性蛋白分子提供足够高的能量,使其瞬时脱水并折叠成其天然构象或不同的折叠中间体.变性蛋白在疏水界面上的折叠不仅取决于其氨基酸之间的特异性相互作用及疏水色谱固定相的结构,而且还取决于固定相和流动相之间的协同作用.同时,还提出了高效疏水相互色谱（HPHIC）进行蛋白折叠的机理及其进行蛋白折叠时能实现质量控制的原理.在适当的色谱条件下,HPHIC可使几种变性蛋白一步实现复性及同时纯化.此外,还设计制造出了直径比柱长大得多的实验室型和制备型“变性蛋白复性及同时纯化装置,USRPP”,该“装置”具有完全除去变性剂、使蛋白质复性,与杂蛋白分离及易于回收变性剂的“一石四鸟”功能.该“装置”对变性蛋白的复性和纯化效率与通常使用的长柱相当.在制备规模情况下,该“装置”可以在低压梯度条件下简便、快速、而经济地应用于重组蛋白药物的制备.文中以重组人干扰素-γ为例,说明了制备型“装置”在其复性及同时纯化生产工艺中的应用.

关键词：复性蛋白质蛋白折叠质量控制疏水相互作用色谱纯化生物工程干扰素-γ 固定相

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活性蛋白液相色谱快速分离新方法

科学通报 2008年第5期53卷 614-616页

作者：柯从玉耿信笃西北大学现代分离科学研究所现代分离科学省级重点实验室教育部合成与天然功能分子化学重点实验室西安710069

提出了用一根色谱柱来实现离子交换和疏水色谱快速分离整体蛋白的新方法.在选择合适的固定相、流动相、缓冲液交换方法及二次进样的条件下,在1h内用同一根色谱柱完成了通常用两根色谱柱和在两种流动相条件才能实现的"二维色谱"分离,并... 详细信息

提出了用一根色谱柱来实现离子交换和疏水色谱快速分离整体蛋白的新方法.在选择合适的固定相、流动相、缓冲液交换方法及二次进样的条件下,在1h内用同一根色谱柱完成了通常用两根色谱柱和在两种流动相条件才能实现的"二维色谱"分离,并且能维持蛋白原有的三维和四维分子结构.预计该法能用于未知样品中蛋白的快速预分离,特别是为在蛋白组学研究中,在样品来源极其有限的情况下,进行活性蛋白预分离提供了一种新的解决思路.

关键词：蛋白质组学蛋白预分离二维液相色谱疏水相互作用色谱离子交换色谱

HPHIC固定相对脲变α-糜蛋白酶复性的影响

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分析试验室 2009年第5期28卷 34-37页

作者：刘振岭柯从玉耿信笃新乡医学院化学教研室新乡453003 西北大学现代分离科学研究所西安710069

依据计量置换保留理论所得到的参数lgI,来测定不同构象态α-糜蛋白酶(α-Chy)在两种不同高效疏水相互作用色谱(HPHIC)固定相表面的折叠自由能,发现脲变α-Chy在HPHIC固定相表面获取的折叠自由能比溶液中的高很多,不同HPHIC固定相表面为... 详细信息

依据计量置换保留理论所得到的参数lgI,来测定不同构象态α-糜蛋白酶(α-Chy)在两种不同高效疏水相互作用色谱(HPHIC)固定相表面的折叠自由能,发现脲变α-Chy在HPHIC固定相表面获取的折叠自由能比溶液中的高很多,不同HPHIC固定相表面为脲变α-Chy提供不同的折叠自由能,且都随变性剂脲浓度的增大而增大;通过对不同HPHIC色谱柱后复性α-Chy的比活测定,还发现脲变α-Chy的复性效率与其从固定相表面的折叠自由能有关,同一构象的α-Chy从固定相表面得到的折叠自由能越高越有利于其折叠成天然蛋白质。

关键词：蛋白折叠疏水相互作用色谱计量置换理论 α-糜蛋白酶折叠自由能