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侵染加工番茄的BBWV2的分子鉴定及田间检测

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石河子大学学报（自然科学版） 2013年第6期31卷 675-679页

作者：张建云许文博刘升学黄家风石河子大学农学院j新疆绿洲农业病虫害治理与植保资源利用自治区普通高校重点实验室石河子832003 大连市农业科学研究院大连116036

利用蚕豆病毒属的兼并引物对23个加工番茄病株进行RT-PCR检测,其中19株检测出被该属病毒侵染。从中选取4个病株的RT-PCR产物进行克隆和测序,将所得序列经过基因库检索发现,4个序列均与蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)基因组RNA1的序列同源性最高... 详细信息

利用蚕豆病毒属的兼并引物对23个加工番茄病株进行RT-PCR检测,其中19株检测出被该属病毒侵染。从中选取4个病株的RT-PCR产物进行克隆和测序,将所得序列经过基因库检索发现,4个序列均与蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)基因组RNA1的序列同源性最高。然后对病毒分离物XJ14-1基因组进行进一步的克隆和测序,获得RNA1组分3659个核苷酸,RNA2组分1300个核苷酸,序列比对结果显示,它们与BBWV2的RNA1和RNA2具有高的序列同源性,分别为76.6%~94%和76.9%~94.1%,而与BBWV1的RNA1和RNA2的序列相似性都很低。因此分子鉴定结果表明,新疆加工番茄受到BBWV2的侵染。利用BBWV2的单克隆抗体对田间不同品种(品系)加工番茄病株进行ELISA检测,结果显示田间病株带毒率达到53.3%,并且供试20品种(品系)均可被BBWV2侵染,该数据表明,BBWV2在田间发生普遍。

关键词：加工番茄蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2) 分子鉴定田间检测

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浅议如何做好马铃薯种薯田间检测工作

种子科技 2017年第9期35卷 71-71,73页

作者：杨博文杨晓红张家口市种子管理站河北张家口075000

马铃薯种薯质量检测中最重要的一项就是田间检测,田间检测主要采取目测方法进行,易操作。田间检测能实时掌握种薯田的情况,通过拔除感病植株,降低田间病害基数,提高种薯质量。

关键词：马铃薯种薯田间检测

利用DAS-ELISA进行番茄花叶病毒的田间检测

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植物病理学报 1999年第2期29卷 157-162页

作者：薛朝阳周雪平青玲李德葆石银鹿张琦浙江大学华家池校区生物技术研究所杭州310029 山西省农科院植保所太原030031

从制备的番茄花叶病毒（ＴｏＭＶ－Ｓ１）抗血清中提纯ＩｇＧ，并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了检测ＴｏＭＶ的ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ系统。利用此检测系统并结合生物学方法，对浙江及山西等地的田间病样进... 详细信息

从制备的番茄花叶病毒（ＴｏＭＶ－Ｓ１）抗血清中提纯ＩｇＧ，并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了检测ＴｏＭＶ的ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ系统。利用此检测系统并结合生物学方法，对浙江及山西等地的田间病样进行测定，结果发现茄子、番茄等茄科作物中均有ＴｏＭＶ的侵染，其中茄子中有５０％左右的发生率，番茄中ＴｏＭＶ发生率南北差异较大，在浙江发生率仅为１０％左右，而在山西有６０．７％的发生率，辣椒中未测到ＴｏＭＶ。这是在我国首次进行ＴｏＭＶ

关键词：番茄花叶病毒 DAS-ELISA 田间检测

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浅谈测土配方施肥技术

江西农业 2024年第16期 65-67页

作者：韩晓然安徽林业职业技术学院安徽合肥230031

伴随着社会经济的快速发展,人们的生活水平也日益提高,对食品安全问题也更加关注。发展绿色农业、生态农业成为农产品生产的趋势,文章着重分析了测土配方施肥技术对于提高土壤肥力以及在农产品生产中的应用,旨在为今后该技术的推广运用... 详细信息

伴随着社会经济的快速发展,人们的生活水平也日益提高,对食品安全问题也更加关注。发展绿色农业、生态农业成为农产品生产的趋势,文章着重分析了测土配方施肥技术对于提高土壤肥力以及在农产品生产中的应用,旨在为今后该技术的推广运用提供一定的参考价值。

关键词：土壤肥力田间检测测土配方施肥技术

膜吸附法结合可视化环介导等温扩增技术检测柑橘黄龙病菌

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中国农业科学 2022年第1期55卷 74-84页

作者：李镇希李文婷黄家权郑正许美容邓晓玲华南农业大学植物保护学院

【背景】柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)是由候选韧皮部杆菌亚洲种(‘Candidatus Liberibacter asiaticus’,CLas)侵染引起的一种柑橘病害。对于该病害的防治主要采取综合措施,包括实施检疫、种植无病苗木、及时挖除病树和集中大面积联... 详细信息

【背景】柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)是由候选韧皮部杆菌亚洲种(‘Candidatus Liberibacter asiaticus’,CLas)侵染引起的一种柑橘病害。对于该病害的防治主要采取综合措施,包括实施检疫、种植无病苗木、及时挖除病树和集中大面积联防联控柑橘木虱等。前3种方法都需要依靠准确的柑橘黄龙病诊断技术。【目的】利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP),结合膜吸附法DNA快速提取和Gelgreen荧光染料可视化,建立黄龙病田间核酸快速检测方法。【方法】以黄龙病菌β-操纵子与原噬菌体DNA聚合酶基因为模板设计LAMP特异性引物,包括外引物F3/B3、内引物FIP/BIP、环引物LoopF/LoopB和茎引物StemF/StemB。通过对环引物和茎引物设定不同的用量组合,对LAMP引物体系进行优化,确定合适的引物浓度。用优化后的LAMP引物体系对188份田间柑橘叶片进行检测,并构建受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析实时荧光LAMP(qLAMP)在CLas检测上的准确性。对qLAMP预混反应液进行两步的常温干燥,分别设定不同的存放条件,评估LAMP常温干燥试剂的稳定性。用本研究建立的CLas可视化LAMP快速检测方法,对田间71个柑橘叶片样品和35个柑橘果实样品进行检测,与实时荧光定量PCR(qPCR)比较两者的符合率。【结果】在LAMP体系中加入环引物、茎引物或增加其浓度都能促进反应速率的提升,并且同时加入终浓度均为1.6μmol·L-1的环引物和茎引物能进一步提高LAMP反应速率。LAMP预混液通过两步法干燥在不同温度存放1—4周均能保持反应活性基本不变,表明制备的两步法干燥LAMP试剂检测性能较好,在低温和常温环境下的稳定性尚可,仅35℃高温存放会略微增加LAMP试剂的反应时间。使用孔径0.1μm尼龙膜代替纤维素滤纸作为核酸吸附材料能提升CLas快速诊断技术的灵敏度。结合DNA快速提取和可视化LAMP建立的CLas快速核酸诊断方法最低能检测到浓度为102 copies/μL的重组质粒样品,总体准确率高。经配对卡方检验,该方法的诊断结果与qPCR无显著差异。可视化LAMP快速检测相较常规检测有着更低的成本和耗时,而且可视化LAMP快速检测无需离心机和PCR仪等昂贵的仪器,仅需一台65℃恒温设备即可。【结论】建立的CLas快速核酸检测方法成本低,30 min即可观察到检测结果,操作简便,准确性高,可替代qPCR在田间进行黄龙病的快速鉴定。

关键词：柑橘黄龙病候选韧皮部杆菌亚洲种田间检测膜吸附法 DNA快速提取可视化环介导等温扩增技术

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烟草青枯病菌田间快速检测的初步研究

烟草青枯病菌田间快速检测的初步研究

葡萄卷叶伴随病毒-3 RT-LAMP检测体系的建立与应用

中国植物保护学会2009年学术年会

作者：杜桂萍肖启明邓金奇刘丹罗亚丹湖南农业大学生物安全科技学院

烟草青枯病是一种由烟草青枯病菌（Ralstonia solanacearum）引起的细菌性病害,对烟草的产量和质量影响极大,是烟草上的一大毁灭性病害。了解土壤中青枯菌含量与青枯病发生轻重的关系,对其防治有着重要意义。为此,我们配制一种选择培养... 详细信息

烟草青枯病是一种由烟草青枯病菌（Ralstonia solanacearum）引起的细菌性病害,对烟草的产量和质量影响极大,是烟草上的一大毁灭性病害。了解土壤中青枯菌含量与青枯病发生轻重的关系,对其防治有着重要意义。为此,我们配制一种选择培养基,以便能快速的检测出带菌土壤中的青枯菌数量,通过菌量的多少来预测烟草青枯病的发生动态。研究内容包括3个方面:①通过平板菌落计数法确定了7种抗生素对烟草青枯菌生长的最适浓度:安必先的最佳浓度为0.006mg/ml,氧氟沙星为0.015mg/ml,罗红霉素为0.03mg/ml,头孢拉定为0.04mg/ml,乙酰螺旋霉素为0.02mg/ml和阿奇霉素为0.005mg/ml,克拉霉素为0.025mg/ml;②确定了7种抗生素的最佳配比浓度:通过正交试验得出了7种药剂的最佳浓度组合配比:安必先的最佳配比浓度为0.002mg/ml,氧氟沙星的最佳浓度为0.000 01mg/ml,罗红霉素,头孢拉定,乙酰螺旋霉素和阿奇霉素分别为0.000 04mg/ml、0.012mg/ml、0.002mg/ml、0.001mg/ml,克拉霉素为0.000 05mg/ml;③利用以上最佳浓度配比的选择培养基来检测土样中青枯菌:湘西土家族、苗族自治州土样中青枯菌含量较大,郴州,永州次之,湖南农大土壤中含菌量最少,与青枯病发生的严重程度呈正相关,其中加青枯菌拮抗菌肥土壤中含量明显少于未加菌肥土壤。试验表明,利用抗生素不同组合配制成的选择培养基对土壤中检测青枯菌有较好的效果,且能抑制绝大部分的土壤其他真菌、细菌。我们将扩大试验,大量检测不同土壤,进一步肯定其有效性。

关键词：烟草青枯病菌田间检测

来源： cnki会议评论

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核农学报 2023年第11期37卷 2166-2174页

作者：张强强王雯雯闫思远李玲王若彤顾沛雯宁夏大学林业与草业学院宁夏银川750021 宁夏大学农学院宁夏银川750021

为实现葡萄生产中对葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)的快速检测。本研究以GLRaV-3的CP基因序列(GenBank登录号:KC477128.1)为靶序列设计并合成了3对逆转录环介导恒温扩增技术(RTLAMP)引物,建立并优化GLRaV-3的RT-LAMP检测方法。结果表明,... 详细信息

为实现葡萄生产中对葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)的快速检测。本研究以GLRaV-3的CP基因序列(GenBank登录号:KC477128.1)为靶序列设计并合成了3对逆转录环介导恒温扩增技术(RTLAMP)引物,建立并优化GLRaV-3的RT-LAMP检测方法。结果表明,该方法能够实现在恒温64℃下反应1 h完成对GLRaV-3的检测,引物GLRaV3-LAMP-Ⅰ特异性高,不与GLRaV-1~2、葡萄扇叶病毒、沙地葡萄茎痘相关病毒、葡萄病毒A、灰皮诺葡萄病毒和葡萄浆果内坏死病毒等7种葡萄常见病毒发生交叉反应;RNA最低检测限为10 pg·μL^(-1),灵敏度是逆转录PCR(RT-PCR)的10倍。田间样品检测验证结果表明,该方法与常规RT-PCR法检测一致率为100%。综上,本研究建立的GLRaV-3 RT-LAMP检测体系具有高特异性、高灵敏度和实用性强等特点,可应用于田间葡萄卷叶病样的检测。

关键词：葡萄卷叶伴随病毒3 RT-LAMP 引物筛选反应条件优化田间检测

葡萄白粉病菌环介导等温扩增检测体系的建立与应用

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中国果树 2022年第10期 22-29页

作者：王雯雯刘心缘马云妮顾沛雯宁夏大学农学院银川750021

为了建立高效准确的葡萄白粉病菌(Uncinula necator)环介导等温扩增(LAMP)检测体系,为葡萄白粉病的早期诊断和监测预警提供依据,根据葡萄白粉病菌细胞色素P450全长基因序列设计合成3组LAMP引物并进行筛选,对包括葡萄白粉病菌在内的11种... 详细信息

为了建立高效准确的葡萄白粉病菌(Uncinula necator)环介导等温扩增(LAMP)检测体系,为葡萄白粉病的早期诊断和监测预警提供依据,根据葡萄白粉病菌细胞色素P450全长基因序列设计合成3组LAMP引物并进行筛选,对包括葡萄白粉病菌在内的11种植物病原真菌的DNA进行LAMP扩增,检测体系的特异性,建立并优化葡萄白粉病菌LAMP反应体系,评价体系的灵敏性。使用优化后的检测体系扩增田间发病叶片的总DNA,检测所建立体系的实用性。LAMP最佳反应条件是:以UNITF3-1/UNITB3-1为外引物,以UNITFIP-1/UNITBIP-1为内引物,62℃反应60 min,Bst DNA聚合酶浓度为0.320 U/μL,甜菜碱浓度为0.8 mol/L,dNTPs浓度为2.6 mmol/L,Mg浓度为4.8 mmol/L,内外引物配比为6∶1,能够检测出葡萄白粉病菌DNA,灵敏度为1 pg/μL。应用已建立的检测体系对田间采集的病叶样品进行检测,能够检测到葡萄白粉病菌,准确率达100%。综上,建立的葡萄白粉病菌LAMP检测体系特异性强、灵敏度高,可用于田间葡萄白粉病菌的检测。

关键词：葡萄白粉病菌 LAMP 引物筛选反应条件优化田间检测

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柑橘木虱对环氧虫啶的抗性风险评估

柑橘木虱对环氧虫啶的抗性风险评估

作者：张秋宇西南大学

学位级别：硕士

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是全球广泛存在的毁灭性病害,对柑橘产业造成了不可估量的经济损失。柑橘木虱不仅是柑橘萌发新梢时期的害虫,还是柑橘黄龙病的传播媒介昆虫,其防治对柑橘产业的健康发展尤为重要。由于柑橘木虱的... 详细信息

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是全球广泛存在的毁灭性病害,对柑橘产业造成了不可估量的经济损失。柑橘木虱不仅是柑橘萌发新梢时期的害虫,还是柑橘黄龙病的传播媒介昆虫,其防治对柑橘产业的健康发展尤为重要。由于柑橘木虱的田间防控仍然依赖化学杀虫剂,同时单一大量的用药导致柑橘木虱对常用的杀虫剂产生了不同程度的抗性。目前,急需寻求能延缓和无明显交互抗性的能防治柑橘木虱的新型农药。环氧虫啶是我国自主研发的一款新烟碱类农药,具有独特的顺式硝基结构,是乙酰胆碱受体拮抗剂,与以吡虫啉为代表的新烟碱类杀虫剂作用机制不同,理论上不会与之产生交互抗性,因此可以作为传统新烟碱类杀虫剂的轮换药剂。目前对环氧虫啶的研究聚焦于白背飞虱、褐飞虱、桃蚜和棉蚜等害虫,在柑橘木虱上尚未广泛应用。为评估环氧虫啶对柑橘木虱的防治潜力及抗性风险,本研究开展了柑橘木虱对环氧虫啶及其它4种常用药剂在广西桂林、南宁两地的田间抗药性检测,探究了环氧虫啶亚致死浓度LC对柑橘木虱各发育阶段生命活动及种群发生动态的影响,开展了柑橘木虱对环氧虫啶的抗性风险评估和抗性发展预测,初步分析了柑橘木虱对环氧虫啶的解毒代谢机理。本研究主要结果如下:1.选择多年不接触药剂的柑橘木虱作为敏感品系,通过浸叶法测定5种药剂的敏感基线,并以此对广西桂林和南宁两地规范管理果园的柑橘木虱进行田间抗性检测。结果显示,桂林和南宁两地规范管理果园的柑橘木虱对5种药剂均有不同程度的抗性。桂林地区规范管理果园柑橘木虱对噻虫嗪、环氧虫啶较为敏感,对吡虫啉、甲氰菊酯、呋虫胺分别为低、中、高水平抗性。南宁地区规范管理果园柑橘木虱对噻虫嗪和甲氰菊酯具有低水平抗性,对呋虫胺表现中抗,对环氧虫啶和吡虫啉较为敏感。2.环氧虫啶亚致死浓度LC处理柑橘木虱成虫,显著降低柑橘木虱(F代)产卵量,孵化率。亚致死效应持续影响柑橘木虱子一代(F)种群数量增长,有效控制了害虫种群数量。具体表现为显著延缓F代的发育速率,子一代各龄若虫发育历期均延长;l曲线表明在亚致死浓度LC处理下,柑橘木虱成虫特定时间存活率与存活时间均显著降低;m曲线表明亚致死浓度处理后柑橘木虱繁殖受到明显抑制作用。综上所述,环氧虫啶LC处理抑制柑橘木虱子一代种群数量的增长。3.采用环氧虫啶对柑橘木虱抗性筛选过程中,柑橘木虱对环氧虫啶的抗性发展整体呈现先缓慢后加快的上升趋势,筛选10代,柑橘木虱对环氧虫啶产生了7.40倍抗性。F-F代估算抗性现实遗传力为0.0395。根据现实遗传力结果预测,当田间防效在70%-90%时,连续不间断使用环氧虫啶防治柑橘木虱,其抗性上升10倍需18-27代。间断或者与其它药剂交替使用情况下,即田间防效在20%左右时,抗性上升10倍需要88代。结果表明,如果连续使用环氧虫啶进行柑橘木虱的防治,柑橘木虱对环氧虫啶具有一定的抗性风险,但若和其他药剂交替使用,风险则会大大降低。4.利用酶抑制剂磷酸三苯酯TPP、顺丁烯丁酸二乙酯DEM和增效醚PBO初步探究了柑橘木虱体内解毒代谢酶在其对环氧虫啶抗性产生中的作用。结果显示,多功能氧化酶在柑橘木虱对环氧虫啶的抗性中起主要作用,酯酶和谷胱甘肽S-转移酶不起作用。进一步观察柑橘木虱抗环氧虫啶品系筛选过程中,其体内解毒代谢酶活性变化情况发现,柑橘木虱对环氧虫啶的代谢抗性主要与其体内Car E、GSTs以及P450酶活力上升有关,并且P450酶活上升在柑橘木虱对环氧虫啶的代谢抗性形成中起主导作用。

关键词：柑橘木虱环氧虫啶田间检测亚致死效应抗性风险评估解毒酶