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甲型肝炎病毒龙甲株结构蛋白基因cDNA序列与国外毒株的比较及在重组痘苗病毒中的表达

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中华实验和临床病毒学杂志 1997年第3期11卷 208-211页

作者：夏国良伊瑶田厚文郭可謇中国预防医学科学院病毒学研究所

将甲型肝炎病毒龙甲株（ＬＪ）结构蛋白基因（包括部分５’端非编码基因，ｎｔ６３０－３０４９）ｃＤＮＡ序列与国外ＨＭ１７５、ＭＢＢ和ＬＡ三个毒株相应区域相比较，结果显示，ＬＪ株结构蛋白基因与ＭＢＢ株的同源性最高，为９６．... 详细信息

将甲型肝炎病毒龙甲株（ＬＪ）结构蛋白基因（包括部分５’端非编码基因，ｎｔ６３０－３０４９）ｃＤＮＡ序列与国外ＨＭ１７５、ＭＢＢ和ＬＡ三个毒株相应区域相比较，结果显示，ＬＪ株结构蛋白基因与ＭＢＢ株的同源性最高，为９６．７％，与ＨＭ１７５和ＬＡ的同源率分别为９５．４％和９１．４％。推导的氨基酸变异率分别为０．９１％，０．９１％和２．９８％。ＬＪ与ＬＡ株氨基酸差异在整个结构蛋白区均有分布，而与ＨＭ１７５和ＭＢＢ的差异仅出现在ＶＰ２和ＶＰ３区。５６种常用限制性内切酶位点分别增加１０、１３和３０个，分别减少１５、１０和２７个，其中ＢｓｔＥⅡ和ＰｖｕⅠ各有一个为ＬＪ株所特有的位点，ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ和ＳａｃⅠ位点四毒株均一致。将ＬＪ株结构蛋白基因（ｎｔ７４５－２９９３）置换ＨＭ１７５株相应基因区域，插入ｐＪＳＡ１１７５表达质粒７．５ｋ启动子下游，经转染和克隆纯化，获得ｖＪＳＡ１１７５ＨＡＶ５ＬＪ重组痘苗病毒。用甲型肝炎病毒单克隆抗体包被，ＥＬＩＳＡ夹心法检测表达产物，效价为１∶１６。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，表达产物与抗－ＶＰ０、抗－ＶＰ１和抗－ＶＰ１、２、３血清特异性结合的带型与已报道ＨＭ１７５重组病毒株的表达产?

关键词：甲型肝炎病毒核苷酸序列痘苗病毒甲型肝炎

甲型肝炎病毒中国流行株5′NCR核苷酸序列异质性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第6期21卷 651-653页

作者：陈勇洪艳杨连华陈念良倪崖凌志强余为群毛江森浙江省医学科学院杭州310013

目的　了解甲型肝炎病毒中国流行株 5′非编码区 (5′NCR)核苷酸序列的异质性。方法　选择浙江、江苏、安徽、云南等地的甲肝病人粪便或血清标本 ,以逆转录套式聚合酶链反应 (RT nPCR) ,扩增合成 5′NCR高变区基因片段 ,并进行直接核... 详细信息

目的　了解甲型肝炎病毒中国流行株 5′非编码区 (5′NCR)核苷酸序列的异质性。方法　选择浙江、江苏、安徽、云南等地的甲肝病人粪便或血清标本 ,以逆转录套式聚合酶链反应 (RT nPCR) ,扩增合成 5′NCR高变区基因片段 ,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果　所有甲型肝炎病毒株间 5′NCR高变区核苷酸差异≤ 3nt;与美国株LA差异≥ 4nt;与澳大利亚株HM175差异≥11nt;差异的大小与基因型无关。结论　甲肝病毒基因结构非常稳定 ,变异率极低。

关键词：甲型肝炎病毒 5'NCR 核苷酸序列异质性

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甲型肝炎病毒疫苗临床试验研究

中华儿科杂志 1995年第4期33卷 243-245页

作者：王逢强朱启镕 200032

甲型肝炎病毒疫苗临床试验研究... 详细信息

甲型肝炎病毒疫苗临床试验研究...

关键词：甲型肝炎甲型肝炎病毒疫苗预防

甲型肝炎病毒龙甲株结构区基因cDNA序列分析及其克隆

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病毒学报 1994年第4期10卷 300-306页

作者：田厚文郭可謇刘崇柏中国预防医科院病毒学研究所

我国的甲型肝炎病毒龙甲株，经免疫捕获病毒颗粒，再进行反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得结构基因区ｃＤＮＡ，用双脱氧法直接测定序列。结果表明，甲肝病毒在结构蛋白基因区有高度的保守性。将我国龙甲株病毒的结构区基因与甲肝... 详细信息

我国的甲型肝炎病毒龙甲株，经免疫捕获病毒颗粒，再进行反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得结构基因区ｃＤＮＡ，用双脱氧法直接测定序列。结果表明，甲肝病毒在结构蛋白基因区有高度的保守性。将我国龙甲株病毒的结构区基因与甲肝病毒ＨＭ１７５野毒株和ＭＢＢ作比较，发现其核苷酸变异率分别为４．５％和３．１％，氨基酸变异均为０．１３％。从结构区基因各区段来看，核苷酸变异主要发生在ＶＰ１和ＰＶ３区域。

关键词：甲型肝炎病毒序列分析结构区基因 cDNA 疫苗

甲型肝炎病毒L-A-1株在人胚肺二倍体细胞2BS株上的遗传稳定性

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中国生物制品学杂志 2021年第8期34卷 898-903页

作者：徐艳玲李昊堃王艺博夏青娟岳立广刘令九长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130012

目的探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)L-A-1株在人胚肺二倍体细胞2BS株(简称2BS细胞)上的遗传稳定性。方法将HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代培养至32代,取23、24、26、28和32代次病毒,检测抗原含量和病毒滴度。RT-PCR扩增各代... 详细信息

目的探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)L-A-1株在人胚肺二倍体细胞2BS株(简称2BS细胞)上的遗传稳定性。方法将HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代培养至32代,取23、24、26、28和32代次病毒,检测抗原含量和病毒滴度。RT-PCR扩增各代病毒HAV1~HAV7基因序列片段,采用DNAMAN软件进行拼接,得到全基因组核苷酸序列,分析不同代次病毒基因组核苷酸和氨基酸同源性;并与GenBank中登录的国内外主要HAV毒株进行同源性分析,同时比对VP1和VP3区氨基酸序列。各代次病毒液经腹腔免疫ICR小鼠,0.5 m L/只,于免疫后28 d,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价。结果HAV L-A-1株23、24、26、28和32代次病毒抗原含量在10240~20480 EU/mL之间,病毒滴度为7.00~7.50 lgCCID50/mL。不同代次HAV L-A-1株病毒全基因组核苷酸和氨基酸序列同源性均为100%;与国内外主要HAV毒株的核苷酸序列同源性为91.40%~99.70%,氨基酸序列同源性为98.20%~99.69%,与L-A-1参考株(AF314208)核苷酸和氨基酸序列同源性最高,分别为99.70%和99.69%;与国内外主要HAV毒株VP1区有5处氨基酸不一致,VP3区有2处氨基酸不一致,与L-A-1参考株(AF314208)和H2减毒株(H2K25株)VP1和VP3区氨基酸序列完全一致。不同代次病毒液免疫ICR小鼠后阳转率均为100%,血清抗体效价在684.69~997.84 mIU/mL之间,各代病毒间差异无统计学意义(P>0.05)。结论HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代后,具有良好的遗传稳定性。

关键词：甲型肝炎病毒 L-A-1株人胚肺二倍体细胞2BS株遗传稳定性

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甲型肝炎病毒减毒株cDNA的分子克隆

科学通报 1991年第2期36卷 147-150页

作者：杨能宇陈勇柴少爱洪艳毛江森浙江省医学科学院病毒病研究所杭州310013

毛江森等成功地研制了甲型肝炎病毒(HAV)减毒株(H2株),动物试验及人体接种观察均证明甲型肝炎病毒H2株是一株对人免疫效果良好的减毒活疫苗毒株。为阐明H2减毒株在分子水平的减毒机理,我们对H2减毒株进行cDNA克隆及序列分析。本文报道H2... 详细信息

毛江森等成功地研制了甲型肝炎病毒(HAV)减毒株(H2株),动物试验及人体接种观察均证明甲型肝炎病毒H2株是一株对人免疫效果良好的减毒活疫苗毒株。为阐明H2减毒株在分子水平的减毒机理,我们对H2减毒株进行cDNA克隆及序列分析。本文报道H2株cDNA的分子克隆。

关键词：甲型肝炎病毒减毒株分子克隆

甲型肝炎病毒灭活试验方法的研究 Ⅰ、甲型肝炎病毒在不同细胞株中的增殖及其免疫荧光法检测

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中国消毒学杂志 1993年第4期10卷 198-201页

作者：史江郑纪山张云南京军区军事医学研完所南京210002

为解决使用细胞培养法进行甲型肝炎病毒灭活试验,经实验证明NJ-3株甲型肝炎病毒可在人肝癌细胞PLC/PRF/5株中快速复制增殖。用免疫荧光法检测,在维持培养5天时即可观察到细胞内典型的HAV特异性荧光颗粒,维持培养10天,TCID_(50)达10^(5.5... 详细信息

为解决使用细胞培养法进行甲型肝炎病毒灭活试验,经实验证明NJ-3株甲型肝炎病毒可在人肝癌细胞PLC/PRF/5株中快速复制增殖。用免疫荧光法检测,在维持培养5天时即可观察到细胞内典型的HAV特异性荧光颗粒,维持培养10天,TCID_(50)达10^(5.5)。该培养系统适用于消毒学试验。

关键词：甲型肝炎病毒细胞培养免疫荧光法

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甲型肝炎病毒3Cpro蛋白的研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 2010年第6期24卷 491-494页

作者：苏秋东毕胜利中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

甲型肝炎病毒（Hepatitis A Virus,简称HAV）是甲型病毒性肝炎的病原学致病因子[1],属小核糖核酸病毒科嗜肝病毒属,无包膜,直径27～32 nm,形态发生上与其他的小核糖核酸病毒无异,为二十面体立体对称结构.

关键词：甲型肝炎病毒 ro蛋白小核糖核酸病毒甲型病毒性肝炎致病因子嗜肝病毒形态发生二十面体

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甲型肝炎病毒H2减毒株的某些遗传特征

中华医学杂志 1993年第6期73卷 335-337页

作者：柴少爱张杭春杭州市，浙江省医学科学院病毒研究所 310013

甲型肝炎病毒H减毒株在KMB细胞36℃连传5代经猴体试验未发现有毒力回升。H减毒株制备的活疫苗人体注射后,未发现有水平传播。38名3～9岁儿童1次口服10TCID,8周后血清甲肝抗体无一人阳转,而同年龄组的经皮下途径接种者,100%阳转。人口服... 详细信息

甲型肝炎病毒H减毒株在KMB细胞36℃连传5代经猴体试验未发现有毒力回升。H减毒株制备的活疫苗人体注射后,未发现有水平传播。38名3～9岁儿童1次口服10TCID,8周后血清甲肝抗体无一人阳转,而同年龄组的经皮下途径接种者,100%阳转。人口服途径不感染是H减毒株的重要遗传特征,有可能作为区别野毒株与减毒株的标记。

关键词：甲型肝炎病毒疫苗