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地衣芽孢杆菌对部分水果采后病害生防机理及其防病作用研究

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地衣芽孢杆菌对部分水果采后病害生防机理及其防病作用研究

作者：凌筝扬州大学

学位级别：硕士

地衣芽孢杆菌W10菌株是一株新型生防细菌,可以代谢抗菌蛋白。该细菌及其抗菌蛋白对水果贮藏期的苹果轮纹病菌（Botryosphaeria berengeriana f. sp. Piricola）、炭疽病菌（Glomerella cingulata）和柑桔青霉病菌（Penicillium sp.）具... 详细信息

地衣芽孢杆菌W10菌株是一株新型生防细菌,可以代谢抗菌蛋白。该细菌及其抗菌蛋白对水果贮藏期的苹果轮纹病菌（Botryosphaeria berengeriana f. sp. Piricola）、炭疽病菌（Glomerella cingulata）和柑桔青霉病菌（Penicillium sp.）具有拮抗作用;对苹果、柑桔采后的轮纹病、炭疽病和青霉病有较好的防病作用。W10菌液、培养滤液、抗菌蛋白对3种病原菌菌丝形态和生长都有明显的破坏与抑制作用。对菌丝形态的破坏主要表现为使菌丝肿胀;原生质收缩,菌丝细胞内出现空泡;菌丝膨大成泡囊;菌丝扭曲;菌丝细胞原生质渗漏;菌丝细胞壁裂解,菌丝断裂等。菌液、培养滤液和抗菌蛋白对病菌的作用方式一致,但是菌液处理的病菌菌丝被破坏程度更为严重。培养滤液及其抗菌蛋白稀释10倍时,对轮纹病菌菌丝的作用最强,抑制率为100%,对炭疽病菌的抑制率分别达90.2%、94.9%,对青霉病菌的抑制作用稍弱,分别为50.1%和77.5%。W10对病菌的产孢、孢子萌发和芽管生长也有一定影响。抗菌蛋白稀释20倍时,对轮纹病菌和炭疽病菌的产孢、孢子萌发和芽管生长的抑制率都达到100%,虽然对青霉病菌的抑制作用有所下降,但对产孢、孢子萌发和芽管生长的抑制率仍分别达到75.3%、86.8%和68.4%。以上结果说明W10具有防治上述3种水果贮藏期病害的潜力,但对不同病菌的效果有一定差异。生防细菌W10能够在苹果和柑桔果表定殖,时间均超过15d,定殖能力与温、湿度、引进细菌的浓度、水果果面有无病菌等因子有关。生防细菌定殖的最佳条件一般为:温度15℃,相对湿度95-100%。在一定的温度范围内（5-15℃）,温度越高,越有利于细菌的生长与定殖。生防菌的定殖能力还与最初引进的细菌浓度呈正相关,即引进的浓度越高,定殖时间越长,果面菌量也越大。引进细菌浓度为1010cfu/ml时,15d后在苹果果表的菌量仍为6.19×10～2cfu/cm,30d后在柑桔上的菌量仍为1.06×10～2cfu/cm。水果果面有病菌存在时对生防菌定殖有较大影响,引进生防细菌24h后接种病原菌的果实,其表面菌量要比生防细菌与病原菌同时接种,或接种病原菌后24h再接种生防细菌的菌量大,即病菌先于生防菌占领果面对生防菌的定殖不利。比较生防细菌在苹果和柑桔上的定殖,以柑桔果实更有利于细菌定殖,表现在定殖时间长,菌量多。生防细菌W10及其抗菌蛋白对3种水果采后病害都有防治作用,防效与多菌灵相似。最高防效为抗菌蛋白使用15d时对苹果轮纹病的防治,达66.7%;90d时防效仍达到50.0%。对柑桔青霉病的防效稍低,但75d时仍达28.6%。环境条件对菌液与抗菌蛋白的防效有一定影响,但一般对抗菌蛋白的影响要小于对菌液的影响。防治苹果轮纹病、炭疽病,在低温10℃、低湿度RH 35-40%条件下,用高浓度菌液（1010cfu/ml）或抗菌蛋白在病菌定殖前处理苹果果实能收到较好的防病效果;其中15℃对苹果轮纹病、炭疽病和柑桔青霉病的防治都是最有利的使用温度。在适宜生防菌发挥生防作用的条件下,生防菌不仅可以抑制病斑扩展,而且可以推迟果实的发病期,在防治苹果轮纹病、炭疽病中,可推迟发病期达20d以上。生防菌及其抗菌蛋白与钙离子结合使用可以提高生防菌的防病效果。在抗菌蛋白中加入钙离子对苹果炭疽病的防效达到100%,比单独使用抗菌蛋白提高了29.3%;对柑桔青霉病的防效比单独使用抗菌蛋白提高了7.7%。

关键词：地衣芽孢杆菌苹果轮纹病菌苹果炭疽病菌柑桔青霉病菌生物防治生防机理定殖

植物病原真菌拮抗菌TG116的鉴定、生物学特性及生防机理研究

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植物病原真菌拮抗菌TG116的鉴定、生物学特性及生防机理研究

作者：雷蕾西北师范大学

学位级别：硕士

植物真菌病害导致的农作物减产和采后损失一直以来都是阻碍农业生产的关键问题之一,生物防治植物真菌病害因为在应用中具有对环境安全、无污染、特异性强、不产生抗药性等优点而受到越来越多的关注。内生菌可以被用来防治植物真菌病害,... 详细信息

植物真菌病害导致的农作物减产和采后损失一直以来都是阻碍农业生产的关键问题之一,生物防治植物真菌病害因为在应用中具有对环境安全、无污染、特异性强、不产生抗药性等优点而受到越来越多的关注。内生菌可以被用来防治植物真菌病害,并且部分菌株已经被研发成生物农药用于农业生产当中。独角莲具有广泛的药理作用和丰富的化学成分,并且在生长过程中不易感染病虫害,联系植物内生菌的广泛生物学功能推测,与独角莲长期协同进化的内生菌也可能具有一定的独特性和研究价值,已有研究也表明药用植物中含有丰富的生物防治资源菌,但关于独角莲内生菌的研究还未见报道。为了给生物防治植物真菌病害提供新的菌种资源,本研究对独角莲中的内生菌进行了分离,并筛选得到了一株广谱植物病原真菌拮抗菌TG116,测定了菌株TG116对植物病原真菌的抑菌谱和抑菌特性,通过盆栽防病试验对其生防潜能进行了进一步的验证和探索,利用形态学、生理生化及分子生物学方法对其进行了鉴定,并对其生物学特性和有关生物防治植物病害的机理进行了研究,结果如下:(1)菌株TG116能够拮抗供试的7种不同植物病原真菌,抗菌谱较广,并且可以使植物病原真菌菌丝原生质外渗,菌丝中空、形态扭曲、变形等,菌株TG116浸种和灌根的处理在盆栽防病试验中也有较好防治效果,随着TG116菌液处理后接种植物病原真菌间隔时间的延长,防病效果也有所提高,TG116胞外代谢产物和菌体都有一定的防病效果。(2)菌株TG116的形态学及生理生化特征和地衣芽孢杆菌相吻合,16S rRNA序列的分析比对结果显示其与地衣芽孢杆菌的同源性高达99%,因而将菌株TG116鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。(3)菌株TG116培养8-16 h生长处于对数期,16 h后进入稳定期,48 h后进入衰退期;最适接种量为1%;在20-60℃的温度范围内都能够生长,45℃为最适生长温度;在pH 3.0-9.0的范围内都能够生长,最适生长pH为7.0;在1%的NaCl渗透压条件下生长最好;对供试碳源、氮源利用率最高的分别为纤维二糖和酵母粉;菌株TG116对环境的适应能力较强。(4)在一定时间段内经菌株TG116诱导的处理黄瓜叶片中PAL、POD、PPO活性都显著高于未经其诱导的处理,与植物病原真菌共同接种时以上酶活性升高的幅度比单独接种菌株TG116的大,说明同时接种病原菌有利于菌株TG116诱导抗性的表达;单独接种菌株TG116后,黄瓜叶片中SOD活性也有所上升,但上升幅度并不明显,MDA含量变化不大且略低于对照水平;菌株TG116能够分泌蛋白酶和纤维素酶。推测菌株TG116的生物防治机理包括了诱导植物PAL、POD、PPO等相关防御酶的活性升高,降低活性氧类物质的含量,减轻膜脂质过氧化损伤,分泌病原真菌胞壁降解酶等多个方面的协同综合作用。

关键词：菌株TG116 分离鉴定生物学特性生防机理

水稻纹枯病生防用木霉菌分离鉴定及生防机理研究

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水稻纹枯病生防用木霉菌分离鉴定及生防机理研究

作者：王伟延边大学

学位级别：硕士

本文采用稀释涂布平板法从不同植物根际土样中分离纯化出20株木霉菌菌株,通过室内平板对峙培养试验得出D1菌株对水稻纹枯病菌的抑制作用较强,抑菌率达80.82%;通过发酵浓缩液对水稻纹枯病菌的抑菌试验得出D1菌株发酵浓缩液对水稻纹枯病... 详细信息

本文采用稀释涂布平板法从不同植物根际土样中分离纯化出20株木霉菌菌株,通过室内平板对峙培养试验得出D1菌株对水稻纹枯病菌的抑制作用较强,抑菌率达80.82%;通过发酵浓缩液对水稻纹枯病菌的抑菌试验得出D1菌株发酵浓缩液对水稻纹枯病菌的抑菌作用较强,抑菌率达69.55%。综合研究结果筛选出D1菌株作为水稻纹枯病生防用木霉菌,经形态学和分子学初步鉴定D1菌株为短密木霉（Trichoderma brevicompactum）。将D1菌株与8种植物病原菌进行对峙实验后得出D1菌株对8种植物病菌均具有较强的抑菌作用,抑菌率在63.03%～95.18%之间。在20～30℃和pH 4～5时D1菌株对水稻纹枯病菌的抑菌效果最好,抑菌率分别为76.15%～80.70%和78.57%～78.77%。供试5种杀菌剂对D1菌株菌丝生长毒力不同,其EC50值为0.042～384.24 mg/L,但田间常用浓度下抑菌率均较高,为75.8%～100%。从D1菌株对水稻纹枯病的盆栽防病试验得出D1菌株不仅不会引起稻株发病,对水稻植株是安全的,还增加水稻的产量,与无菌水处理相比提高了 27.41%,对水稻的生长有一定的促进作用;D1菌株对水稻纹枯病的防治效果在51.09%～70.64%之间,其中先用D1菌株处理24 h后接病菌的防效最高,其次是同时接菌处理,先接病菌24 h后用D1菌株处理的防效最低;使用病菌和D1菌株处理的结实率、千粒重和产量显著高于只接病菌处理,减少产量损失率为54.55%～96.37%;D1菌株对水稻纹枯病有预防和治疗作用,其中预防作用优于治疗作用。从D1菌株的生防机理研究结果得出D1菌株对水稻纹枯病菌具有抗生、竞争、重寄生作用,并能诱导稻株抗性和促进稻株增产作用。D1菌株发酵浓缩液抗生活性物质对热有较高的稳定性,喜微酸环境,在强碱性环境下易被破坏,并且不具有挥发性。只接水稻纹枯病菌能诱导稻株体内防御酶活性增加,但病菌和D1菌株处理能降低稻株体内的防御酶活性,但仍高于只接D1菌株和无菌水处理的对照的防御酶活性。D1菌株不能单独提高水稻叶片内叶绿素含量,能提高接水稻纹枯病菌的水稻叶片叶绿素含量,但不超过不接病菌的对照。D1菌株在25～30℃、pH 6～8和PDA浓度为75%～100%生长最快,在25℃、pH 7和PDA浓度100%产孢最多。D1菌株在不同单因素条件下发酵后与水稻纹枯病菌进行对峙实验后得出最佳发酵时间为3d,温度为25℃,装液量为100 mL（250 mL）,初始pH值为原始pH即6.2,转数为160 r/min,碳源为葡萄糖2.43%,氮源为蛋白胨0.32%,无机盐为硫酸镁0.13%。

关键词：水稻纹枯病木霉菌生防机理防御酶

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荧光假单胞菌生防机理的研究进展

生物学杂志 2007年第3期24卷 9-11,24页

作者：张伟琼聂明肖明上海师范大学生命与环境科学学院上海200234

荧光假单胞菌是植物根际促生细菌(Plant Growth Promoting Rhizobacteria,PGPR)具有分布广、数量多、营养需要简单、繁殖快、竞争定殖力强的特点。它们能通过产生多种次生代谢物及有效的根际定殖防治植物病害,成为植物生防控制的重要研... 详细信息

荧光假单胞菌是植物根际促生细菌(Plant Growth Promoting Rhizobacteria,PGPR)具有分布广、数量多、营养需要简单、繁殖快、竞争定殖力强的特点。它们能通过产生多种次生代谢物及有效的根际定殖防治植物病害,成为植物生防控制的重要研究对象。主要论述了荧光假单胞菌对植物病害生物防治机理的研究进展。

关键词：荧光假单胞菌生防机理植物病害

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水稻内生颉颃细菌的筛选及生防机理研究

江西农业学报 2009年第5期21卷 70-73页

作者：杨敬辉朱桂梅潘以楼庄义庆江苏省镇江市农业科学研究所江苏句容212400

从20个水稻品种中分离得423个内生细菌。采用对峙培养法筛选出对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solaniKühn)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)和水稻恶苗病菌(Fusarium moniliform eSheld)有显著抑菌作用的内生颉颃细菌75株。测定了各颉... 详细信息

从20个水稻品种中分离得423个内生细菌。采用对峙培养法筛选出对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solaniKühn)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)和水稻恶苗病菌(Fusarium moniliform eSheld)有显著抑菌作用的内生颉颃细菌75株。测定了各颉颃细菌胞外酶(蛋白酶、几丁质酶和纤维素酶)活性和次生代谢物(噬铁素)活性,初步揭示了其抑菌机理。

关键词：水稻内生颉颃细菌生防机理

1株解淀粉芽胞杆菌B10-26生防机理的初步研究

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1株解淀粉芽胞杆菌B10-26生防机理的初步研究

毛竹内生拮抗细菌对食用菌病害的生防机理研究

中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学...

作者：赵辉刘红彦刘新涛倪云霞刘玉霞河南省农业科学院植物保护研究所/农业部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室/河南省农作物病虫害防治重点实验室

利用平皿对峙法获得了1株对芝麻茎点枯病菌、芝麻枯萎病菌、棉花黄萎病菌、西瓜枯萎病菌、小麦纹枯病菌和小麦赤霉病菌具有较好抑菌效果,而且抑菌活性物质热稳定性较好的解淀粉芽胞杆菌B10-26。以B10-26为研究对象,对其生防机理、抑菌... 详细信息

利用平皿对峙法获得了1株对芝麻茎点枯病菌、芝麻枯萎病菌、棉花黄萎病菌、西瓜枯萎病菌、小麦纹枯病菌和小麦赤霉病菌具有较好抑菌效果,而且抑菌活性物质热稳定性较好的解淀粉芽胞杆菌B10-26。以B10-26为研究对象,对其生防机理、抑菌活性物质及其相关基因进行了初步研究。结果表明,B10-26具有较好的营养和空间竞争能力;其代谢产物中的活性物质能有效地抑制真菌菌丝生长,并且能造成真菌菌丝畸形;B10-26的发酵液对植物出苗、根系发育和幼苗生长有显著的促进作用。通过PCR检测和测序分析,确定B10-26具有ituA、fenB、srfAD、zmaR、baeB和bglS基因,利用Real-Time PCR分析其抗生素相关基因表达,确定B10-26的bglS和baeB基因表达量最高。B10-26代谢产物中的抑菌活性物质分析结果表明,其代谢产物中含有bacillomycin D、fengycin A、fengycin B、mycosubtilin、surfactin和dihydrobacillaene等抑菌活性物质,其中Fengycin和BacillomycinD含量最高,其次是mycosubtilin,而surfactin和dihydrobacillaene的含量较少,这与酯肽类抗生素相关基因表达分析结果相同。另外,在B10-26代谢产物中还发现了抑菌活性物质生物合成酶bacillaene synthesis和polyketide synthase,因此推测B10-26还可能产生多烯类和聚酮类抗生素。

关键词：解淀粉芽胞杆菌 B10-26 生防机理

来源： cnki会议评论

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安徽农业科学 2022年第8期50卷 126-128,140页

作者：袁宗胜闽江学院海洋研究院福建福州350108

研究了毛竹内生拮抗细菌JL-B05和JL-B16对3种食用菌病原菌的生防机理。结果表明,不同浓度内生拮抗细菌过滤液和灭菌液对病原菌菌丝生长均具有显著的抑制效果,其中浓度为20%的内生拮抗细菌JL-B05过滤液对病原菌菌丝生长的抑制效果最好,... 详细信息

研究了毛竹内生拮抗细菌JL-B05和JL-B16对3种食用菌病原菌的生防机理。结果表明,不同浓度内生拮抗细菌过滤液和灭菌液对病原菌菌丝生长均具有显著的抑制效果,其中浓度为20%的内生拮抗细菌JL-B05过滤液对病原菌菌丝生长的抑制效果最好,对疣孢病菌的抑制率达86.37%,对油疤病菌的抑制率为78.81%,对蛛网病菌的抑制率为76.76%,抑制效果均优于内生拮抗细菌JL-B16过滤液。浓度为20%的内生拮抗细菌JL-B16灭菌液对油疤病菌菌丝生长的抑制率为72.11%,对疣孢病菌抑制率为62.51%,对蛛网病菌的抑制率为61.88%,抑制效果均优于内生拮抗细菌JL-B05灭菌液。在内生拮抗细菌发酵液和灭菌液对病原菌孢子萌发抑制效果测定中,浓度为40%内生拮抗细菌JL-B05、JL-B16过滤液和灭菌液对3个病原菌的抑制效果均较为显著。内生细菌JL-B05、JL-B16挥发性物质对病原菌菌丝生长均表现出一定的抑制作用。

关键词：毛竹内生拮抗细菌食用菌病害生防机理

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魔芋内生拮抗细菌生防机理研究

湖南农业大学学报（自然科学版） 2014年第3期40卷 262-266页

作者：周丽洪姬广海王永吉李淼杨俊魏兰芳云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 云南农业大学农科基础实验教学中心云南昆明650201

对自选魔芋内生拮抗细菌M3、1–7、M2的生防机理进行研究,结果表明,魔芋内生菌M3、1–7、M2具有广谱抗性,3株菌及其代谢粗提物对不同致病力的魔芋软腐病菌均有拮抗作用;3株拮抗菌分别含有不同的抗菌素基因,1–7与魔芋软腐病菌MY9的相似... 详细信息

对自选魔芋内生拮抗细菌M3、1–7、M2的生防机理进行研究,结果表明,魔芋内生菌M3、1–7、M2具有广谱抗性,3株菌及其代谢粗提物对不同致病力的魔芋软腐病菌均有拮抗作用;3株拮抗菌分别含有不同的抗菌素基因,1–7与魔芋软腐病菌MY9的相似营养系数最高,达90.63%;M3在魔芋根际及体内定殖能力均为最强,可达8.2×107 CFU/g;接种时间、接种量及接种方式对生防效果影响较大,生防效果与拮抗菌接种量呈正相关,接种病原菌前1 d接种拮抗菌生防效果最优,球包衣的防治效果优于灌根,M3包衣防效可达79.15%;施入拮抗菌后,魔芋体内和根际土壤微生物群落对底物代谢碳源利用的丰富度和代谢活性明显提高。

关键词：魔芋胡萝卜软腐果胶杆菌内生细菌生防机理

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烟草赤星病拮抗菌的筛选及其生防机理初探

山西农业大学学报(自然科学版) 2024年

作者：孙伟霖颜霞高剑欣崔传斌王平平王娜娜杨明明黄丽丽西北农林科技大学生命科学学院中国烟草总公司陕西省烟草公司西北农林科技大学植物保护学院

[目的]本研究以烟草赤星病菌为靶标菌，筛选对其拮抗效果较好的生防菌，并对其进行后续的鉴定，同时初步设计试验验证生防机理，为烟草赤星病的拮抗生防菌资源、拮抗菌剂的制备等提供新的参考。[方法]采用初筛复筛获得生防菌；绘制系统... 详细信息

[目的]本研究以烟草赤星病菌为靶标菌，筛选对其拮抗效果较好的生防菌，并对其进行后续的鉴定，同时初步设计试验验证生防机理，为烟草赤星病的拮抗生防菌资源、拮抗菌剂的制备等提供新的参考。[方法]采用初筛复筛获得生防菌；绘制系统发育树鉴定、抑菌谱系测定、菌株产酶活性测定、对赤星病病菌菌丝生长和孢子萌发的影响、诱抗定量检测、离体叶片防效等方法验证生防机理。[结果]（1）筛得2株对于赤星病菌拮抗效果较好的生防菌，经由16S rDNA鉴定发现其分别是枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）X768与贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）703；并完成了两株生防芽孢杆菌的抑菌谱系测定，证明其均具有抑菌广谱性；（2）对其生防机理探究过程中，菌株703具备产生纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶的能力，菌株X768具备产生纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的能力；两株生防芽孢杆菌均可抑制赤星病孢子的萌发和影响菌丝正常生长的形态，对于病原菌具有较强的抑制作用；（3）使用qRT-PCR法验证了生防菌对烟草防御基因通路（SA、JA、ET等通路）的影响，其中应用菌株703处理后烟草应用防御通路可能与SA通路、JA通路和泛素连接酶通路相关；而使用菌株X768处理后烟草应用防御通路可能与SA通路和泛素连接酶通路相关。[结论]筛得的具有抑制烟草赤星病作用的生防菌株B. subtilis X768与B. velezensis 703，抑菌谱较广，均可较强效果地抑制赤星病孢子的萌发和菌丝生长，并且两株生防菌均可引起烟草防御基因通路的上调，离体叶片防效效果较好。

关键词：烟草赤星病拮抗菌生物防治生防机理