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马铃薯疮痂病拮抗菌JYC1217的鉴定及其生防促生特性

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植物保护学报 2024年第3期 684-697页

作者：黄勋丰加文金春林邓琳梅张潇方徐亚锦杨艳丽刘霞云南农业大学植物保护学院曲靖市马龙区农业农村局

为获得防治马铃薯疮痂病的优良微生物资源，从健康马铃薯根际土壤中分离获得菌株JYC1217，采用平板对峙培养法和抑菌圈法测定其抑菌活性，结合形态学特征、生理生化特性和分子生物学方法对该菌株进行鉴定，并测定该菌株的生防能力、促... 详细信息

为获得防治马铃薯疮痂病的优良微生物资源，从健康马铃薯根际土壤中分离获得菌株JYC1217，采用平板对峙培养法和抑菌圈法测定其抑菌活性，结合形态学特征、生理生化特性和分子生物学方法对该菌株进行鉴定，并测定该菌株的生防能力、促生能力及对马铃薯疮痂病的防效。结果显示，菌株JYC1217及其培养液均能显著抑制酸性疮痂链霉菌Streptomyces acidiscabies和肿痂链霉菌S. turgidiscabies的生长；经鉴定菌株JYC1217为多黏类芽胞杆菌Paenibacillus polymyxa；该菌株对马铃薯疮痂病的相对防效为35.12%，对晚疫病菌Phytophthora infestans和早疫病菌Alternaria alternata有抑制作用，抑制率分别为62.96%和64.24%；该菌株能产生β-1,3葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶和嗜铁素，还可形成复杂生物膜结构，具有固氮、产1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶特性，能显著提高马铃薯叶片内苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性；该菌株能溶解磷酸钙、大豆卵磷脂和碳酸镁，可显著增加马铃薯株高、叶绿素相对含量、茎粗和单株产量，表明菌株JYC1217是一株生防促生性状优良的生防菌，具有良好的开发应用潜力。

关键词：多黏类芽胞杆菌马铃薯疮痂病促生生防防御酶活性

丹参根际放线菌B-35筛选及生防促生作用研究

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丹参根际放线菌B-35筛选及生防促生作用研究

作者：林杭山东农业大学

学位级别：硕士

丹参是我国一种大宗药材,然而由于种植区域的限制,连作不可避免,由连作引起的土传病害对丹参生产造成了严重影响。本试验选取连作种植二年生丹参根际土壤为材料,通过筛选土壤中可拮抗腐皮镰刀菌,且具有促生作用的放线菌,并进行发酵条件... 详细信息

丹参是我国一种大宗药材,然而由于种植区域的限制,连作不可避免,由连作引起的土传病害对丹参生产造成了严重影响。本试验选取连作种植二年生丹参根际土壤为材料,通过筛选土壤中可拮抗腐皮镰刀菌,且具有促生作用的放线菌,并进行发酵条件优化及菌属鉴定,研究放线菌对丹参种子萌发、成熟根茎、苗期生物量及品质的影响,为缓解丹参连作土传病害提供相关参考。主要研究结果如下:1.根际放线菌的分离及筛选放线菌B-35拮抗病原菌腐皮镰刀菌效果最好,且具有固氮能力。利用纯培养法分别从连作病株和健康丹参根际土壤中分离得到18、17株放线菌,筛选发现两者分别有6株、3株根际放线菌对腐皮镰刀菌有抑制作用。其中放线菌B-35发酵滤液与粗提物均可使腐皮镰刀菌菌丝、分生孢子破裂,且菌株可在阿须贝氏培养基连续培养三代。2.放线菌B-35的菌属鉴定及发酵条件优化放线菌B-35为链霉菌,小米培养基为最优培养基,最适培养条件为接种量6%、震荡9天、温度28℃、起始PH6.5。根据16Sr DNA序列分析,放线菌B-35与链霉菌关系密切结合其形态特征初步判断为链霉菌属。小米培养基发酵放线菌B-35获得的粗提物三种浓度下对腐皮镰刀菌的抑制均为最高,且在该培养基发酵下B-35代谢产物丰富,含量较高,适合后续对其抑菌或促生物质基础的探索。此外小米培养基下的B-35粗提物对禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌也具有抑制作用。正交试验结果表明在接种量6%、震荡时间9 d、温度28℃、起始PH为6.5时对腐皮镰刀菌的抑制效果最好。3.放线菌B-35在丹参根茎的生防作用及对丹参种子萌发的促进作用放线菌B-35可显著抑制病原菌腐皮镰刀菌对丹参根茎侵染,且对丹参种子萌发具有促进作用。利用放线菌B-35与病原菌发酵液对成熟丹参根茎进行接种处理。处理期间病原菌组丹参根茎逐渐发病直至25 d后根茎布满旺盛菌丝且全部腐烂,而对照组、放线菌组、混合组(放线菌与病原菌)丹参根茎始终保持正常,均未曾发病。利用放线菌B-35发酵液对丹参种子进行处理,发现菌液浓度稀释10倍、100倍、1000倍时与对照相比种子发芽势分别提高95%、298%、35%,菌液100倍时相比对照发芽率、胚轴长分别提高25%、14%。混合菌组与病原菌组相比时,胚轴长在混合菌液稀释10倍、100倍时分别提高5%、21%。4.盆栽试验中放线菌B-35的生防促生作用放线菌B-35在腐皮镰刀菌对幼苗的侵染方面有显著防治作用,且对苗期丹参的生物量及品质均具有促进作用。利用放线菌B-35及病原菌(腐皮镰刀菌)发酵液对盆栽丹参幼苗进行灌根处理,盆栽试验中放线菌组相比对照在叶片数、株高、地上鲜重、地上干重、主根长、地下鲜重、地下干重等方面分别提高223%、63%、208%、127%、37%、150%、336%。病原菌组叶片数、株高、地上鲜重、地上干重均低于对照组,其中地上干重显著降低37%。加有放线菌的混合组与病原菌组相比叶片数、株高、地上鲜重、地上干重、地下鲜重、地下干重等分别显著提高200%、114%、414%、386%、299%、419%,同时各项指标相较与对照也有明显提高。通过对盆栽丹参根部丹酚酸B等有效成分的含量进行测定发现放线菌B-35处理组与对照相比丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA分别为提高5%、27%、3%、5%;混合组对其含量影响较大,与病原菌组相比隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA分别提高70%、77%、31%。

关键词：丹参根际放线菌筛选促生生防

生防细菌TF28抗菌蛋白的分离纯化及理化特性

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东北农业大学学报 2014年第2期45卷 83-88页

作者：孟利强李晶赵晓宇张淑梅曹旭陈静宇沙长青黑龙江省科学院微生物研究所哈尔滨150010 黑龙江省科学院高技术研究院哈尔滨150020 黑龙江省科学院哈尔滨150080

为得到生防细菌TF28产生的抗菌蛋白,明确其蛋白理化特性。采用硫酸铵分级盐析法得到抗菌蛋白粗提物,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析及Superdex 75分子筛凝胶层析方法进行分离纯化。获得单一抗菌活性蛋白P28,纯度达到94.48%,... 详细信息

为得到生防细菌TF28产生的抗菌蛋白,明确其蛋白理化特性。采用硫酸铵分级盐析法得到抗菌蛋白粗提物,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析及Superdex 75分子筛凝胶层析方法进行分离纯化。获得单一抗菌活性蛋白P28,纯度达到94.48%,经检测该抗菌蛋白分子质量为36.8 ku。该抗菌蛋白具有一定的热稳定性和酸碱稳定性;经蛋白酶K在37℃处理30 min活性降低为原有活性的75.1%,对紫外线、胰蛋白酶不敏感。结果表明,经过分离纯化得到一种抗菌活性蛋白P28,该抗菌蛋白具有一定的热稳定性和酸碱稳定性,对蛋白酶K具有一定的耐受性,对紫外线、胰蛋白酶不敏感。

关键词：生防抗菌蛋白拮抗作用分离纯化理化特性

毒死蜱降解木霉菌对几种重要植物病原真菌的生防活性

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菌物学报 2014年第6期33卷 1292-1301页

作者：张广志杨合同张新建陈凯李纪顺山东省科学院生物技术研究中心山东省应用微生物重点实验室山东济南250014

木霉菌既是广泛应用的防治植物病害的生防菌,又是一类很有应用潜力的环境污染修复菌。针对分离筛选出的6株高效降解毒死蜱的木霉菌株,进行了土传植物真菌病害的生防活性试验。结果表明,在对峙培养条件下,供试木霉菌株对几种病原真菌均... 详细信息

木霉菌既是广泛应用的防治植物病害的生防菌,又是一类很有应用潜力的环境污染修复菌。针对分离筛选出的6株高效降解毒死蜱的木霉菌株,进行了土传植物真菌病害的生防活性试验。结果表明,在对峙培养条件下,供试木霉菌株对几种病原真菌均具有较为显著的抑制率,发酵滤液对多数病原真菌具有明显的抑菌作用。所有供试木霉菌株能在立枯丝核菌、灰霉、终极腐霉菌落上着生,并逐渐覆盖全部菌落;但不能在茄腐镰孢菌、尖孢镰孢菌、大丽轮枝菌上生长。真菌重寄生现象观察结果表明,供试木霉菌仅对立枯丝核菌具有明显的重寄生现象。研究结果表明,筛选出的高效降解毒死蜱的木霉菌菌株可对多种土传植物病原真菌具有良好的生防潜力。

关键词：木霉毒死蜱降解生防

小麦全蚀病生防芽孢杆菌对玉米秸秆的降解及抗菌谱检测

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河北农业大学学报 2014年第2期37卷 65-70页

作者：张冬冬雷白时朱宝成于鸿基河北农业大学生命科学学院河北保定071001 辽宁金穗牧业有限公司辽宁沈阳110045

利用十字划线法检测了小麦全蚀病生防芽孢杆菌Z-5、Z-9、Z-10和Z-14菌株对9种植物病原真菌的拮抗作用,同时检测了4菌株在28℃静置培养、28℃摇床培养和室温静置培养对玉米秸秆的降解特性。结果表明:Z-5菌株对西瓜枯萎病、小麦纹枯病、... 详细信息

利用十字划线法检测了小麦全蚀病生防芽孢杆菌Z-5、Z-9、Z-10和Z-14菌株对9种植物病原真菌的拮抗作用,同时检测了4菌株在28℃静置培养、28℃摇床培养和室温静置培养对玉米秸秆的降解特性。结果表明:Z-5菌株对西瓜枯萎病、小麦纹枯病、番茄灰霉病、棉花黄萎病和小麦赤霉病病原菌拮抗作用较强,Z-9菌株对小麦根腐病、白菜黑斑病、黄瓜灰霉病、棉花黄萎病和棉花枯萎病病原菌拮抗作用较强,Z-5和Z-9菌株抗菌谱较广。28℃静置培养,Z-9菌株对玉米秸秆降解率最高,为1.95%;Z-14菌株的增殖率最高,为14 795.8%。28℃摇床培养,Z-14菌株对玉米秸秆降解率最高,为2.19%;Z-14菌株的增殖率最高,为1 671.6%。室温静置培养,Z-10菌株对玉米秸秆降解率最高,为3.30%;Z-14菌株的增殖率最高,为732.0%;Z-14菌株具有较强的秸秆适应能力,增殖最大的是28℃静置培养的Z-14菌株。

关键词：小麦全蚀病生防芽孢杆菌玉米秸秆抗菌谱

枯草芽胞杆菌在油菜根茎叶的定殖动态和生防作用研究

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中国油料作物学报 2009年第1期31卷 61-64页

作者：胡小加江木兰刘胜毅余常兵张银波廖星中国农业科学院油料作物研究所油料作物遗传改良农业部重点实验室湖北武汉430062

采用常规方法跟踪枯草芽胞杆菌Tu-100在缩影系统油菜根际的定殖情况。Tu-100在油菜不同根段部位的定殖密度从上到下呈现了逐渐递减的规律。随着接种后时间的延长而逐渐下降。在根段8 cm以外的根区几乎检测不到接种菌。在油菜播种后3d,... 详细信息

采用常规方法跟踪枯草芽胞杆菌Tu-100在缩影系统油菜根际的定殖情况。Tu-100在油菜不同根段部位的定殖密度从上到下呈现了逐渐递减的规律。随着接种后时间的延长而逐渐下降。在根段8 cm以外的根区几乎检测不到接种菌。在油菜播种后3d,定殖密度可达最高水平(8.3×105个/g),然后急速下降,30d后保持相对稳定的较低水平(1.3×102个/g)。在油菜三片真叶时喷雾接种一次,20d后,在茎和叶上不能检测到所接种的Tu-100,并且抗菌核病的能力也逐渐减弱。

关键词：枯草芽胞杆菌油菜定殖生防

棉花枯萎病拮抗短小芽胞杆菌筛选鉴定及生防研究

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中国生物防治学报 2018年第3期34卷 440-448页

作者：李海薇韩万里王梦瑶罗明韩剑顾爱星新疆农业大学农学院/农林有害生物监测与安全防控重点实验室乌鲁木齐830052

为获得对棉花枯萎病有较好生防效果的拮抗细菌,从健康海岛棉植株根围土壤中分离筛选棉花枯萎病拮抗细菌,探索研究拮抗菌株的抑菌作用,为其生物防治提供潜在资源菌。采用平板对峙法,以海岛棉枯萎病尖孢镰刀菌为靶标菌,从土壤中分离到的12... 详细信息

为获得对棉花枯萎病有较好生防效果的拮抗细菌,从健康海岛棉植株根围土壤中分离筛选棉花枯萎病拮抗细菌,探索研究拮抗菌株的抑菌作用,为其生物防治提供潜在资源菌。采用平板对峙法,以海岛棉枯萎病尖孢镰刀菌为靶标菌,从土壤中分离到的120株细菌菌株中筛选拮抗菌株。测定拮抗细菌发酵液抑菌活性,通过促芽和盆栽试验筛选生防效果最好的菌株,同时测定该菌株对棉花枯萎病的抑菌效果和耐盐碱性。基于形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定菌株分类地位。从120株细菌中筛选到1株对棉花枯萎病拮抗作用很强的菌株,编号为KX-33。促芽分析和盆栽试验结果表明,菌株KX-33能明显缩短出芽时间,促进棉苗生长。对病原菌DD64、DD89、DD11和DD22防效分别为75.32%、72.77%、69.48%和68.81%,均显著高于对照药剂处理(P生物中含有棉花枯萎病拮抗细菌,经鉴定菌株KX-33为短小芽胞杆菌Bacillus pumilus,促生和抑菌作用显著,在海岛棉枯萎病生物防治中具有潜在的应用价值。

关键词：棉花枯萎病短小芽胞杆菌生防鉴定

西瓜内生细菌C_(18)的内生定殖及对西瓜枯萎病的生防作用

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植物保护学报 2007年第1期34卷 109-110页

作者：王刚王俊芳张颖杨之为河南大学生物工程研究所西北农林科技大学植物保护学院陕西杨凌712100

西瓜枯萎病是西瓜的主要病害，寻找防治西瓜枯萎病安全有效的方法已成为生产中的重要课题。利用植物内生细菌防治植物病害特别是植物土传病害，已有较多的研究，但对于西瓜枯萎病的防治尚未见报道。作者对西瓜内生细菌C18的内生定殖作... 详细信息

西瓜枯萎病是西瓜的主要病害，寻找防治西瓜枯萎病安全有效的方法已成为生产中的重要课题。利用植物内生细菌防治植物病害特别是植物土传病害，已有较多的研究，但对于西瓜枯萎病的防治尚未见报道。作者对西瓜内生细菌C18的内生定殖作用和对西瓜枯萎病的生物防治作用进行了研究。

关键词：植物内生细菌西瓜枯萎病 C18 定殖生物防治作用植物土传病害生防植物病害

棉花黄萎病菌拮抗菌的分离筛选及生防、促生效果测定

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棉花黄萎病菌拮抗菌的分离筛选及生防、促生效果测定

作者：朱琦新疆农业大学

学位级别：硕士

棉花黄萎病是阻碍棉花生长发育的主要病害之一。生物防治能在环境安全的基础上有效防治植物病害。本文采用逐级筛选法,筛选出对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有拮抗作用,适应新疆盐碱土质且能在生产应用中具有稳定的拮抗特性、... 详细信息

棉花黄萎病是阻碍棉花生长发育的主要病害之一。生物防治能在环境安全的基础上有效防治植物病害。本文采用逐级筛选法,筛选出对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有拮抗作用,适应新疆盐碱土质且能在生产应用中具有稳定的拮抗特性、能促进棉花生长的菌株。主要研究结果如下:(1)从新疆棉花黄萎病重病田不同深度采集土样,利用梯度稀释、分离纯化、平板对峙,初步筛选出272株对棉花黄萎病菌具有拮抗作用的微生物。通过二次筛选、抑菌活性测定、促芽效果测定等方法筛选出抑菌圈半径>7 mm、对棉花黄萎病菌拮抗等级为“强”,且对棉籽发芽、棉苗生长有促进效果的拮抗菌共计6株。再利用菌丝生长速率法对拮抗菌在盐碱培养基中的生存能力进行测定,筛选出4株在pH=9、NaCl浓度为21 g/L的培养基内可以生长的拮抗菌(编号为kwx-25、kx-4、kf-43-1、kf-5-1)。(2)通过切根蘸菌法对4株拮抗菌进行盆栽防效测定,平均防效为46.19%～80.27%,其中接种kf-43-1菌株的盆栽防效最高。将其中3株盆栽防效大于65%的拮抗菌配制成菌悬液灌根接种到库尔勒、沙湾试验田,在5个供试棉花品种(品系)中,拮抗菌kf-43-1的生防效果最好,病情指数显著低于对照及其余拮抗菌处理,相对防效均显著高于其余拮抗菌,接菌20 d后最高可达59.56%。同时拮抗菌株kf-43-1还表现出较好的促生效果,可不同程度提高棉株铃数及有效铃数,且衣分均显著高于清水对照及接种其它2株拮抗菌的棉株。将拮抗菌kf-43-1菌悬液和成膜剂混合,对棉籽进行包衣并测试其发芽率,与对照相比,用浓度为1×107 cfu/mL的kf-43-1菌悬液包衣会提高棉籽发芽率。

关键词：棉花黄萎病菌拮抗菌生防盐碱促生