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基因脉冲导入仪的研制

天津工业大学学报 2002年第2期21卷 9-11页

作者：徐宝强袁其平童峥嵘王德会刘建民吕联荣天津理工学院光电信息与电子工程系天津300191

针对基因转移技术的发展 ,开发了 L N- 10 1基因脉冲导入仪 ,介绍了其组成基本原理及实现的方法 .这一仪器的输出脉冲电压最大值为 2 5 0 0 V,电流最大值为 16 0 A,其转染率是用化学方法所得不到的 .该仪器具有高效率、低毒性、普适性... 详细信息

针对基因转移技术的发展 ,开发了 L N- 10 1基因脉冲导入仪 ,介绍了其组成基本原理及实现的方法 .这一仪器的输出脉冲电压最大值为 2 5 0 0 V,电流最大值为 16 0 A,其转染率是用化学方法所得不到的 .该仪器具有高效率、低毒性、普适性和可控性 ,能够对多种类型的细胞实行基因导入 .

关键词：基因脉冲导入仪电穿孔生物技术转染率组成原理实现方法细胞

siRNA干扰ffh、htrA基因对变形链球菌耐氟菌株毒力因子的影响

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siRNA干扰ffh、htrA基因对变形链球菌耐氟菌株毒力因子的影响

2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议

作者：张桐菲张志民吉林大学口腔医院

目的:变形链球菌是致龋能力最强的龋病致病菌。耐酸性和产酸性是变形链球菌生存的一个重要因素。研究表明:ffh、htrA基因的表达与变形链球菌的产酸,耐酸及生物膜的形成密切相关。本研究通过靶向分别沉默ffh、htrA基因后对比变形链球菌... 详细信息

目的:变形链球菌是致龋能力最强的龋病致病菌。耐酸性和产酸性是变形链球菌生存的一个重要因素。研究表明:ffh、htrA基因的表达与变形链球菌的产酸,耐酸及生物膜的形成密切相关。本研究通过靶向分别沉默ffh、htrA基因后对比变形链球菌在强酸弱酸及各种糖的作用下,其耐氟菌株的产酸性、耐酸性及生物膜的形成等生物学性状的影响。方法:将变形链球菌放入以50ug/ml NaF递加直到在含有1000ug/ml NaF的BHI固体培养基中获得耐氟菌落。将鉴定后的UA159-FR悬液与siRNA oligo按2:1比例混合加入电转杯中电极选择适合电极。用real time-PCR检测转染效果并筛选siRNA序列。将UA159-FR培养在以0.5为间隔,配置pH从3.5至7.0的培养液中进行耐酸检测收集数据并分析;将UA159-FR培养在含有5%不同糖类的BHI培养液中进行产酸检测收集数据并分析;将UA159-FR培养在放有盖玻片的孔板中观察生物膜的形成。结果:siRNA oligo在UA159-FR中成功干扰ffh、htrA基因表达。应用real-time PCR技术对siRNA序列进行筛选。对干扰后的UAl59-FR进行产耐酸检测,干扰htrA基因的数据优于干扰ffh基因的数据。在生物膜构建过程中,干扰htrA基因的UA159-FR没能观察到类似生物膜结构;干扰ffh基因的UA159-FR可观察到类似生物膜结构。结论:成功将siRNA序列电穿孔转染进入变形链球菌耐氟菌株当中,成功分别干扰变形链球菌耐氟菌株的ffh、htrA基因的表达,并成功检测干扰后功能,得出产酸耐酸和生物膜的样本及相关检测数据并分析。

关键词： siRNA htrA基因 ffh基因变形链球菌电穿孔生物膜

来源： cnki会议评论

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U937单核细胞转染中几种不同方法的比较

U937单核细胞转染中几种不同方法的比较

第十次中国中西医结合学会心血管病学术大会暨第五次江西省...

作者：潘俊杰施海明罗心平李剑梁旺张进马端复旦大学附属华山医院心内科复旦大学上海医学院分子生物学教育部重点实验室

目的采用不同质粒转染方法介导重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒转染U937单核细胞,以获得较高转染效率的方法。方法分别采用电穿孔法、Effectene转染试剂、Lipofectamine2000、电穿孔+Effectene转染试剂、电穿孔+Lipofectamine2000及HilyMax等不同方法介导进行质粒转染,测定不同方法的转染效率、目的基因mRNA表达水平及其对细胞活力的影响。结果电穿孔+Effectene转染试剂组、电穿孔+Lipofectamine2000组及HilyMax组转染效率及目的基因mRNA较高,且HilyMax组对细胞活力影响较小。结论成功地将重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒体外转染入U937单核细胞中,通过优化转染方法提高了转染效率,降低对细胞活力的影响,为下一步基因治疗提供了实验基础。

关键词： U937单核细胞转染效率电穿孔脂质体

来源： cnki会议评论

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电脉冲化学疗法治疗肿瘤研究进展

国外医学：肿瘤学分册 2005年第4期32卷 283-285页

作者：罗小东胡丽娜重庆医科大学第二附属医院妇产科 400010

近年来,电脉冲化学疗法(EIC)作为一种新的肿瘤治疗方法已在临床试验中取得了显著效果,它较传统疗法有诸多优点。现综述国内外EIC治疗肿瘤以及在动物、临床试验方面的研究进展,并介绍新提出的能量可控陡脉冲疗法(ECSP)的初期研究成果。

关键词：电刺激疗法电穿孔综合疗法肿瘤

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抗肿瘤电化学疗法新进展

国外医学（肿瘤学分册） 1998年第3期25卷 139-142页

作者：肖自力上海铁道大学基础医学院 200070

新型电化学疗法是一种将电穿孔技术和化学药物治疗相结合的治疗肿瘤方法,本文综述了电化学疗法的原理、方法、动物实验、临床试验及安全性试验等。实验表明,新型电化学疗法可望发展为临床治疗某些肿瘤的安全而有效的新方法之一。

关键词：电化学疗法抗肿瘤电脉冲电穿孔博莱霉素

真核表达载体pVAX1-mSLC的构建及在COS-7细胞中的表达

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山东大学学报（医学版） 2005年第9期43卷 777-780页

作者：侯丽马金龙王来城张捷焦玉莲马春燕崔彬赵跃然山东省医学科学院基础医学研究所山东济南250062 山东大学山东省立医院科研中心山东济南250021

目的:构建小鼠次级淋巴组织趋化因子(mSLC)高效真核细胞表达载体pVAX1-mSLC。方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切重组克隆pMD-mSLC,胶回收约410bp的SLC基因片段,以亚克隆法构建于真核表达载体pVAX1的相应酶切位点。转化后进行菌落PCR分析和Hin... 详细信息

目的:构建小鼠次级淋巴组织趋化因子(mSLC)高效真核细胞表达载体pVAX1-mSLC。方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切重组克隆pMD-mSLC,胶回收约410bp的SLC基因片段,以亚克隆法构建于真核表达载体pVAX1的相应酶切位点。转化后进行菌落PCR分析和HinDⅢ酶切鉴定。阳性克隆提取质粒,体外电穿孔法转染COS-7细胞,用Westernblot检测转染细胞中mSLC的瞬时表达。结果:菌落PCR和HinDⅢ酶切鉴定证实,mSLC基因片段正确插入到真核表达载体pVAX1中。Westernblot检测表明,以重组质粒pVAX1-mSLC转染的COS-7细胞能表达mSLC,表达产物的相对分子量同预期的结果相一致。结论:成功地构建小鼠SLC基因的真核表达质粒pVAX1-mSLC,用它转染COS-7细胞后,能瞬时表达mSLC,为下一步mSLC的肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

关键词：次级淋巴组织趋化因子真核表达 COS-7细胞电穿孔

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电化学疗法用于小鼠S-180治疗的研究

生命科学仪器 2007年第8期5卷 46-49页

作者：童峥嵘龚元元徐宝强孙云赵军发袁其平孙倩王世贤天津理工大学电子信息与通信工程学院天津市人民医院天津300121 天津市医药科学研究所天津300070

电化学疗法是将电穿孔与化学药物相结合治疗肿瘤的一种新方法,电穿孔可通过脉冲电场瞬时提高细胞膜的通透性使药物等外源物质进入细胞,增强细胞对药物的吸收能力,从而提高治疗肿瘤的效果。我们采用LN-101基因脉冲导入仪及配套的针电极,... 详细信息

电化学疗法是将电穿孔与化学药物相结合治疗肿瘤的一种新方法,电穿孔可通过脉冲电场瞬时提高细胞膜的通透性使药物等外源物质进入细胞,增强细胞对药物的吸收能力,从而提高治疗肿瘤的效果。我们采用LN-101基因脉冲导入仪及配套的针电极,通过电化学疗法对接种有S-180的小鼠进行对比实验。结果应用抗癌药物博莱霉素(BLM)的电化学疗法(ECT)组的抑瘤率为70.4%,与传统的治疗方法相比抑瘤率显著提高。

关键词：电化学疗法电穿孔肿瘤治疗针电极

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经皮给药产品开发现状

中医外治杂志 2005年第1期14卷 3-5页

作者：梁文权胡巧红梁秉文朱庆文浙江大学药学院浙江杭州310031 北京大学世佳研究中心北京100084 北京中医药大学北京100029

直到二十世纪初,人们仍认为皮肤是微生物、化学物质和药物不可透过的屏障,一次偶然的发现,二甲基亚砜与皮肤接触后可被吸收进入体循环,才使上述观点得以改变.1924年,Rein提出皮肤最外面的角质层是药物经皮渗透的最主要的阻力,Blank对该... 详细信息

直到二十世纪初,人们仍认为皮肤是微生物、化学物质和药物不可透过的屏障,一次偶然的发现,二甲基亚砜与皮肤接触后可被吸收进入体循环,才使上述观点得以改变.1924年,Rein提出皮肤最外面的角质层是药物经皮渗透的最主要的阻力,Blank对该假说作了进一步的证实.

关键词：经皮给药离子导入电穿孔超声波微针

小鼠pVAX1-CIRP真核表达载体的构建及其在隐睾睾丸组织中的表达

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现代实用医学 2012年第6期24卷 610-613,F0003页

作者：周克文郑新民温海涛宁波市泌尿肾病医院宁波315100 武汉大学中南医院

目的构建小鼠pVAX1-CIRP真核表达载体,并观察电穿孔法导入隐睾小鼠睾丸组织后CIRP基因的表达情况。方法 pBluescript SK(-)-CIRP质粒经EcoR I和Pst I双酶切后,连接到pVAX1载体对应的酶切位点,构建pVAX1-CIRP真核表达载体。经酶切及测序... 详细信息

目的构建小鼠pVAX1-CIRP真核表达载体,并观察电穿孔法导入隐睾小鼠睾丸组织后CIRP基因的表达情况。方法 pBluescript SK(-)-CIRP质粒经EcoR I和Pst I双酶切后,连接到pVAX1载体对应的酶切位点,构建pVAX1-CIRP真核表达载体。经酶切及测序鉴定正确后,用电穿孔的方法把pVAX1-CIRP真核表达载体导入到隐睾小鼠睾丸组织中,对照组导入空载的pVAX1,7 d和10 d后取材,应用RT-PCR和Western Blot的方法鉴定CIRP mRNA和蛋白的表达情况。结果经酶切及测序鉴定构建的pVAX1-CIRP真核表达载体正确。将其导入隐睾小鼠睾丸组织后7d,CIRP mRNA和蛋白的表达量较对照组均明显升高,差异均有统计学意义(均电穿孔后10d CIRP的水平与7 d时差异无统计学意义(>0.05)。结论成功构建小鼠pVAX1-CIRP真核表达载体,导入隐睾小鼠睾丸组织后能够正常的转录和表达,为进一步研究CIRP基因在精子发生中的作用及男性不育的发病机制奠定基础。

关键词： CIRP pVAX1 隐睾电穿孔