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略阳乌鸡活性肽的制备及其功能特性研究

略阳乌鸡活性肽的制备及其功能特性研究

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作者：崔林梅陕西理工大学

学位级别：硕士

略阳乌鸡（Lueyang black-bone chicken）的人工养殖以及产业化生产已经趋于成熟,规范化养殖规模大,对其进行深加工利用是目前研究的重点。生物活性肽吸收转化效率较高,功能活性较蛋白质更强。本文以略阳乌鸡鸡肉为原料制备略阳乌鸡活性... 详细信息

略阳乌鸡（Lueyang black-bone chicken）的人工养殖以及产业化生产已经趋于成熟,规范化养殖规模大,对其进行深加工利用是目前研究的重点。生物活性肽吸收转化效率较高,功能活性较蛋白质更强。本文以略阳乌鸡鸡肉为原料制备略阳乌鸡活性肽,对制备工艺进行了优化,并对其稳定性进行了研究,进一步对略阳乌鸡活性肽的亲和超滤分离纯化以及其抗疲劳能力进行研究,主要结论如下:（1）优化略阳乌鸡活性肽的制备工艺,对氨基酸组成进行分析。以水解度和多肽浓度为指标,通过生物信息学法辅助筛选出水解度最高的木瓜蛋白酶,通过木瓜蛋白酶进行单因素、Box-Behnken响应面实验优化得到制备略阳乌鸡活性肽的最佳工艺:温度48.1℃、加酶量0.53 U/kg、液料比1:28、p H 5.9、时间4 h,其多肽浓度为6.375 mg/m L,水解度为24.80%,经验证实验得到的多肽含量和水解度为6.25 mg/m L、24.67%,与响应面实验所得的结果接近。对酶解液进行氨基酸结果分析可得,谷氨酸（Glu）、赖氨酸（Lys）、天冬氨酸（Asp）含量相对较高,共占总氨基酸的17.96%、9.96%和9.44%,必需氨基酸共占总氨基酸含量的40.3%,该氨基酸组成合理,具有较高的营养价值。酶解法制备略阳乌鸡活性肽具有工艺简单、营养价值高的特点,可用于后续的生产加工及产品开发。（2）探讨了略阳乌鸡活性肽的体外抗氧化活性及稳定性。不同浓度略阳乌鸡活性肽和抗氧化活性之间呈正相关,当略阳乌鸡活性肽浓度为10 mg/m L时,羟基自由基清除率为90.83%、ABTS自由基清除率为94.35%;浓度越高,还原力越好。在p H 6.0、温度37℃时、时间4 h后,略阳乌鸡活性肽最稳定;在p H 4.0时起泡性和起泡稳定性最好,起泡性为78.33%,起泡稳定性最好为52.67%;随着p H的增高乳化性越好,乳化稳定性受乳化泡沫高度的影响。略阳乌鸡活性肽的抗氧化和稳定性研究可为产品的研发提供参考价值。（3）通过亲和超滤-液相色谱-质谱联用法对亲和SOD活性肽进行分离、纯化、质谱鉴定以及分子对接。对亲和超滤前后的略阳乌鸡活性肽进行SOD活性分析,分离前后样品的SOD活性分别为12.4 U/m L、27.6 U/m L。通过质谱鉴定出了1666条亲和SOD的活性肽,经过模拟筛选得到了3条活性预测值高、结构稳定性好、无毒、无过敏原的多肽序列（PSADAPMF、DNPGHPF、KPGDPGGP）,3条序列都展现出较好的血脑屏障穿透性和肠道稳定性。分子对接的结果表明,PSADAPMF、DNPGHPF、KPGDPGGP与SOD的结合能分别为-7.6 k J/mol、-6.2 k J/mol、-6.5 k J/mol,均表现出较强的结合能力和稳定性。亲和超滤-液相色谱-质谱联用法联合分子对接有助于快速筛选亲和SOD的靶向活性成分。（4）研究了略阳乌鸡活性肽对气血双虚小鼠的血象及抗疲劳能力的作用效果。实验结果表明,不同浓度略阳乌鸡活性肽对小鼠体重、肝肾指数无显著影响（P>0.05）,能显著延长小鼠的负重游泳时间（P0.05）,能减小气血双虚小鼠的乳酸、尿素氮的浓度（P0.05）,对气血双虚小鼠的血象有一定的改善作用并具有一定的抗疲劳能力。

关键词：略阳乌鸡活性肽工艺优化稳定性分子对接抗疲劳

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