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人参大片段DNA C07D9转化日本灵芝的研究

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人参大片段DNA C07D9转化日本灵芝的研究

作者：纪东辉吉林农业大学

学位级别：硕士

人参(Panax ginseng C.A.Mey.)为五加科(AraLiaceaae)人参属多年生草本植物,具有极好的药用价值。人参皂苷是其重要成分之一。灵芝Ganoderma lucidum (Curtis.) P.Karst.为担子菌纲、多孔菌科、灵芝属的大型丝状真菌,是我国食药用菌中... 详细信息

人参(Panax ginseng C.A.Mey.)为五加科(AraLiaceaae)人参属多年生草本植物,具有极好的药用价值。人参皂苷是其重要成分之一。灵芝Ganoderma lucidum (Curtis.) P.Karst.为担子菌纲、多孔菌科、灵芝属的大型丝状真菌,是我国食药用菌中的珍品。灵芝酸和灵芝多糖是其重要成分。本实验以灵芝原生质体为受体,通过电击转化法将人参大片段DNA C07D9转移到受体中,以期构建人参大片段DNA转化灵芝的遗传转化体系,为灵芝种质资源创新奠定理论与技术基础。 1.灵芝原生质体制备及再生最优条件为：溶壁酶浓度2%,菌龄5d,酶解温度31℃,酶解时间2.5h,酶液pH值5.5,渗透压稳定剂为0.6M甘露醇,在MYG固体培养基上再生。 2.电击转化最优条件为：电击间距：2mm,电压：1200V,原生质体体积：80gL,电介质为甘露醇,DNA C07D9体积：10μL。 3.通过对转化菌株的PCR及Southern Blot检测,证明转化成功。 4.通过对生长状态的观察以及生长曲线的测定,转化子生长较为缓慢。 5.通过对灵芝酸的比较,转化子灵芝酸含量相对略低。 6.通过对灵芝粗多糖的提取,表明抗性转化菌株多糖含量没有变化。 7.通过对灵芝纤维素酶活力进行测定,转化子纤维素酶活力略有下降。

关键词：人参大片段DNA C07D9 灵芝原生质体电击法转化

人参大片段DNA（100kb）转化灵芝的研究

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人参大片段DNA（100kb）转化灵芝的研究

作者：逄春梅吉林农业大学

学位级别：硕士

人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Meyer干燥的根和根茎,是我国名贵的中药材,被称为“百草之王”。人参具有“主补五脏,安精神,定魂魄,明目,开心益智,轻身延年”的药理作用。人参化学成分复杂,其中,人参皂苷被认为是人参的主要活... 详细信息

人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Meyer干燥的根和根茎,是我国名贵的中药材,被称为“百草之王”。人参具有“主补五脏,安精神,定魂魄,明目,开心益智,轻身延年”的药理作用。人参化学成分复杂,其中,人参皂苷被认为是人参的主要活性成分。灵芝Ganoderma lucidum （Curtis.） P.Karst为灵芝属的大型丝状真菌,是我国食药用菌中的珍品,素有中华民族医药宝库中的仙草之称,灵芝酸是灵芝中主要的化学成分,具有延缓衰老,保护肝脏,消炎抗菌等功能。灵芝酸的合成途径与人参皂苷的合成途径在路径上有相似之处,都经过甲羟戊酸途径。本实验选取灵芝作为受体,利用电击转化技术,将人参大片段DNA（100kb）转化到灵芝原生质体内,探讨人参大片段DNA对灵芝遗传转化的可能性;为灵芝的种质资源创新及育种提供理论与技术支持;并为人参皂苷的异源生产奠定基础;同时为人参大片段DNA的功能分析提供新的技术体系。获得如下结果： 1灵芝原生质体再生的最优条件为：菌龄为5d,酶浓度为2.0%,pH值为5.5,酶解时间为2.5h,酶解温度为31℃,0.6mol/mL甘露醇为渗透压稳定剂,以MYG为再生培养基,采用固体培养法。 2、最适的转化条件为：电极间距为4mm,电压强度为250V,在选择培养基上获得了具有再生能力的转化子。通过对转化子PCR检测,证明人参大片段DNA已经转化到灵芝中。 3、通过对生长状态的观察以及生长曲线的测定,抗性转化子比未转化灵芝生长缓慢。 4、通过对抗性转化子和未转化菌株进行发酵,灵芝酸含量分析表明抗性转化子较未转化菌株灵芝酸含量有所降低。

关键词：人参大片段DNA 灵芝电击法转化

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维修绝招之一　新电击法修复细的线圈

仪器仪表用户 1995年第5期 40-40页

维修绝招之一新电击法修复细的线圈电击法修复细的线圈。成功率较低。新的电击法是在原基础上改进一下。使其成功率大为提高。具体做法是：在断的线圈（如万用表线圈或手表线圈）上放一些水。使其附在线圈上，进一步渗透线圈内。过片刻... 详细信息

维修绝招之一新电击法修复细的线圈电击法修复细的线圈。成功率较低。新的电击法是在原基础上改进一下。使其成功率大为提高。具体做法是：在断的线圈（如万用表线圈或手表线圈）上放一些水。使其附在线圈上，进一步渗透线圈内。过片刻用纸把上面多余的水擦干。然后再用电...

关键词：电击法电麻法万用表绝招

答“这个显像管怎么了” 谨慎使用“电击法”消除显像管内碰极故障

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家电检修技术 2008年第11期 19-19页

作者：王绍华

《家电检修技术》08年第8期刊登了蒋建军先生越个显像管怎么了》文中记述了因显像管内阴、栅极短路，采用“电击法”修复而失败的经过，并提出了四个疑问。下面就本人理解，谈谈看法。不对之处，请予以斧正。

关键词：显像管电击法管内《家电检修技术》故障栅极

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Bt-CpTi抗虫基因对玉米的遗传转化

Bt-CpTi抗虫基因对玉米的遗传转化

作者：闵丽东北农业大学

学位级别：硕士

本研究以5 个东北主栽玉米自交系品种和2 个单交种的胚叶和幼胚为外植体诱导愈伤组织,探讨了影响植株再生及农杆菌介导法和电击法遗传转化效率的主要影响因素,建立了高效的玉米再生体系和稳定的遗传转化体系,获得了1 株PCR 检测阳性植株... 详细信息

本研究以5 个东北主栽玉米自交系品种和2 个单交种的胚叶和幼胚为外植体诱导愈伤组织,探讨了影响植株再生及农杆菌介导法和电击法遗传转化效率的主要影响因素,建立了高效的玉米再生体系和稳定的遗传转化体系,获得了1 株PCR 检测阳性植株,初步证实Bt-CpTI双价抗虫基因已经整合到玉米基因组中。主要研究结果如下: 1.再生体系的建立⑴玉米胚性愈伤的产生受遗传因素的影响,不同基因型胚性愈伤诱导率差异很大。玉米胚叶愈伤组织的形成能力因其形态学部位的不同而呈显著差异,从基部向上依次递减。在供试的玉米基因型中,胚叶胚性愈伤诱导率以吉846、81162 较高,同时确定了切取玉米胚叶的最佳部位是从胚叶基部向上切取0.3cm 左右的小段诱导愈伤。而幼胚胚性愈伤诱导率以DH11、DH9、吉846、81162 较高。⑵不同基因型玉米诱导愈伤组织所需的最佳2,4-D浓度不同,对玉米胚叶诱导愈伤的分别是81162为2mg/L,吉846、农大178、K10为3mg/L,东8112为4mg/L。对玉米幼胚诱导愈伤的分别是K10为4mg/L,农大178、东8112、吉846、81162为3mg/L。⑶玉米不同基因型的不定芽分化率不同。愈伤组织分化培养基确定为:MB + 6-BA 1.0mg/L + KT 0.5mg/L。⑷再生芽生根培养基确定为:MB + IBA 2.0mg/L + NAA 0.5mg/L。并通过不断地改进玉米移栽培养条件,提高了再生苗的移栽成活率。2.遗传转化体系的建立⑴选择剂Geneticin(G418)浓度的确定确定了农杆菌遗传转化的抗性筛选剂为G418,筛选剂G418 的使用浓度在愈伤组织生长阶段为60mg/L,分化阶段为40mg/L。⑵农杆菌介导法对玉米胚性愈伤组织的遗传转化①愈伤组织的基因型不同,转化效果不同,通过检测GUS 瞬时表达率,确定了DH11、DH9、吉846 都是理想的转化受体材料。②探讨了影响遗传转化效率的4 个因素正交试验的较优组合为:预培养6d、侵染时间10min、共培养时间3d、共培养培养基葡萄糖浓度10g/L。4 个因素的影响程度依次为:共培养时间、侵染及共培养基中加葡萄糖浓度、侵染时间、预培养时间。⑶电击法对玉米胚性愈伤组织的遗传转化探讨了电击法电击参数对愈伤组织的伤害情况,确定了电击参数。电容为960μF,电场强度为375v/cm,电击时间为61ms 为合适的电击条件。3.转化体的PCR 检测

关键词：玉米 Bt-CpTI 抗虫基因农杆菌介导法电击法

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高压电击法修复长虹C2992彩电

家电维修（大众版） 2007年第2期 54-54页

作者：周文亮

一台长虹C2992彩电，无光无声，且电源指示灯不亮。

关键词：彩电长虹电击法修复高压电源指示灯无光无声

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用电击法处理垃圾

科技信息 1995年第7期 27-27页

作者：陈吉飞

德国卡尔斯卢厄研究中心的物理学家采用电击方法分离某些复合工业垃圾,尤其是建筑垃圾,取得了经济而良好的效果。一个简单的试验可以证明这种方法的有效性:科学家准备了一个塑料桶盛满水,在桶中间设一层金属网筛,并把一堆用旧的汽车火... 详细信息

德国卡尔斯卢厄研究中心的物理学家采用电击方法分离某些复合工业垃圾,尤其是建筑垃圾,取得了经济而良好的效果。一个简单的试验可以证明这种方法的有效性:科学家准备了一个塑料桶盛满水,在桶中间设一层金属网筛,并把一堆用旧的汽车火花塞放在网筛上,然后盖上盖,盖的中间有一根金属棍伸入水中。金属棍与网筛分别接上电源两极,一按电钮,水桶中产生一次电击,在500万分之一秒时间内,电压高达25万伏,打开桶盖,检查桶底,可见一层白色粉末。再连续进行这样200次的电击,"奇迹"就出现了,躺在金属网筛上的是火花塞干干净净的金属部分,而火花塞外部的陶瓷全变成了粉末沉入桶底,这一过程前后只有40秒钟。使用这一方法可以轻而易举、干干净净地分离陶瓷、水泥、玻璃中的金属部分,象废旧的火花塞。

关键词：火花塞金属网筛电击法建筑垃圾工业垃圾有效性物理学家分离研究中心陶瓷

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莱茵衣藻遗传转化条件的优化及表皮生长因子基因的转化

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莱茵衣藻遗传转化条件的优化及表皮生长因子基因的转化

作者：张文平新疆大学

学位级别：硕士

莱茵衣藻作为单细胞真核绿藻,具有生长周期短,实验操作简便,只具有一个较大的叶绿体,易获得各种突变体等优点,是国际上用于研究植物细胞分子生物学和光合作用遗传的理想模式材料。莱茵衣藻的遗传转化为获得大量突变体,并分离导致突变的... 详细信息

莱茵衣藻作为单细胞真核绿藻,具有生长周期短,实验操作简便,只具有一个较大的叶绿体,易获得各种突变体等优点,是国际上用于研究植物细胞分子生物学和光合作用遗传的理想模式材料。莱茵衣藻的遗传转化为获得大量突变体,并分离导致突变的基因以及研究其功能等提供了很有效的手段。为了研究光合色素相关基因的特性和莱茵衣藻在生物技术中的应用,本文对莱茵衣藻遗传转化的条件和cbn1 基因的遗传转化及表皮生长因子（EGF）基因在莱茵衣藻中的表达方面作了实验研究。用玻璃珠研磨法将p389ARG7 转入到莱茵衣藻arg7 突变品系中,经过多次转化实验,结果显示,在TAP 培养基中琼脂粉的浓度为1.8%,用自溶素处理40分钟左右, 玻璃珠研磨时间为15秒,有利于提高莱茵衣藻的转化率,并且线性质粒并不比用环形质粒的转化率高。为了克隆cbn1 基因,在上述条件下,用玻璃珠研磨法将p389ARG7 转入到莱茵衣藻缺壁及精氨酸依赖性的双突变体（cw15,arg7,mt-）中,经过多次转化共得到了3000多个转化子,经荧光检测,筛选到了两株叶绿素b 缺失突变体ART3和ART4,并用高效液相色谱对其进一步检测。用玻璃珠研磨法将p387NIT1质粒转入到莱茵衣藻硝酸还原酶缺陷型及缺壁突变体（cw15,nit1-305,mt-）中,共获得不同的插入型突变转化子1800 多个,经荧光检测后,进一步用高效液相色谱法检测出缺乏叶绿素b 的一个突变子NIT17-1。这两种质粒在莱茵衣藻中的成功转化,不仅验证了玻璃珠研磨法的有效性,而且为克隆cbn1 基因制备探针打下了基础。电击转化法是莱茵衣藻遗传转化的有效方法之一。根据文献查询,未见有关使用BIO-RAD165-2110 型电击仪对莱茵衣藻进行转化的报道。因此我们用此种电击仪对莱茵衣藻进行多次电击转化实验,结果显示,其最佳电压值为900V。用藻类生产药用蛋白是基因工程中的一个重要领域。为了使表皮生长因子

关键词：莱茵衣藻遗传转化玻璃珠研磨法 cbn1基因电击法表皮生长因子载体构建 Zeocin选择标记

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GUS基因对红豆草部分酶解小细胞团的转化

内蒙古师范大学学报（自然科学汉文版） 1994年第3期23卷 48-53页

作者：恩和巴雅尔杨金水葛扣麟内蒙古师范大学生物系复旦大学遗传研究所

采用电击法，将大肠杆菌的ＧＵＳ基因（β－葡糖苷酸酶基因为报告基因）导入红豆草部分酶解小细胞团，利用ＧＵＳ基因产物与底物Ｘ－Ｇｌｕｃ反应的组织化学定位试验，检测到ＧＵＳ基因在受体组织中的表达。同时，对部分酶解的程度、不... 详细信息

采用电击法，将大肠杆菌的ＧＵＳ基因（β－葡糖苷酸酶基因为报告基因）导入红豆草部分酶解小细胞团，利用ＧＵＳ基因产物与底物Ｘ－Ｇｌｕｃ反应的组织化学定位试验，检测到ＧＵＳ基因在受体组织中的表达。同时，对部分酶解的程度、不同电压条件下的转化效率以及两种质粒的不同启动子对ＧＵＳ基因表达的强度等进行了讨论。

关键词：转化 GUS基因红豆草部分酶解小细胞团电击法

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