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低温电转联合Sleeping beauty转座子系统增强CAR-t修饰效率

中国细胞生物学学报 2019年第12期41卷 2368-2378页

作者：赵军红郑立群傅雅娟蔡少丽福建师范大学南方生物医学研究中心福州350117 福建省天然免疫生物学重点实验室福州350117

嵌合抗原受体t淋巴细胞(chimeric antigen receptor t cells,CAR-t cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效。CAR-t治疗通过分离病人外周血单个核细胞PBMC,经适当的基因编辑手段表达CAR结构,令t细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,扩增... 详细信息

嵌合抗原受体t淋巴细胞(chimeric antigen receptor t cells,CAR-t cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效。CAR-t治疗通过分离病人外周血单个核细胞PBMC,经适当的基因编辑手段表达CAR结构,令t细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,扩增后过继到体内完成对肿瘤的杀伤。该文主要探索在低温状态将含有睡美人(Sleeping beauty)转座子/转座酶系统的质粒电转进PBMC内表达CD19-CAR制备CAR-t细胞,并添加特定细胞因子进行增殖,并验证CAR表达、细胞活性与杀伤能力。结果表明,转染效率高达58.8%±4.1%,增殖后的CAR-t细胞能够整合并表达CAR基因,在与靶细胞共培养后,表现出与慢病毒制备的CD19-CAR相似的细胞活性和毒性。该文确定了一种基于Sleeping beauty转座子/转座酶和电转制备CAR-t细胞的方法,为临床CAR-t治疗提供了新的思路。

关键词：嵌合抗原受体 CD19 电转T淋巴细胞睡美人转座子慢病毒

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Sleeping Beauty抗CD19-CAR-t细胞系统的建立及电转方法的优化

Sleeping Beauty抗CD19-CAR-T细胞系统的建立及电转方法的优化

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作者：郑立群福建师范大学

学位级别：硕士

嵌合抗原受体重定向 t 淋巴细胞（Chimeric antigen receptor redirected t cells,CAR-t cells）在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效,在临床试验中取得了很高的缓解率并有部分通过了美国FDA的认证。随着临床试验规模扩大,CAR-t治疗... 详细信息

嵌合抗原受体重定向 t 淋巴细胞（Chimeric antigen receptor redirected t cells,CAR-t cells）在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效,在临床试验中取得了很高的缓解率并有部分通过了美国FDA的认证。随着临床试验规模扩大,CAR-t治疗也在其他血液瘤和实体瘤上开展,针对若干类型的恶性肿瘤治疗方面展现了相当的潜力。CAR-t治疗是通过将病人自身PBMC分离,经过适当的基因编辑手段表达CAR结构,令t细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,经过扩增后输回自体完成对肿瘤细胞的杀伤。常规的病毒转导需要繁琐的步骤制备临床用的重组病毒,成本也比较高。电转的方式成本低廉操作方便,但该法制备CAR-t细胞的得率和效率通常不高,需要依靠人工抗原呈递细胞（Aartificial antigene presenting cells,aAPC）细胞进行多轮定向扩增。因此,更加需求一种便捷高效低成本的转染方法。本课题优化了一个用新鲜PBMC制备CAR-t细胞的电转方法。包括在冰浴条件下以极高电压将含有Sleeping beauty转座子/转座酶系统的质粒转染进PBMC内,表达CD19-CAR,并添加特定细胞因子进行增殖。增殖过后的CAR-t细胞能够整合并表达目的CAR基因,并且在与靶细胞混合培养后,能够表现出与通过慢病毒制备的CD19-CAR相似的细胞活性和毒性。最终,我们确定了一套基于Sleeping beauty转座子/转座酶和电转的系统性方法制备CAR-t细胞,为在临床环境下进行CAR-t治疗试验提供了替代方法。

关键词：嵌合抗原受体 CD19 电转T淋巴细胞 Sleeping beauty 慢病毒

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