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中国酿造 2011年第5期30卷 116-120页

作者：陶林王德良曹健郭立芸邬丽君河南工业大学生物工程学院河南郑州450001 中国食品发酵工业研究院北京100027 中原工学院河南郑州450007 北京燕京啤酒集团公司北京101300

利用蛋白疏水层析色谱法(HIC)从啤酒泡沫中分离疏水性蛋白,研究发现,HIC依次分离的蛋白组分表面疏水性增强的同时,泡沫稳定性随之增强,说明HIC分离得到强疏水性多肽对于啤酒泡沫稳定性具有较明显的积极作用,而弱疏水性多肽的影响效果不... 详细信息

利用蛋白疏水层析色谱法(HIC)从啤酒泡沫中分离疏水性蛋白,研究发现,HIC依次分离的蛋白组分表面疏水性增强的同时,泡沫稳定性随之增强,说明HIC分离得到强疏水性多肽对于啤酒泡沫稳定性具有较明显的积极作用,而弱疏水性多肽的影响效果不明显。此外通过质谱(Mass Spectrometry)鉴定结果显示所得到的疏水性蛋白质为蛋白质Z4,通过对啤酒酿造过程中的关键控制点的跟踪,确定了啤酒酿造过程中,发酵阶段疏水性蛋白质的损失最为严重,对啤酒泡沫质量的影响最大。

关键词：疏水性蛋白质疏水层析色谱法(HIC) Z4蛋白酿造过程

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小鼠肝癌细胞H22疏水性蛋白质组的比较研究

小鼠肝癌细胞H22疏水性蛋白质组的比较研究

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作者：刘秋均泸州医学院

学位级别：硕士

目的:运用蛋白质组和生物信息学研究技术,结合生物质谱技术,对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的疏水性蛋白质组与水溶性蛋白质组进行比较研究,分析鉴定其差异表达的蛋白质,确定疏水性蛋白质在小鼠肝癌细胞H22中的表达变化,为进一步探索疏... 详细信息

目的:运用蛋白质组和生物信息学研究技术,结合生物质谱技术,对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的疏水性蛋白质组与水溶性蛋白质组进行比较研究,分析鉴定其差异表达的蛋白质,确定疏水性蛋白质在小鼠肝癌细胞H22中的表达变化,为进一步探索疏水性蛋白质(包括膜蛋白)在肿瘤细胞发生发展及侵袭转移过程中的作用和地位奠定基础。方法:小鼠肝癌细胞H22按常规方法进行培养,正常小鼠肝细胞以组织块贴壁法培养作为对照组实验材料。小鼠肝癌细胞H22培养至指数生长期后,与对照组肝细胞分别以两种不同的方法进行细胞裂解。第一种为常规的细胞裂解法(裂解液由8 mol/L尿素,1% TBP,4% CHAPS,0.2% Bio-Lyte组成),获得肝癌细胞和肝细胞的水溶性蛋白质。第二种为改良的分步提取裂解法,即以冻融法结合强增溶裂解液(由7mol/L尿素,2 mol/L硫脲,50mmol/L DTT, 4% CHAPS,0.2% Bio-Lyte组成)裂解细胞并分步提取,获得肝癌细胞及肝细胞的疏水性蛋白质。Bradford法测定蛋白质含量,双向电泳分离蛋白质。第一向采用pH 4-7的固相pH梯度(IPG)等电聚焦,第二向采用浓度为10%的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。银染并经凝胶成像系统采集获得双向电泳图谱,根据IPG胶条的pI线性梯度和标准分子量Marker,确定蛋白质斑点的pI和MW,用PDQuest 2D分析软件对实验组和对照组的蛋白质电泳图谱进行差异分析,初步筛选出13个具有差异表达的蛋白质。切取蛋白质斑点,应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)进行检测,获得各蛋白质的肽指纹图谱,结合2-DE图谱中各蛋白质点的pI和MW值,利用Aldente软件进行匹配检索Swiss-Prot数据库,鉴定小鼠肝癌细胞株H22差异表达的疏水性蛋白质。结果:①应用改良的分步提取裂解法所获得的小鼠肝癌细胞H22及正常小鼠肝细胞蛋白质组双向电泳图谱与常规裂解法所获得的双向电泳图谱相比较存在明显差异。②利用质谱技术和生物信息学技术,鉴定了13个与小鼠肝癌细胞H22相关的疏水性蛋白质,其中5个为膜蛋白,其余7个为胞浆或胞核难溶性蛋白。这些蛋白质的生理功能涉及细胞代谢、细胞增殖、细胞信号转导、细胞骨架等。结论:①改良的分步提取裂解法能够从小鼠肝细胞及肝癌细胞中成功分离提取疏水性蛋白质。②应用比较蛋白质组学的研究方法确定了13个与小鼠肝癌细胞H22相关的差异表达的疏水性蛋白质,对进一步探索肿瘤发生发展相关蛋白具有重大意义。

关键词：蛋白质组疏水性蛋白质小鼠肝癌细胞双向电泳生物信息学

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2-DE技术中疏水性和碱性蛋白质的研究进展

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生命科学研究 2004年第3期8卷 207-214页

作者：曹晶谢锦云张丽军陈平梁宋平湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学研究室中国湖南长沙410081

双向凝胶电泳(2-DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的分离.但是它在分离疏水性蛋白质和碱性蛋白质时却遇到了极大的挑战.然而,疏水性与碱性蛋白质在全蛋白质中占相当大的比例,且具有很重要的生物学意义.因而,近年来... 详细信息

双向凝胶电泳(2-DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的分离.但是它在分离疏水性蛋白质和碱性蛋白质时却遇到了极大的挑战.然而,疏水性与碱性蛋白质在全蛋白质中占相当大的比例,且具有很重要的生物学意义.因而,近年来,越来越多的研究者将目标瞄准这些蛋白质,并且取得了一些令人鼓舞的进展:用亚细胞预分离技术,顺序提取法等方法来富集疏水性蛋白质,用一些新的有效的增溶剂如硫脲,ASB-14等来改善疏水性蛋白质的溶解,应用这些技术2-DE可分辨出总平均疏水值达0.80的蛋白质;在碱性蛋白质分离方面,通过等电聚焦预处理,使用窄pH梯度胶条等大大地改善了碱性蛋白质在2-DE中的分离,能分辨出等电点达11.7的蛋白质.现对2-DE技术中疏水性和碱性蛋白质分离的研究进展进行综述.

关键词：蛋白质组学双向凝胶电泳疏水性蛋白质碱性蛋白质

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啤酒泡沬疏水性蛋白及低产蛋白酶A菌株初步研究

啤酒泡沬疏水性蛋白及低产蛋白酶A菌株初步研究

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作者：陶林河南工业大学

学位级别：硕士

啤酒泡沫活性蛋白主要来源于麦芽，具有较强的疏水特性，这些蛋白和一些酒花成分相互作用来稳定啤酒泡沫。研究发现，有几种蛋白质与啤酒泡沫之间有很大的相关性。大量研究结果表明，来自酵母细胞的蛋白酶A可能水解有助于啤酒泡沫稳定... 详细信息

啤酒泡沫活性蛋白主要来源于麦芽，具有较强的疏水特性，这些蛋白和一些酒花成分相互作用来稳定啤酒泡沫。研究发现，有几种蛋白质与啤酒泡沫之间有很大的相关性。大量研究结果表明，来自酵母细胞的蛋白酶A可能水解有助于啤酒泡沫稳定性的蛋白质，导致泡沫蛋白质分子分解，同时产生没有起泡性能的多肽，从而导致最终成品啤酒中泡沫稳定性变弱。研究表明，啤酒中不同种类的蛋白质具有不同的疏水性和表面粘度活性，疏水性蛋白质是啤酒中泡沫稳定性产生的主要原因。本文研究了啤酒中疏水性蛋白质的最佳提取条件，并利用蛋白疏水层析色谱法（HIC）从啤酒泡沫中分离疏水性蛋白。研究发现，HIC所依次分离的蛋白组分，在表面疏水性增强的同时，泡沫稳定性也随之增强，说明HIC分离得到的强疏水性多肽对于啤酒泡沫的稳定性具有较明显的积极作用，而弱疏水性多肽的影响效果不明显。此外，质谱（Mass Spectrometry）鉴定结果显示，所得到的疏水性蛋白质为蛋白质Z4，并建立了啤酒中疏水性蛋白质含量和泡沫稳定性之间的相关性关系。大量研究结果表明，低产蛋白酶A的酵母菌株有利于啤酒泡沫的稳定性，本文以此为依据，进行了低产蛋白酶A菌株的选育，经过一系列筛选后，最终选育出低产蛋白酶A的酵母菌株0002菌株。小试传代试验表明，该菌株可以达到预期的降低蛋白酶A产量、提高啤酒泡沫性能的目标，且对成品酒的质量、风味和口感未造成影响，可以从根本上解决蛋白酶A对啤酒泡沫稳定性的影响。通过选育低产蛋白酶A的酵母菌株，确定了其对于啤酒中疏水性组分的影响，构建了低产蛋白酶A酵母菌种与疏水性蛋白的作用关系。此外，本文还跟踪了啤酒酿造过程中的关键工艺控制点，以分析啤酒酿造过程中的疏水蛋白含量。研究发现，从煮前麦汁到煮沸结束这一工艺过程，疏水蛋白含量下降明显，损失率为8.5%;从煮沸结束到满罐，疏水蛋白含量变化比较平稳;从满罐到贮酒期，疏水蛋白含量出现明显下降，损失率为40.6%。因此得出在啤酒发酵过程中疏水蛋白的损失最为严重这一结论，为提高啤酒泡沫质量的工业应用提供了理论依据。

关键词：疏水性蛋白质疏水层析色谱 Z4蛋白酵母蛋白酶A 泡沫稳定性

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