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家庭电子 2003年第1期 34-34页

作者：杨永忠

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电击法修复CPU一例

家电维修（大众版） 2009年第7期 13-13页

作者：宋立中

康佳彩电2979A彩电（LC863328A·5T46＋LA76832机芯），因CPU（N601，LC863328A）⑨脚（保护检测）对地电阻只有31／而死机（指示灯亮，＋B电压135V正常）。

关键词： CPU 电击法修复康佳彩电指示灯机芯

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针叶树种遗传转化研究进展

分子植物育种 2004年第2期2卷 269-277页

作者：席梦利郭佳施季森国家林业局林木遗传和基因工程重点实验室南京林业大学南京210037

本文综述了国内外运用农杆菌介导法、基因枪法及电击法转化针叶树种的研究现状及其最新研究进展 ;同时 ,提出了该领域存在的主要问题及解决措施。旨在为进一步开展针叶树种遗传转化研究提供参考。

关键词：针叶树种遗传转化农杆菌介导法基因枪法电击法

CAT和GUS基因在水稻玉米等作物原生质体中的瞬间表达

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Acta Botanica Sinica 1990年第6期32卷 442-447页

作者：明小天米景九潘乃穟陈章良北京大学蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北京100871 北京农业大学分子遗传室北京大学生物系生命中心北京100871

使用电击法和 PEG 法将 CAT 和 GUS 基因分别与 CaMV 35S 启动子构成的两种嵌合基因,转移到水稻、玉米、烟草、胡萝卜和香石竹(Dianthus caryophyllus)等品种的原生质体中,均得到了瞬间表达。在电击法中,大多数转化后玉米、烟草和胡萝... 详细信息

使用电击法和 PEG 法将 CAT 和 GUS 基因分别与 CaMV 35S 启动子构成的两种嵌合基因,转移到水稻、玉米、烟草、胡萝卜和香石竹(Dianthus caryophyllus)等品种的原生质体中,均得到了瞬间表达。在电击法中,大多数转化后玉米、烟草和胡萝卜原生质体表现出明显的基因活性。转化效率与所用仪器的电击参数有关。PEG 转化中 PEG 处理时间较国外报道稍有缩短,但转化后的水稻、烟草、胡萝卜和香石竹样品中均得到了阳性结果。

关键词：原生质体基因表达电击法水稻

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植物体细胞原生质体遗传转化研究

西北植物学报 2004年第7期24卷 1329-1341页

作者：赵宏波陈发棣南京农业大学园艺学院南京210095

重点介绍了植物体细胞原生质体遗传转化的方法和当前已经取得的成果,同时提出了目前原生质体遗传转化中存在的问题,展望了今后的工作重点。植物原生质体遗传转化的方法主要有:PEG介导转化法、电击穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌... 详细信息

重点介绍了植物体细胞原生质体遗传转化的方法和当前已经取得的成果,同时提出了目前原生质体遗传转化中存在的问题,展望了今后的工作重点。植物原生质体遗传转化的方法主要有:PEG介导转化法、电击穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌共培养转化法等。

关键词：体细胞原生质体遗传转化PEG法电击法脂质体法农杆菌法

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金针茹原生质体外源DNA转化

农业生物技术学报 1997年第4期5卷 100-104页

作者：成亚利朱宝成李亮亮李庆余河北大学生物系

利用电击法将金针茹（Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）金杂１９菌株的染色体ＤＮＡ导入金针菇０８８菌株的单核菌丝原生质体中，根据转化的双核菌丝具“锁状联合”这一形态学特征筛选出了转化菌株。转化率为（７．３８～１２... 详细信息

利用电击法将金针茹（Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）金杂１９菌株的染色体ＤＮＡ导入金针菇０８８菌株的单核菌丝原生质体中，根据转化的双核菌丝具“锁状联合”这一形态学特征筛选出了转化菌株。转化率为（７．３８～１２．５）×１０－５，相对转化率为１４．０％～１８．９％。转化菌株的酯酶同工酶酶谱中出现了亲株没有的新酶带，说明遗传物质发生了变异。出菇实验表明，转化菌株的菌丝生长速度快于金针菇０８８菌株，现蕾期提前７天左右，菇形较好，生物学效率达９１．７％。

关键词：金针菇电击法原生质体转化锁状联合

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外源基因直接转移技术之评价

生命科学研究 1998年第3期2卷 172-176页

作者：林良斌官春云作物基因工程湖南省重点实验室湖南农业大学

外源基因直接转移技术有ＰＥＧ法、电击法、基因枪法、微注射法、脂质体法、生殖细胞转化法等．本文对它们进行了比较分析，指出它们各自的优缺点。

关键词：外源基因直接转移技术评价 PEG法电击法

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波吉卵囊藻遗传转化体系构建的初步探索

波吉卵囊藻遗传转化体系构建的初步探索

作者：张晓琴广东海洋大学

学位级别：硕士

波吉卵囊藻(Oocystis borgei)是高位对虾养殖池塘中后期常见优势种,其种群稳定适应能力强,能有效降低养殖池塘水体中氨氮和亚硝态氮等有害物质,在对虾养殖水体调控方面发挥着重要作用。十多年来,实验室开展了波吉卵囊藻的培养生物学的... 详细信息

波吉卵囊藻(Oocystis borgei)是高位对虾养殖池塘中后期常见优势种,其种群稳定适应能力强,能有效降低养殖池塘水体中氨氮和亚硝态氮等有害物质,在对虾养殖水体调控方面发挥着重要作用。十多年来,实验室开展了波吉卵囊藻的培养生物学的研究和应用推广,其应用价值已经在对虾养殖中得以体现,但目前国内外对其分子生物学研究几乎空白,同时缺少相应的研究工具。因此本文以波吉卵囊藻作为实验材料,首次尝试通过基因工程技术手段构建其遗传转化体系,并对波吉卵囊藻进行了转录组测序与分析,从而为波吉卵囊藻的分子生物学相关研究提供工具和依据。研究内容和结果如下:(1)本研究通过测定藻体生物量、叶绿素含量及观察藻液颜色变化,综合评定了波吉卵囊藻对10种抗生素的敏感性。结果表明:(1)波吉卵囊藻对博来霉素非常敏感,25μg/mL的博来霉素即能完全抑制藻体生长,叶绿素含量极显著低于对照组(P法有效的去除波吉卵囊藻中霉菌污染后,再采用溶菌酶预处理结合抗生素(400μg/mL氨苄青霉素、400μg/mL庆大霉素、400μg/mL卡那霉素和200μg/mL链霉素)的方法去除藻液中的细菌,通过显微镜镜检观察及细菌和真菌平板检测,均未观察到杂菌的存在,由此获得了无菌的波吉卵囊藻,经五次传代培养后成功地建立了波吉卵囊藻的无菌培养体系。(3)本研究采用SYTOXGreen(SG)荧光染色法来评估波吉卵囊藻细胞膜的渗透性及完整性,确定了SG染色剂量为20μM,避光染色20min以上可以作为2×10个细胞/mL细胞密度的波吉卵囊藻的最佳染色条件。通过使用流式细胞仪结合SG染色法得出波吉卵囊藻渗透性和存活率的交叉点在550V左右,并将550V电压应用于质粒电转化实验中。本文以波吉卵囊藻细胞为受体细胞,通过电击法并采用上述得出的电击条件尝试将含有CaMV 35S启动子、Omega增强子、EGFP报告基因以及ble选择标记基因的载体pOb-EGFP-2A导入藻细胞中,以期构建出波吉卵囊藻的稳定遗传转化体系,该研究为波吉卵囊藻稳定遗传转化体系的构建提供了重要的参考资料。(4)本研究通过Illumina Hiseq高通量测序平台对波吉卵囊藻细胞进行了转录组测序。通过去除低质量的raw reads共获得6.05Gb Clean Data,利用Trinity软件对转录组数据进行从头组装,共获得了35,873条Unigenes,其中长度在1kb以上的Unigene有7,837条。采用BLAST相似性比对方法,把这些序列与NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、KOG、GO和Pfam数据库进行比对,共有11,032条Unigene得到了注释。有5,201条Unigenes获得了GO注释并分类到46个功能类别中,有5,018条Unigenes被归纳到COG的26个功能分类,有9,327条Unigenes被归纳到eggNOG的25个功能分类,有6,276条Unigenes被归纳到KOG的25个功能分类.有4,945条Unigenes被KEGG注释,有8,331条Unigenes被Pfam注释,有5,844条Unigenes被Swissprot注释,有9,860条Unigenes被nr注释。从11,032条Unigenes中共找到2,617个SSR位点。波吉卵囊藻的转录组信息为今后相关研究与应用提供了丰富的资源和线索。

关键词：波吉卵囊藻遗传转化体系选择标记基因电击法转录组

水牛体细胞myostatin基因敲除的初步研究

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水牛体细胞myostatin基因敲除的初步研究

作者：汤刚彬广西大学

学位级别：硕士

水牛是我国南方主要的畜种,随着我国生产力水平的提高,水牛的役用性正在部分的被机械取代,而水牛的肉用性和乳用性得到越来越多的关注。myostatin是控制肌肉生长的一个关键基因,如若敲除该基因则能提高动物的产肉性能。为提高水牛的肉... 详细信息

水牛是我国南方主要的畜种,随着我国生产力水平的提高,水牛的役用性正在部分的被机械取代,而水牛的肉用性和乳用性得到越来越多的关注。myostatin是控制肌肉生长的一个关键基因,如若敲除该基因则能提高动物的产肉性能。为提高水牛的肉用性能,培育新的水牛品种,本研究对水牛体细胞myostatin基因敲除的可行性进行了初步探讨。首先,根据GeneBank公布的奶牛myostatin基因序列设计了两对引物。利用长片段PCR技术从本地水牛的基因组中成功地得到了打靶用的长短同源臂,长度分别为4368bp和1374bp。测序及同源性分析表明,长短臂与奶牛相应序列的同源性达到97%和96%,说明扩增片段来源正确,完全可用于载体构建。同源长臂包括了myostatin基因的第一和第二外显子;同源短臂包括第三外显子的一部分。将同源长臂和短臂连入pLoxp骨架,构建成myostatin敲除载体—P13K。酶切及PCR鉴定结果证明载体构建正确。然后,用经过改良的组织块法和胰酶消化法从水牛胎儿肌肉组织中成功分离得到水牛胎儿成纤维细胞,体外培养至第三代。最后用构建的myostatin基因敲除载体通过脂质体法和电击法转染水牛胎儿成纤维细胞,获得了抗性细胞,并对转染参数和抗性细胞的筛选及培养条件进行了优化、获得的抗性细胞进行了PCR检测。结果表明:①用脂质体法转染时,脂质体8μl,质粒DNA2μg,稳定转染8h效率较高。电击法转染时,电场强度45V/mm,脉冲时间12ms时,转染效率较高;②抗性细胞使用DMEM+20%FBS+10μg/ml insulin+10ng/ml bFGF+30%条件液并采用微滴培养法培养效果较好;③P13K在抗性细胞中发生了随机整合。

关键词： myostatin基因基因敲除脂质体法电击法细胞转染

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生物技术简讯

生物技术通报 1993年第4期9卷 12-13,17-18页

作者：孙国凤陶冶

培育出插入杀虫性基因的水稻植物工程研究所(三菱化成和三菱商事共同投资的公司)开发了插入BT 基因的水稻。

关键词：性基因电击法生物技术粒型甜菜种子芽抱杆菌微生物农药枯萎病高压电流促进发芽