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甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白提取方法的比较

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解剖学报 2021年第1期52卷 141-145页

作者：焦叶林赵云岗刘其伟阮豪杰高社干齐义军河南科技大学医学院临床医学院第一附属医院肿瘤医院河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003 洛阳市第一人民医院病理科河南洛阳471003 长治市妇幼保健院医学遗传科山西长治046011 许昌学院解剖学教研室河南许昌461000

目的探讨从甲醛固定石蜡包埋(FFPE)食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中高效率提取蛋白质的方法。方法6种裂解液和100℃、105℃两种条件分别提取8例甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白,Bradford法测定蛋白浓度、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺... 详细信息

目的探讨从甲醛固定石蜡包埋(FFPE)食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中高效率提取蛋白质的方法。方法6种裂解液和100℃、105℃两种条件分别提取8例甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白,Bradford法测定蛋白浓度、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和免疫组织化学评价各方法提取组织蛋白的效率和质量,不同蛋白沉淀方法纯化提取蛋白。结果Laemmli裂解液(4号)100℃处理提取癌组织蛋白效率最高,Western blotting检测癌组织中14-3-3σ蛋白表达与免疫组织化学检测结果一致;2倍体积乙腈(含0.1%三氟乙酸)沉淀FFPE提取蛋白能够降低蛋白电泳背景。结论Laemmli裂解液100℃处理可高效提取的甲醛固定石蜡包埋组织蛋白且适用于Western blotting检测蛋白标志物分子,乙腈蛋白沉淀法能够进一步去除残余的交联蛋白质分子。

关键词：甲醛固定石蜡包埋蛋白提取蛋白纯化免疫印迹法

甲醛固定石蜡包埋切片经特殊染色后荧光定量聚合酶链反应检测的再利用

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临床与实验病理学杂志 2022年第2期38卷 239-240页

作者：魏雪叶胜兵章如松夏秋媛饶秋马恒辉吴楠东部战区总医院病理科南京210000

结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的特异性炎症,在甲醛固定石蜡包埋组织切片中查见MTB是确诊结核的“金标准”。目前,结核病诊断的主要辅助检测方法是特殊染色和qRT-PCR检测。在临床病理诊断中,部分结... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的特异性炎症,在甲醛固定石蜡包埋组织切片中查见MTB是确诊结核的“金标准”。目前,结核病诊断的主要辅助检测方法是特殊染色和qRT-PCR检测。在临床病理诊断中,部分结核病患者由于获取标本困难,穿刺标本微小,病理组织多被用于HE染色、特殊染色,所剩组织太少无法进行相关分子检测。

关键词：特殊染色石蜡包埋切片临床病理诊断荧光定量聚合酶链反应甲醛固定特异性炎症结核病诊断结核分枝杆菌

非小细胞肺癌甲醛固定石蜡包埋组织储存年限对DNA靶向捕获二代测序的影响

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中华病理学杂志 2020年第6期49卷 619-622页

作者：郭连英向婵赵瑞英马圣吉丁博闻董楠韩昱晨上海市胸科医院上海交通大学附属胸科医院病理科200030

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)甲醛固定石蜡包埋(FFPE)组织样本的不同保存年限对DNA质量及靶向捕获二代测序的影响。方法收集上海市胸科医院经手术切除、FFPE后常规储存的NSCLC标本共147例。这些标本按储存年限分为3~5年(n=37)、>5年(n=2... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)甲醛固定石蜡包埋(FFPE)组织样本的不同保存年限对DNA质量及靶向捕获二代测序的影响。方法收集上海市胸科医院经手术切除、FFPE后常规储存的NSCLC标本共147例。这些标本按储存年限分为3~5年(n=37)、>5年(n=27)4组,采用磁珠法提取DNA,然后对其进行靶向捕获二代测序。分析不同保存时间对DNA片段化程度、文库产量、文库复杂度、测序成功率及测序突变类型的影响。结果随标本保存年限的增长,DNA片段化程度增高;文库总产量、总建库复杂度、测序成功率降低;测序单碱基突变类型C>T(G>A)频率最高。结论在常规FFPE标本储存条件[可控的低湿度室温(20~25℃)环境]下,3年内的FFPE标本能够进行二代测序且结果高度可信;>3~5年的FFPE标本可进行二代测序,但存在假阴、阳性结果;5年以上的FFPE标本大部分仅可尝试进行二代测序检测。

关键词：甲醛固定靶向捕获磁珠法阳性结果储存条件 NSCLC 二代测序单碱基突变

甲醛固定组织中士的宁与马钱子碱的LC-MS/MS分析

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法医学杂志 2012年第5期28卷 347-350页

作者：詹兰芬刘明东颜有仪叶懿王薇王智慧赵俊红廖林川四川大学华西基础医学与法医学院四川成都610041 台州市第一人民医院药剂科浙江台州318020 四川大学华西药学院四川成都610041

目的建立甲醛固定组织中士的宁与马钱子碱的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。方法甲醛固定组织经匀浆、离心后,上清液用SCX固相萃取小柱净化,在SB-C18液相色谱柱上以V(0.1%甲酸溶液)∶V(0.1%甲酸乙腈溶液)=75∶25为流动相进... 详细信息

目的建立甲醛固定组织中士的宁与马钱子碱的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。方法甲醛固定组织经匀浆、离心后,上清液用SCX固相萃取小柱净化,在SB-C18液相色谱柱上以V(0.1%甲酸溶液)∶V(0.1%甲酸乙腈溶液)=75∶25为流动相进行分离,采用电喷雾离子源(ESI)、正离子检测、多反应监测模式进行分析,外标法定量。结果甲醛固定肾、肝组织中士的宁与马钱子碱色谱分离良好,在0.002～2.0μg/g内均具有良好的线性(r>0.996);肾组织中士的宁和马钱子碱的检出限分别为0.06 ng/g和0.03 ng/g,肝组织中均为0.3ng/g;提取回收率均>74.5%,日内及日间精密度均小于8.2%。结论所建LC-MS/MS方法灵敏度高,可用于甲醛固定组织中士的宁和马钱子碱的检测,以满足法医毒物分析的鉴定需求。

关键词：法医毒理学液相色谱-串联质谱法士的宁马钱子碱甲醛固定

甲醛固定石蜡包埋胃癌组织中三种DNA提取方法的比较

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临床与实验病理学杂志 2016年第12期32卷 1412-1413页

作者：郭丽祁荣臧旭郑瑞付佳沈阳医学院科学实验中心沈阳110034 沈阳北方医院检验科沈阳110086

目前国内大多数医院均用10％中性福尔马林固定手术标本。随着分子生物学技术的不断发展，这些标本是可靠的分子生物学研究材料来源，在医学检验、法医鉴定、大宗病例回顾性研究等方面得到广泛应用。已有研究证明石蜡包埋组织在制作及保... 详细信息

目前国内大多数医院均用10％中性福尔马林固定手术标本。随着分子生物学技术的不断发展，这些标本是可靠的分子生物学研究材料来源，在医学检验、法医鉴定、大宗病例回顾性研究等方面得到广泛应用。已有研究证明石蜡包埋组织在制作及保存过程中受多种试剂等因素的影响，

关键词：甲醛固定石蜡包埋 DNA提取聚合酶链式反应

甲醛固定对Live/Dead BacLight Bacterial Viability Kit死活细菌染液荧光显微计数海洋细菌的影响

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生态科学 2013年第5期32卷 636-641页

作者：张瑜斌崔焱芸郑运孙省利广东海洋大学海洋资源与环境监测中心湛江524088

利用Live/Dead BacLight Bacterial Viability Kit死活细菌染液对采自湛江东海大堤海水、沉积物细菌和大型海藻拟刚毛藻(Cladophoropsis zollingeri)内生细菌数量进行了甲醛固定处理前后的荧光显微计数对比分析。结果表明,新鲜样品(不... 详细信息

利用Live/Dead BacLight Bacterial Viability Kit死活细菌染液对采自湛江东海大堤海水、沉积物细菌和大型海藻拟刚毛藻(Cladophoropsis zollingeri)内生细菌数量进行了甲醛固定处理前后的荧光显微计数对比分析。结果表明,新鲜样品(不加甲醛固定)、甲醛刚固定样品、甲醛固定1周样品和甲醛固定2周样品中海洋细菌数量差异不显著(p>0.05)。甲醛固定对Live/Dead BacLight Bacterial Viability Kit死活细菌染液荧光显微计数海洋细菌数量无显著影响,固定后的样品可在2周内完成计数。

关键词：甲醛固定 Live Dead BacLight Bacterial Viability Kit染液细菌荧光显微计数

甲醛固定及石蜡包埋组织的蛋白质组学研究进展

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中华病理学杂志 2009年第10期38卷 718-720页

作者：邰艳红韦立新解放军总医院病理科北京100853

人体内多数疾病都有其独特的生物学特征，如某些蛋白质表达量的改变，新的肿瘤特异性蛋白质的出现等。近年来蛋白质组学及其相关技术为发现新的疾病特异性生物标志物以及探讨疾病发生发展机制，提供了高效便捷的工具。

关键词：蛋白质组学研石蜡包埋组织甲醛固定特异性生物标志物特异性蛋白质发生发展机制生物学特征疾病

油红O染色在甲醛固定的乳腺富于脂质癌中的实践应用

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临床与实验病理学杂志 2021年第3期37卷 359-360页

作者：姜贝贝刘晓红曹瑞雪于国丽李培峰解放军第九六〇医院病理科济南250031

在临床病理诊断中,常规HE切片中常可见到胞质透亮或胞质内有许多大小不等的圆形空泡,此现象是水泡样变、黏液样物质、脂肪或脂质组织,还是溶解了的糖原,往往不易区分,这就要依赖于脂肪染色、黏液染色、糖原染色等来鉴别。黏液染色和糖... 详细信息

在临床病理诊断中,常规HE切片中常可见到胞质透亮或胞质内有许多大小不等的圆形空泡,此现象是水泡样变、黏液样物质、脂肪或脂质组织,还是溶解了的糖原,往往不易区分,这就要依赖于脂肪染色、黏液染色、糖原染色等来鉴别。黏液染色和糖原染色可用石蜡包埋后切片染色即可,而脂肪染色不能用常规石蜡包埋组织切片。日常病理诊断工作中,很多标本可能未行冷冻或者在冷冻时未考虑脂肪染色的问题,但在常规HE染色切片观察时却要考虑或验证其脂质或脂肪成分。为弥补新鲜冷冻时未行脂肪染色,本文收集1例已明确诊断为乳腺富于脂质癌的剩余标本,用甲醛固定后的标本来制作冷冻切片进行油红O脂肪染色,并记录甲醛固定30天内的标本中脂肪染色情况。

关键词：乳腺富于脂质癌油红O染色甲醛固定

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甲醛固定对GFP发光特性的影响

氨基酸和生物资源 2015年第4期37卷 67-71页

作者：刘娣张巨源陈雯莉王莉华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

绿色荧光蛋白(GFP)能够作为报告分子对活体细胞中特定基因的时空表达进行实时追踪,因此广泛应用于生物学研究领域。在用GFP对细胞活动进行追踪的实验中,常有无法在取样后及时对样品进行荧光观察的情况,此时需要先将样品进行固定以便对... 详细信息

绿色荧光蛋白(GFP)能够作为报告分子对活体细胞中特定基因的时空表达进行实时追踪,因此广泛应用于生物学研究领域。在用GFP对细胞活动进行追踪的实验中,常有无法在取样后及时对样品进行荧光观察的情况,此时需要先将样品进行固定以便对其进行观测。然而,不恰当的细胞固定方法会导致胞内GFP荧光信号强度减弱、位置改变等后果。甲醛是最常用的细胞固定剂,也常被用于固定表达GFP蛋白的细胞样品。但对甲醛固定GFP样品的报道多是针对于真核细胞,且固定效果也存在较大差异。文章系统地探索了甲醛浓度、固定时间、固定缓冲液种类对两种细菌(E.coli及鱼腥蓝细菌Anabaena PCC7120)胞内GFP信号的影响。结果显示,较低浓度(≤1%)的甲醛处理2h后,细胞的荧光强度在1d后仍可保持80%以上,胞内荧光点无弥散现象发生。具有相近pH的几种常见缓冲液对荧光强度的影响无显著差异。随着甲醛浓度的增加、固定时间的延长、溶液pH的增加(中性至偏碱性),细胞中的荧光强度会逐渐降低。

关键词：甲醛固定绿色荧光蛋白(GFP) 荧光保存率