检索结果-南通市图书馆

电穿孔介导的基因治疗对下颌骨牵引成骨影响的初步研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

电穿孔介导的基因治疗对下颌骨牵引成骨影响的初步研究

作者：黎德平泸州医学院

学位级别：硕士

牵引成骨技术(distraction osteogenesis,DO)是通过将骨段逐渐牵引获得新骨的一种新方法,其最大优点是避免了植骨和供区并发症,同时可牵引延长软组织。自1992年McCarthy首次将DO技术用于下颌骨畸形患者的治疗以来, DO技术已广泛用于颅... 详细信息

牵引成骨技术(distraction osteogenesis,DO)是通过将骨段逐渐牵引获得新骨的一种新方法,其最大优点是避免了植骨和供区并发症,同时可牵引延长软组织。自1992年McCarthy首次将DO技术用于下颌骨畸形患者的治疗以来, DO技术已广泛用于颅颌面骨严重发育不足畸形及骨缺损的整复治疗。然而,DO的某些并发症(如骨再生不良、延迟愈合、不愈合),特别是其较长的疗程及牵引装置长时间留置面部或口腔内所引发的各种问题(如固定螺钉松脱、伤口感染、骨折等)成为临床应用和推广该项新技术的“瓶颈”和主要障碍。因此,医生和病人都欢迎新的技术来加速治疗进程。本研究以新西兰大白兔双侧下颌骨牵引为动物模型,着眼于利用电穿孔技术将重组质粒转染下颌骨牵引区,试图利用基因治疗的方法促进下颌骨牵引成骨,进行了一系列的探索。首先观察了电穿孔技术介导的pIRES-hVEGF165-EGFP转染对下颌骨DO过程中早期血管生成的影响,然后在此模型基础上进行了电穿孔技术介导的pIRES-hBMP2-VEGF165体内转染,观察其对下颌骨DO成骨的影响。简述如下: 第一部分:电穿孔介导的pIRES-hVEGF165-EGFP对牵引成骨过程中早期血管生成的影响目的:探索电穿孔介导的重组质粒pIRES-hVEGF165-EGFP转染对下颌骨DO过程中早期血管生成的影响,为下颌骨牵引成骨的深入研究奠定基础。方法:选用新西兰大白兔30只,沿双侧下颌骨边缘切开皮肤,钝性分离附着下颌骨的肌肉,暴露下颌骨。于下颌骨颏孔处,用微型电动钻截开下颌骨,于下颌骨断开处安放2cm牵引器,固定,逐层缝合组织。于术后3天开始牵引,每天0.8mm ,连续牵引7天后,将兔随机分为3组:A组:质粒+电脉冲组,B组:质粒组, C组:生理盐水组。A、C组均施加电脉冲刺激)。C组织注射重组质粒而不施加电刺激。各组分别于注射后1天、3天、7天、14天处死动物,切取牵引区组织约0.4cm×0.4cm大小,进行组织学检查、电镜观察,CD34免疫组织化学染色进行微血管密度(microvessel density, MVD)检测。结果:电镜观察发现,A、B组血管内皮细胞呈增殖活跃状态:细胞呈梭状,具有多个突起,基底膜完整,胞浆内具有丰富的线粒体呈椭圆形或圆形;C组多数血管内皮细胞部分呈现退变和凋亡早期改变。免疫组化染色发现,转染后第1天血管壁内皮细胞浆CD34表达较弱;第34天,牵引区肉芽组织血管内皮细胞均出现CD34阳性表达。B组CD34阳性表达较C组强,A组CD34阳性表达较B组强,C组最弱(P电穿孔的A组、C组和未施加电穿孔的B组,A组、B组的CD34表达持续阳性且呈上升趋势,而C组CD34阳性表达维持在第1天CD34阳性表达水平上平稳波动。结论:电脉冲介导的pIRES-hVEGF165-EGFP重组质粒体内转染能够促进牵引区早期微血管的生成,使局部血管增生、渗入,增加骨断端的血流量。提示其有刺激骨基质合成和诱导细胞增殖分化等活性功能,从而对调节和促进骨的生长和修复过程具有重要作用。第二部分:电穿孔介导的基因治疗对下颌骨牵引成骨影响的初步研究目的:探索电穿孔介导的基因治疗对下颌骨DO过程中牵引间隙新骨生成的影响,从而为促进下颌骨DO新骨生成,缩短牵引周期,减少并发症提供新思路。方法:选用新西兰大白兔50只,沿双侧下颌骨边缘切开皮肤,钝性分离附着下颌骨的肌肉,暴露下颌骨。于下颌骨颏孔处,用微型电动钻截开下颌骨,于下颌骨断开处安放2cm牵引器,固定,逐层缝合组织。于术后3天开始牵引,每天0.8mm ,连续牵引7天后,将兔随机分为5组:A组:在牵引区注射2μg(0.1μg/μl)重组质粒pIRES-hVEGF165-hBMP2。B组:在牵引区注射2μg ( 0.1μg/μl )重组质粒pIRES-hBMP2。C组:在牵引区注射2μg(0.1μg/μl)重组质粒pIRES-hVEGF165。D组:在牵引区注射2μg(0.1μg/μl)空质粒pIRES。E组:在牵引区注射相同剂量的生理盐水。A、B、C、D、E组均施加电穿孔刺激(电脉冲参数:电压300V,频率0.2Hz,平均脉宽2ms,6个脉冲,3个脉冲后更换正负极)。各组分别于固定期第1、2、4、8周行X线及QCT检查。选整个牵张间隙新生骨痂部分为兴趣区(regions of interest, ROI),测定骨密度。然后处死动物,取材测量牵引区新生骨的三点抗压强度;牵引区组织切片HE染色进行组织学检查和形态计量学分析。结果:A、B、C组各时点新生骨痂密度明显高于D、E组;各时点新生骨的三点抗压强度明显高于D、E组;组织学检查和形态计量学分析发现,A、B、C组与D、E组比较,间隙内有更多的新生血管、成骨细胞和间充质细胞等成分,新生骨量明显高于后者;新生骨小梁的宽度仍明显优于D、E组

关键词：电穿孔基因治疗下颌骨新骨生成牵引成骨

脉冲电场诱导细胞内外膜电穿孔模型与跨膜电位的仿真

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国电机工程学报 2006年第13期26卷 123-128页

作者：姚陈果李成祥孙才新米彦莫登斌廖瑞金重庆大学电气工程学院高电压与电工新技术教育部重点实验室重庆市沙坪坝区400044

基于经典的球形单细胞3层介电模型,同时考虑细胞核对跨膜电位的影响,提出了更为合理和接近实际的球形单细胞的多层介电模型,给出了稳恒电场和任意时变脉冲电场作用下细胞膜和核膜跨膜电位的计算方法。仿真结果表明:当脉宽减小时核膜跨... 详细信息

基于经典的球形单细胞3层介电模型,同时考虑细胞核对跨膜电位的影响,提出了更为合理和接近实际的球形单细胞的多层介电模型,给出了稳恒电场和任意时变脉冲电场作用下细胞膜和核膜跨膜电位的计算方法。仿真结果表明:当脉宽减小时核膜跨膜电位增加,而脉宽增大时细胞膜跨膜电位增强;当脉宽在100-500ns范围时能有效实现肿瘤细胞膜和核膜电穿孔,同时不影响正常细胞。计算结果与实验吻合得很好,为肿瘤的电化学疗法和基因疗法的临床应用提供了理论指导。

关键词：脉冲电场细胞内外膜跨膜电位电穿孔模型仿真

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

经皮给药电穿孔仪的性能分析

仪器仪表学报 2008年第1期29卷 16-20页

作者：应磊包家立浙江大学医学院浙江省生物电磁学重点实验室杭州310058

本文分析了一种经皮给药电穿孔仪的性能。在该仪器中,电压发生器将12 V的直流电源电压提升到400 V,并对4个蓄能电容2.2μF、22μF、47μF和100μF充电。在脉冲控制器的控制下,蓄能电容通过Ag-AgC l电极向皮肤放电产生指数衰减脉冲电压... 详细信息

本文分析了一种经皮给药电穿孔仪的性能。在该仪器中,电压发生器将12 V的直流电源电压提升到400 V,并对4个蓄能电容2.2μF、22μF、47μF和100μF充电。在脉冲控制器的控制下,蓄能电容通过Ag-AgC l电极向皮肤放电产生指数衰减脉冲电压。记录了4种电容器放电的脉冲电压,结果表明:当截断系数ε≤1/5,可以获得完整的指数衰减脉冲,并且皮肤电阻为3.57±0.66 kΩ。ε受经皮能量ES和脉冲选择的制约,通过设计并行电阻RI和蓄能电容C,可以使蓄能电容释放的能量效率η最高,ε最小。

关键词：经皮给药电穿孔截断系数经皮能量脉冲选择

电穿孔介导的基因治疗兔下颌骨牵引成骨模型建立与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

电穿孔介导的基因治疗兔下颌骨牵引成骨模型建立与鉴定

作者：李盛华泸州医学院

学位级别：硕士

牵引成骨自1905年由Codivilla首先用于矫形外科,后由Ilizarov系统发展、推广治疗长骨短小畸形,1992年由McCarthy应用于颅颌面外科临床。目前已应用于颅面部各部位,但牵引成骨的某些局限性如牵引速度受限、治疗周期长、牵引过快过长导致... 详细信息

牵引成骨自1905年由Codivilla首先用于矫形外科,后由Ilizarov系统发展、推广治疗长骨短小畸形,1992年由McCarthy应用于颅颌面外科临床。目前已应用于颅面部各部位,但牵引成骨的某些局限性如牵引速度受限、治疗周期长、牵引过快过长导致新骨形成不良等问题限制了其在临床上的进一步推广应用。因此,寻找一种加速新骨形成、缩短牵引成骨治疗周期的方法必将使病人受益。本研究着眼于利用电穿孔技术将重组质粒转染下颌骨牵引区,试图利用基因治疗的方法促进下颌骨牵引成骨,进行了一系列的探索。首先建立兔双侧下颌骨牵引成骨的动物模型,然后在此模型基础上进行了电穿孔技术(electroporation)介导的基因体内转染,目的基因的表达检测。简述如下: 第一部分:兔双侧下颌骨牵引成骨模型的建立目的:建立具有良好可行性及可重复性的兔双侧下颌牵引成骨模型,为下颌骨牵引成骨的深入研究奠定基础。方法:选用20只成年新西兰大白兔,随机分为5组,每组4只,在下颌体近下颌角处全层截断下颌骨,用兔下颌骨专用牵引器固定,经过3天潜伏期,以0.8mm/d速度牵引,连续10天。分别在潜伏期末、牵引结束、固定期第2周、第4周、第8周行X线、3dCT检查后处死动物,切取标本行组织学观察。结果:实验动物全部耐受实验,除一例伤口感染外无其他并发症。牵引装置足够稳定,产生并维持了所需的牵引距离。全部动物的下颌骨被成功延长,牵引间隙逐渐被新生骨组织充填。结论:以兔下颌骨建立牵引成骨模型经济,有良好的可行性和可重复性。第二部分:电穿孔介导的基因治疗兔下颌骨牵引成骨模型建立与鉴定目的:探讨电穿孔介导的重组质粒体内转染兔下颌骨牵引成骨的可行性并给予鉴定。方法:取新西兰大白兔30只,沿双侧下颌骨边缘切开皮肤,钝性分离附着下颌骨的肌肉,暴露下颌骨。于下颌骨颏孔处,用微型电动钻截开下颌骨,于下颌骨断开处安放2cm牵引器,固定,逐层缝合组织。于术后3天开始牵引,每天0.8mm,连续牵引10天后,将兔随机分为3组:A组:质粒+电脉冲组,B组:质粒组,C组:生理盐水组。A、C组均施加电脉冲刺激。B组只注射重组质粒而不施加电刺激。各组分别于注射后3小时、1天、3天、7天、14天处死动物,切取牵引区组织约0.4cm×0.4cm大小,立即行冰冻切片检查,用荧光显微镜观察GFP蛋白表达情况,从而检测外源基因的表达。检测兔血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和心、肝、肾组织学检查。结果:A组转染新西兰大白兔,3小时可观察到绿色荧光蛋白的表达,1天时增强,3天时表达最强,其后开始逐渐下降,7天后表达减少,14天仍可观察到微弱荧光。B组的表达时限与A组相同,但各时相点的表达强度明显弱于A组,C组在各时间段均未观察到绿色荧光蛋白的表达。3组肝肾功能指标两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电穿孔介导的带有荧光标记重组质粒体内转染能够在兔下颌骨牵引区组织内表达,并且电穿孔能明显提高重组质粒的体内转染效率,说明电穿孔介导的重组质粒体内转染兔下颌骨牵引成骨的动物模型是可行的,用于体内实验是安全的。

关键词：电穿孔基因治疗牵引成骨兔动物模型

结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

吉林大学学报（医学版） 2009年第2期35卷 271-275页

作者：杨蕾霍锐卜丽梅杜珍武邸军张桂珍吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130033 吉林大学中日联谊医院镜检科吉林大学药学院基因工程教研室吉林长春13002 吉林大学第一医院干部病房吉林长春130021 吉林省人民医院病理科吉林长春130021

目的:探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞(mDCs)的转染效率及对树突状细胞(DCs)特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法:用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素... 详细信息

目的:探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞(mDCs)的转染效率及对树突状细胞(DCs)特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法:用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)将人外周血单核细胞(PBMC)诱导成未成熟树突状细胞(imDCs),肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)作用24h刺激其成熟。实验设为imDCs组和mDCs组。Trizol法提取特异表达癌胚抗原(CEA)的结肠癌细胞SW480总RNA,电穿孔法将总RNA转染mDCs,设为RNA转染DCs组。流式细胞术检测各组细胞表面分子标志变化和转染DCs组的CEA蛋白表达情况。ELISA法检测各组细胞IL-12分泌水平。结果:rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α能将PBMC诱导成具有典型毛刺样突起形态学特征的DCs。imDCs组DCs表面CD1a表达呈阳性,CD80弱阳性,CD83阴性。mDCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。RNA转染DCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。总RNA转染mDCs后4h检测到CEA蛋白表达。mDCs组、RNA转染DCs组IL-12分泌量与imDCs组比较均显著升高(P0.05)。结论:结肠癌细胞总RNA可通过电穿孔法转染mDCs并表达CEA蛋白,电穿孔不改变mDCs的表面分子特征及功能。

关键词：树突细胞电穿孔 RNA

电穿孔法介导转染老年人成纤维细胞参数的优化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国卫生检验杂志 2015年第23期25卷 3985-3987页

作者：王雅珍杨舟鑫徐伟红吕远栋毛根祥浙江医院浙江省老年医学重点实验室浙江省老年医学研究所浙江杭州310013

目的探究采用电穿孔法将质粒pGenesil-1(简称p G)转染老年人成纤维细胞,从中寻找最佳的参数。方法采用电穿孔法将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒p G转染老年人成纤维细胞。荧光显微镜下观察EGFP表达并测定转染效... 详细信息

目的探究采用电穿孔法将质粒pGenesil-1(简称p G)转染老年人成纤维细胞,从中寻找最佳的参数。方法采用电穿孔法将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒p G转染老年人成纤维细胞。荧光显微镜下观察EGFP表达并测定转染效率、细胞存活率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果本实验室电穿孔法介导的老年人成纤维细胞转染的最佳电转条件:电压:240 V;电容:750μF;DNA剂量:8μg。48 h后电穿孔法的转染率接近30%。结论用电穿孔法将质粒pG稳定转染老年人成纤维细胞耗时短,有利于在体外对老年人成纤维细胞进行后续实验。

关键词：老年人成纤维细胞电穿孔

电穿孔与脂质体lipofectamine转染miR-218进入肝癌细胞效率的比较

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代肿瘤医学 2015年第24期23卷 3542-3544页

作者：蔡磊李艳郭曼连肖杨学文王文斌第四军医大学西京消化病医院陕西西安710032 西北妇女儿童医院麻醉科陕西西安710061

目的:比较采用电穿孔和脂质体lipofectamine两种方法转染人肝癌细胞的效率优劣。方法:分别采用电穿孔和脂质体转染miR-218进入人肝癌细胞Hep G2,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞仪、Tunel检测等方法比较两种方法的转染后对人肝癌细... 详细信息

目的:比较采用电穿孔和脂质体lipofectamine两种方法转染人肝癌细胞的效率优劣。方法:分别采用电穿孔和脂质体转染miR-218进入人肝癌细胞Hep G2,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞仪、Tunel检测等方法比较两种方法的转染后对人肝癌细胞的影响。结果:采用两种方法都可以成功将miR-218转染进人肝癌细胞Hep G2中,降低了Hep G2中miR-218靶基因RNA编辑酶ADAR1的表达,使得细胞凋亡增加,但电穿孔转染组效率更高。结论:电穿孔转染是一种安全、高效的转染方法,值得推广。

关键词：电穿孔脂质体lipofectamine 转染人肝癌细胞HepG2 ADAR1 miR-218

白介素12真核表达质粒及电穿孔对新城疫F基因DNA疫苗的免疫增强作用研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

白介素12真核表达质粒及电穿孔对新城疫F基因DNA疫苗的免疫增强作...

作者：李艳玲华南农业大学

学位级别：硕士

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种高度接触性、高死亡的禽类传染病,是危害养禽业的重要疫病。随着近几年基因Ⅶ型毒株的流行,使用传统灭活苗和弱毒苗往往不能取得理想的免疫效果。因... 详细信息

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种高度接触性、高死亡的禽类传染病,是危害养禽业的重要疫病。随着近几年基因Ⅶ型毒株的流行,使用传统灭活苗和弱毒苗往往不能取得理想的免疫效果。因此,开展新城疫基因工程疫苗的研究具有重要的意义。DNA疫苗被称为“第三代疫苗”,能够刺激机体同时产生体液免疫和细胞免疫反应,而且持续时间长,是最具有潜力的基因工程苗之一。为了深入研究新城疫DNA疫苗,本研究利用含β-actin启动子和CMV增强子的载体质粒pCAGGS成功构建了真核表达质粒pCAG-F和pCAG-IL12,通过电穿孔导入的方式将质粒输送到动物体内,研究电穿孔免疫方式和鸡IL12重组表达质粒共免疫方式对pCAG-F DNA疫苗免疫原性的增强作用。首先,以基因Ⅶ型新城疫病毒CHICKEN/CH/GD/GM-03作为F基因的供体,在上游引入Kozak序列,构建出pCAG-F真核表达质粒,分别以电穿孔或者普通肌肉注射的方式免疫SPF鸡群,通过检测机体的体液免疫和细胞免疫应答水平,综合评价电穿孔技术对新城疫DNA疫苗免疫原性的增强作用,并通过免疫保护试验对疫苗效果进行评估。血清抗体中和试验结果显示:在二免后2周pCAG-F/EP组的针对NDV GM株的中和抗体滴度高于pCAG-F/IM组。MTT法检测免疫鸡外周血T淋巴细胞增殖试验,结果显示:pCAG-F/IM组和EP组T淋巴细胞对CoA的刺激均有明显的反应性。二免后14 d,pCAG-F/IM组T细胞CoA刺激的OD值和对照组相比差异显著(P电穿孔的免疫方式能够显著增强新城疫F基因DNA疫苗的体液免疫和细胞免疫应答水平。二免后14 d进行新城疫病毒强毒攻击,pCAG-F/IM组存活率为90%,表明F基因作为新城疫基因的免疫原基因具有可行性。pCAG-F/EP组存活率为100%,说明电穿孔的免疫方式能够增强pCAG-F的攻毒保护效果。拭子病毒分离的结果表明,电穿孔的免疫方式能够降低排毒率和缩短排毒时长。其次,构建表达鸡源IL-12的真核表达质粒,在电穿孔技术的基础上,进一步探讨分子佐剂IL-12对新城疫F基因DNA疫苗的免疫增强作用。血清中和抗体试验结果显示:在三免后2周pCAG-F+pCAG-IL12/EP组和pCAG-F/EP组相比,中和抗体差异极显著(P电穿孔基因导入技术和使用pCAG-IL12质粒作为佐剂均对新城疫pCAG-F DNA疫苗的免疫效果的影响,为新一代新城疫DNA疫苗的研制提供了新的思路和方向。

关键词：新城疫 DNA疫苗 F基因电穿孔白介素12

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物组织电穿孔中的热效应研究

工程热物理学报 2006年第1期27卷 118-120页

作者：邓中山刘静中国科学院理化技术研究所低温中心北京100080

本文对生物组织电穿孔中的热效应问题进行了计算研究。结果表明生物组织电穿孔过程中,选用不当的脉冲电压参数,会对组织造成严重的热损伤。若采用相同的烧伤阈值来描述热损伤范围,则相同电脉冲参数条件下在体组织比离体组织受到的热损... 详细信息

本文对生物组织电穿孔中的热效应问题进行了计算研究。结果表明生物组织电穿孔过程中,选用不当的脉冲电压参数,会对组织造成严重的热损伤。若采用相同的烧伤阈值来描述热损伤范围,则相同电脉冲参数条件下在体组织比离体组织受到的热损伤更大。

关键词：生物组织电穿孔热效应热损伤