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DNMT3a在肺腺癌中的表达及癌细胞迁移的影响分析

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安徽医学 2024年第8期45卷 946-953页

作者：蒋梦龙郑丽云葛威康宁宁许峰张仁泉安徽医科大学第一附属医院普胸外科安徽合肥230022 安徽省儿童医院心血管科安徽合肥230051

目的探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在肺腺癌中的表达水平及影响肺腺癌细胞迁移的分子机制。方法回顾性分析2023年1~12月在安徽医科大学第一附属医院胸外科接受手术治疗的41例肺腺癌患者临床资料,使用IHC和蛋白质印迹实验(WB)检测并分析DN... 详细信息

目的探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在肺腺癌中的表达水平及影响肺腺癌细胞迁移的分子机制。方法回顾性分析2023年1~12月在安徽医科大学第一附属医院胸外科接受手术治疗的41例肺腺癌患者临床资料,使用IHC和蛋白质印迹实验(WB)检测并分析DNMT3a在41例患者肺腺癌组织及癌旁组织中的表达水平;通过分析TCGA数据库揭示DNMT3a与肺腺癌患者预后关系。慢病毒介导SK-LU-1和A549细胞系过表达或敲低DNMT3a,通过IHC、WB、实时荧光定量聚合链反应(qRT-PCR)、DNMT3a抑制剂实验观察DNMT3a对蜗牛家族转录因子(Snail)表达的影响;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测过表达或敲低DNMT3a对肺腺癌细胞迁移的影响。结果DNMT3a高表达对比DNMT3a低表达的肺腺癌患者生存期较短,差异有统计学意义(P3a和Snail在肺腺癌组织中较癌旁组织相比均高表达(P3a和Snail在肺腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.612,P3a的SK-LU-1细胞中Snail表达上调并增加了肺腺癌细胞的迁移数量(P3a的A549细胞中Snail表达下调并减少了肺腺癌细胞的迁移数量(P3a在肺腺癌组织中高表达且与不良预后显著相关,DNMT3a通过上调Snail的表达促进肺腺癌细胞的迁移。

关键词：肺腺癌甲基化转移酶3a 蜗牛家族转录因子迁移上皮间质转化

转染miR-101类似物后卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的变化及其机制

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山东医药 2016年第35期56卷 13-16页

作者：胡可可刘小敏宋泓于渊毅郴州市第一人民医院南华大学附属郴州医院湖南郴州423000 南华大学肿瘤研究所

目的观察转染miR-101类似物后卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性变化,并探讨其机制。方法培养卵巢癌SKOV3细胞,将SKOV3细胞分为观察组、对照组、单药组,三组均经0、6.25、25、100、400、1 600 ng/m L紫杉醇处理,观察组转染miR-101类似物,对照... 详细信息

目的观察转染miR-101类似物后卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性变化,并探讨其机制。方法培养卵巢癌SKOV3细胞,将SKOV3细胞分为观察组、对照组、单药组,三组均经0、6.25、25、100、400、1 600 ng/m L紫杉醇处理,观察组转染miR-101类似物,对照组转染无关序列,单药组不转染任何序列,MTT法观察各组细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI法测算各组细胞凋亡率。采用Western blotting法检测25 ng/m L紫杉醇注射液作用的观察组、对照组、单药组细胞DNMT3a蛋白。结果 0、6.25、25、100、400、1 600 ng/m L紫杉醇注射液作用的观察组细胞OD值分别为0.632±0.014、0.554±0.012、0.503±0.015、0.428±0.011、0.346±0.006、0.301±0.007,单药组分别为0.718±0.013、0.687±0.015、0.619±0.011、0.554±0.009、0.473±0.008、0.420±0.011,对照组分别为0.713±0.016、0.671±0.011、0.626±0.010、0.549±0.008、0.467±0.010、0.412±0.008,观察组与对照组相比,P均3%±0.38%、14.71%±0.64%、21.27%±0.79%、27.05%±0.92%、31.82%±1.07%、35.51%±1.63%,单药组分别为3.61%±0.24%、6.18%±0.48%、9.57%±0.42%、15.64%±0.75%、18.79%±1.12%、22.05%±1.34%,对照组分别为3.74%±0.29%、6.02%±0.35%、10.63%±0.58%、15.21%±0.84%、19.37%±1.26%、23.30%±1.18%,观察组与对照组相比,P均3a蛋白相对表达量分别为0.427±0.068、0.961±0.107,0.947±0.113,三组比较,P3a诱导卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性。

关键词：微小RNA-101类似物卵巢癌细胞甲基化转移酶3a 紫杉醇药物敏感性

miR-194通过靶定DNMT3a基因调控肝癌细胞的生长

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现代肿瘤医学 2019年第2期27卷 187-192页

作者：马一栋杨茜霍月红尉继林丁志明席海英大同市第五人民医院肿瘤科山西大同037009 大同市第五人民医院风湿免疫科山西大同037009 大同市第五人民医院检验科山西大同037009 大同市第五人民医院皮肤科山西大同037009

目的:探讨miR-194对肝癌细胞增殖和细胞周期的影响及其潜在的作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应检测肝癌细胞系HepG2和正常肝细胞系L-O2中miR-194的表达水平。构建miR-194过表达质粒,采用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细... 详细信息

目的:探讨miR-194对肝癌细胞增殖和细胞周期的影响及其潜在的作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应检测肝癌细胞系HepG2和正常肝细胞系L-O2中miR-194的表达水平。构建miR-194过表达质粒,采用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期;双荧光素酶报告基因分析法预测和验证miR-194可能的靶基因。结果:实时定量PCR结果显示,miR-194在肝癌细胞中的表达明显低于肝脏正常细胞。在肝癌细胞中过表达miR-194抑制细胞生长。而流式细胞术检测发现细胞周期进程减慢,G_1期比例增加,S期比例相应的减少。靶基因筛选得到DNMT3a为miR-194的候选靶基因。荧光报告载体实验证实,miR-194能够通过作用于靶基因3'非翻译区的特定位点,对其表达在转录后进行负性调节。而在miR-194表达增加的肝癌细胞中,靶基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平都有明显降低。在肝癌细胞HepG2中,敲除靶基因DNMT3a后,细胞的增殖能力减弱,相反,当把DNMT3a过表达后,细胞的增殖能力增强,可以挽救miR-194对细胞的表型影响。结论:miR-194可通过靶定DNMT3a基因抑制肝癌细胞的生长。

关键词：微小RNA-194 HepG2细胞增殖细胞周期甲基化转移酶3a

linc00152通过调控DNMT3a和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭

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中南医学科学杂志 2019年第4期47卷 358-362页

作者：彭芳陈艳宇王贵明周扬帆广东省第二人民医院病理科

探讨linc00152在宫颈癌中的生物学功能及其调控机制。运用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞中linc00152的表达;转染sh-linc00152、si-DNMT3a和si-DNMT3B于HeLa细胞以敲低细胞中linc00152、DNMT3a和DNMT3B的表达水平,采用qRT-PCR与Westernblot法检测转染效率;采用Westernblot法检测sh-linc00152对甲基化转移酶(DNMT)3a和3B蛋白表达水平的影响;采用MTT、Transwell侵袭实验检测sh-linc00152、si-DNMT3a以及si-DNMT3B对人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭的影响。结果显示,linc00152在宫颈癌细胞中的表达水平明显高于正常宫颈上皮细胞(P3a和DNMT3B蛋白表达水平明显低于sh-control组;sh-linc00152组、si-DNMT3a以及si-DNMT3B组HeLa细胞的存活率及穿过基质胶的HeLa细胞数量均明显低于各自对照组。linc00152可能通过调控DNMT3a和DNMT3B信号通路促进人宫颈癌细胞生长与侵袭。

关键词： linc00152 宫颈癌甲基化转移酶3a 甲基化转移酶3B 生长与侵袭

miR-200c靶向调控DNMT1诱导卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性

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海南医学 2018年第13期29卷 1780-1782页

作者：谭志琴万兰杨春秀文玉华中国人民解放军第458医院妇产科广东广州510060

目的研究miR-200c调控人类卵巢癌对紫杉醇敏感性的影响及其作用机制。方法培养卵巢癌SKOV3细胞,将SKOV3细胞分为miR-200c模拟物组、无关序列对照组及单药组,三组均分别采用0 ng/mL、25 ng/mL、100 ng/mL、400 ng/mL紫杉醇处理,miR-200c... 详细信息

目的研究miR-200c调控人类卵巢癌对紫杉醇敏感性的影响及其作用机制。方法培养卵巢癌SKOV3细胞,将SKOV3细胞分为miR-200c模拟物组、无关序列对照组及单药组,三组均分别采用0 ng/mL、25 ng/mL、100 ng/mL、400 ng/mL紫杉醇处理,miR-200c模拟物组转染miR-200c模拟物,无关序列对照组转染无关序列,单药组不转染任何序列,MTT法检测不同浓度紫杉醇及联合miR-200c对卵巢癌细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI法检测不同浓度紫杉醇及联合miR-200c对卵巢癌细胞凋亡能力的影响;Western blot试验检测紫杉醇联合miR-200c模拟物对DNMT1蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,不同浓度紫杉醇处理后三组的卵巢癌细胞的增殖能力随紫杉醇浓度的增加而逐渐下降,miR-200c模拟物组SKOV3细胞的增殖能力与无关序列对照及单药组比较均明显下降,差异均有统计学意义(P0.05);Annexin V-FITC/PI法结果显示,不同浓度紫杉醇处理后三组的SKOV3细胞的凋亡率随紫杉醇浓度的增加而逐渐增加,miR-200c模拟物组SKOV3细胞的凋亡率与无关序列对照及单药组比较均明显增加,差异均有统计学意义(P0.05);Western blot试验结果显示,miR-200c模拟物与紫杉醇共处理组SKOV3细胞中DNMT1的蛋白表达水平较单独转染miR-200c模拟物组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-200c可通过调控靶蛋白DNMT1的表达促进卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性。

关键词： miR-200c 卵巢癌细胞甲基化转移酶3a 紫杉醇敏感性

血管免疫母T细胞淋巴瘤患者RHOA、TET2和DNMT3a基因突变率及临床特征分析

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解剖学研究 2019年第1期41卷 53-56页

作者：王锦杨承玉四川大学华西医院血液科四川成都610041 山西中医学院中西医结合医院肿瘤血液科四川成都030013

目的探讨血管免疫母T细胞淋巴瘤(AITL)患者RHOA、TET家族羟化酶2(TET2)和甲基化转移酶3a(DNMT3a)基因突变率及临床特征分析。方法应用免疫组化法检测AITL患者组织中RHOA、TET2和DNMT3a的表达。采用多重PCR扩增和测序方法分析RHOA、TET2... 详细信息

目的探讨血管免疫母T细胞淋巴瘤(AITL)患者RHOA、TET家族羟化酶2(TET2)和甲基化转移酶3a(DNMT3a)基因突变率及临床特征分析。方法应用免疫组化法检测AITL患者组织中RHOA、TET2和DNMT3a的表达。采用多重PCR扩增和测序方法分析RHOA、TET2和DNMT3a突变主要基因型。结果免疫组化结果可知,RHOA阳性表达为68.33%(41/60)、TET2阳性表达为61.67%(37/60)和DNMT3a阳性表达为70.00%(42/60)。RHOA、TET2和DNMT3a阳性表达与血管免疫母T评分明显相关,差异具有统计学意义(P3a阳性表达与AITL患者性别及年龄不具有突变与血管免疫母T细胞淋巴瘤TNM分期、LDH含量、有无B症状及IPI评分明显相关,差异具有统计学意义(P3a突变可以作为诊断AITL的分子标志物,RHOA、TET2和DNMT3a突变可能参与调节AITL发生发展。

关键词：血管免疫母T细胞淋巴瘤 RHOA TET家族羟化酶2 甲基化转移酶3a 基因突变