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中国兽药杂志 2000年第3期34卷 37-38页

作者：田亚丽张晓霞山西生物制品厂山西太谷030800

为生产检验需要 ,将生长好的 BT细胞分别放在 37℃、2 5℃、1 5℃的温箱中 ,发现在 2 5℃下 ,细胞维持到需传代的最长天数为 50～ 60 d。传代前将 BT细胞在 37℃预热 1 6～ 2 4 h菌传代。

关键词： BT细胞维持传代细胞猪瘟疫苗生长细胞

红球菌H-412生长细胞脱除正十六烷中的有机硫

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化学工业与工程 2012年第6期29卷 69-73,79页

作者：石立娜韩振为天津大学化工学院天津300072 天津大学精馏技术国家工程中心天津300072

利用实验室筛选的能够通过"4S"途径进行脱硫代谢的红平红球菌H-412(Rhodococcus sp.H-412)作为生物脱硫催化剂,二苯并噻吩(DBT)为含硫模型化合物,考察了红球菌H-412生长细胞脱除正十六烷中有机硫的脱硫性能。在油相体积分数20%的反应体... 详细信息

利用实验室筛选的能够通过"4S"途径进行脱硫代谢的红平红球菌H-412(Rhodococcus sp.H-412)作为生物脱硫催化剂,二苯并噻吩(DBT)为含硫模型化合物,考察了红球菌H-412生长细胞脱除正十六烷中有机硫的脱硫性能。在油相体积分数20%的反应体系中,相同浓度的生长细胞比休止细胞的脱硫效率高。利用红球菌H-412生长细胞在油相分率20%的情况下,初始发酵液菌体浓度为0.048 g/L,初始DBT浓度为0.25 mmol/L的条件下分批培养的脱硫效率较高,达到了57%。红球菌H-412生长细胞在油相体积分率分别为0,5%,10%和20%条件下进行脱硫,DBT的消耗量及二羟基联苯(2-HBP)的生成量随油相体积增加而增大,20%条件下均达最大值,脱硫效率最高。细胞生长量随油相体积增大而减少,无油存在的条件下,细胞生长量最大。

关键词：生物脱硫红球菌生长细胞二苯并噻吩

重组人酸性成纤维细胞生长因子对人成骨细胞生长及增殖的影响

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中华骨科杂志 2001年第8期21卷 489-492页

作者：屠重棋袁淑兰王艳萍陈晓禾龚全裴福兴四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学肿瘤研究所成都610041

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(acidfibroblastgrowthfactoraFGF)对成骨细胞生长及增殖的影响。方法取人胚胎颅盖骨骨内膜,利用组织块培养法进行成骨细胞原代培养,DMEM-F12培养液传代、扩增培养,以细胞形态学、细胞形成钙结节的能力... 详细信息

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(acidfibroblastgrowthfactoraFGF)对成骨细胞生长及增殖的影响。方法取人胚胎颅盖骨骨内膜,利用组织块培养法进行成骨细胞原代培养,DMEM-F12培养液传代、扩增培养,以细胞形态学、细胞形成钙结节的能力及碱性磷酸酶活性鉴定成骨细胞。应用光镜、电镜、MTT法及流式细胞仪检测,分别从细胞形态、细胞生长及增殖特性分析不同浓度的aFGF对人成骨细胞生长和增殖的影响。结果10～100ng/mlaFGF可明显促进成骨细胞生长、增殖使S期细胞数增加,但高浓度aFGF(>1μg/ml)对成骨细胞生长具有抑制作用。结论aFGF对体外培养的人成骨细胞具有促生长和增殖作用,其有效浓度为10～100ng/ml。

关键词：酸性成纤维细胞生长因子成骨细胞生长细胞增殖细胞

红球菌细胞催化奥美拉唑硫醚的不对称氧化实验研究

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红球菌细胞催化奥美拉唑硫醚的不对称氧化实验研究

作者：李涛青岛科技大学

学位级别：硕士

消化性溃疡(Peptic ulcer)是指由于胃黏膜自身保护因子与损伤因子平衡的破坏而引起胃和/或十二指肠上皮黏膜的损伤,具有高发病率和死亡率的特性。口服药物是预防和治疗消化性溃疡的常用手段,抗溃疡药主要包括抗酸药、抑酸药、黏膜保护... 详细信息

消化性溃疡(Peptic ulcer)是指由于胃黏膜自身保护因子与损伤因子平衡的破坏而引起胃和/或十二指肠上皮黏膜的损伤,具有高发病率和死亡率的特性。口服药物是预防和治疗消化性溃疡的常用手段,抗溃疡药主要包括抗酸药、抑酸药、黏膜保护药以及抗幽门螺杆菌感染的药物。奥美拉唑(Omeprazole)是一种有效的抑酸药,虽然已经普及,但是传统的合成方法主要是依靠化学合成,成本高昂,环境污染严重,其S型异构体埃索美拉唑(Esomeprazole)的合成涉及手性,立体选择性不尽人意。本课题创新性的利用具有硫醚催化活性的红球菌(Rhodococcus rhodochrous)JCM20420全细胞为催化剂,对底物奥美拉唑硫醚进行立体选择性的氧化来合成(S)-奥美拉唑,并采用单因素实验与响应面优化法考察影响红球菌生长细胞以及固定化细胞催化的各因素以优化生物合成工艺。课题具有很高的实用价值与现实意义。本课题首先对红球菌JCM20420进行了基础的传代培养与保存,同时确定了红球菌生长曲线、菌液浊度-菌体干重(OD-DCW)曲线。另外,通过对底物与产物标准曲线的测定,建立了以液相外标法为主的检测方法。然后利用经过诱导的红球菌JCM20420生长细胞为催化剂,奥美拉唑硫醚为底物,进行(S)-奥美拉唑的高立体选择性合成。通过单因素实验探索反应温度、反应pH、反应时间、底物浓度以及摇床转速对(S)-奥美拉唑产率的影响,并对反应温度、pH以及时间三个主要因素进行响应面优化分析,最终确定红球菌JCM20420生长细胞催化奥美拉唑硫醚不对称氧化的最优条件为:反应温度32℃,反应时间97h,反应pH7.60、摇床转速180r/min、底物浓度为3mM、促溶剂异丙醇浓度为6%。在该转化条件下,(S)-奥美拉唑产率为42.79%。为了减少反应时间,增强细胞对底物的耐受性,提高底物浓度与产物产率,采用海藻酸钠包埋法对红球菌JCM20420细胞进行固定化。通过单因素实验考察海藻酸钠浓度、CaCl浓度、固定化时间以及细胞量对固定化细胞催化活力的影响,并通过正交试验获得最佳固定化条件:海藻酸钠浓度为3%、CaCl溶液浓度为2%、固化时间为5h、细胞浓度为0.6g/ml,在此条件下制得的固定化红球菌JCM20420细胞催化活力最高。然后对固定化细胞催化奥美拉唑硫醚不对称氧化进行研究,对其工艺进行探索与优化。通过单因素实验考察Tris-HCl缓冲液pH、转化温度、催化时间、恒温振荡器转速、底物浓度以及细胞量对(S)-奥美拉唑产率的影响。在单因素实验的基础上确定了Tris-HCl缓冲液pH、转化温度、催化时间三个主要影响因素,采用响应面优化实验确定了催化转化的最优条件:Tris-HCl缓冲液的pH为7.60、转化温度为32℃、催化时间为40h、恒温振荡器转速为200r/min、底物浓度为4mM、细胞量为6g、促溶剂异丙醇浓度为6%。在该转化条件下,(S)-奥美拉唑最终产率为56.44%。课题符合绿色化学的要求,采用生物催化的方法合成(S)-奥美拉唑,通过探索优化形成了一套较为可行的合成方案,对抗溃疡药奥美拉唑的生产提供了一个可能选项。

关键词：红球菌JCM20420 奥美拉唑硫醚 (S)-奥美拉唑立体选择性氧化全细胞催化生长细胞固定化细胞

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二苯并噻吩生物降解菌培养和反应条件的优化

中国石油大学学报（自然科学版） 2008年第6期32卷 138-141页

作者：侯影飞孔瑛郭宁祝威张建中国石化胜利工程设计咨询有限责任公司山东东营257026 中国石油大学重质油国家重点实验室山东东营257061

考察了培养温度、时间、pH值对根癌土壤杆菌UP-3生长的影响,选择了最合适的培养条件。通过考察底物浓度、反应温度和反应时间对菌株UP-3降解二苯并噻吩(DBT)性能的影响,优化了生物降解的反应条件。结果表明:UP-3最佳培养条件为培养温度3... 详细信息

考察了培养温度、时间、pH值对根癌土壤杆菌UP-3生长的影响,选择了最合适的培养条件。通过考察底物浓度、反应温度和反应时间对菌株UP-3降解二苯并噻吩(DBT)性能的影响,优化了生物降解的反应条件。结果表明:UP-3最佳培养条件为培养温度31℃,培养时间30 h,培养基pH值7.3;UP-3催化降解DBT反应的适宜条件为DBT质量浓度500 mg/L,反应温度31℃,反应时间35 h;适宜条件下UP-3生长细胞对DBT的降解率达到85%,说明其具有较好的应用潜力。

关键词：生物脱硫二苯并噻吩生长细胞根癌土壤杆菌UP-3

睾丸生殖细胞来源肿瘤分类及其遗传学研究进展

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医学研究杂志 2013年第2期42卷 193-196页

作者：何国荣张浩川陈肖鸣温州医学院 325027

生殖细胞来源的肿瘤包括起源于生长细胞系的各种类型的肿瘤。它们除了发生于性腺，还可见于性腺外的体壁中线上，如骶尾部、腹膜后、纵隔、头颈部、甚至丘脑下部的松果体区，还有极少数可见于体壁中线外的其他器官。这种分布与早期发育... 详细信息

生殖细胞来源的肿瘤包括起源于生长细胞系的各种类型的肿瘤。它们除了发生于性腺，还可见于性腺外的体壁中线上，如骶尾部、腹膜后、纵隔、头颈部、甚至丘脑下部的松果体区，还有极少数可见于体壁中线外的其他器官。这种分布与早期发育时原始生长细胞由卵黄囊向生殖嵴迁移有关。生殖细胞来源肿瘤的临床表现取决于肿瘤发生的部位、病理组织类型以及病人的性别和年龄等。大多数良性的生殖细胞肿瘤表现为向体细胞方向分化，如良性畸胎瘤，可见于女性的卵巢（皮样囊肿）或性腺外的组织，以及男性如婴幼儿的睾丸、头颈部、骶尾部等。这些部位的肿瘤有可能继发恶变。

关键词：生殖细胞肿瘤肿瘤分类细胞来源睾丸遗传学病理组织类型良性畸胎瘤生长细胞

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壳状乳杆菌生物合成苯乳酸的研究

壳状乳杆菌生物合成苯乳酸的研究

作者：徐捐捐西北农林科技大学

学位级别：硕士

苯乳酸是近年来发现的一种新型食品防腐剂,对细菌、酵母菌和霉菌等均具有较强的抑制作用,同时它还可用于生产环保、高机械强度、抗化学腐蚀、强紫外吸收的高分子材料聚苯乳酸。本研究首先从发酵蔬菜样品中分离获得了高产苯乳酸的菌株、... 详细信息

苯乳酸是近年来发现的一种新型食品防腐剂,对细菌、酵母菌和霉菌等均具有较强的抑制作用,同时它还可用于生产环保、高机械强度、抗化学腐蚀、强紫外吸收的高分子材料聚苯乳酸。本研究首先从发酵蔬菜样品中分离获得了高产苯乳酸的菌株、然后对其生长细胞发酵生产苯乳酸及静息细胞批次和连续发酵生产苯乳酸的条件优化,最后对其苯乳酸合成的关键酶乳酸脱氢酶的性质进行分析,以期为苯乳酸的高效生产提供理论基础。以传统发酵蔬菜为分离源,从发酵蔬菜汁中分离获得乳酸菌,并通过16 s RNA基因测序对其进行鉴定,结果表明壳状乳杆菌的苯乳酸产量明显高于其他种的乳酸菌。产量最高的前3株乳酸菌分别为NWAFU1019、NWAFU1060、NWAFU1078,其产量均超过1 mmol/L,显著高于其他乳酸菌株,因此选择该3株乳酸菌进行下一步的研究。通过生长细胞发酵条件的优化,确定了壳状乳杆菌生长细胞发酵生产苯乳酸的最优条件为发酵时间48 h,温度30℃,底物(苯丙酮酸)浓度40 mmol/L,Ca CO添加量0.5%。在此条件下菌株NWAFU1019、NWAFU1060、NWAFU1078的苯乳酸产量分别为27.2 mmol/L、29.2 mmol/L、30.8 mmol/L,转化率分别为65.3%、69.6%、73.3%。与优化前相比其产量分别提高23.7、23.3、19.5倍。通过静息细胞转化合成苯乳酸条件的优化,确定了壳状乳杆菌静息细胞发酵生产苯乳酸的最优条件为静置条件下,转化时间2 h,温度30℃,p H 6.5,底物(苯丙酮酸)浓度20 mmol/L,葡萄糖添加量1.0%(g/L),在此条件下NWAFU1019、NWAFU1060、NWAFU1078的苯乳酸产量分别为15.1 mmol/L、14.6 mmol/L、15.2 mmol/L,转化率为75.5%、73.0%、76.0%。同时在最优条件下进行重复利用性试验,结果表明NWAFU1078重复利用性最好,在重复利用10次后,转化率不会明显下降,因此被用来进一步连续生产苯乳酸,即通过设计连续生产装置,使进料出料速度相等,达到动态平衡,通过连续转化稀释率的优化,确定了最适稀释率为0.6时,连续转化5个罐体积,其平均转化率为54.5%,时空产量为6.5 mmol/L/h。同时,通过手型色谱柱分析可知其均可以产生L型苯乳酸和D型苯乳酸,因此推测壳状乳杆菌内至少含有两种乳酸脱氢酶。经全基因组测序可知发酵蔬菜源NWAFU1078中共有6个乳酸脱氢酶,其中3个L型,3个D型,通过生物信息学软件,对其理化性质,功能位点,空间结构进化关系等进行预测,预测结果显示其均为耐热、稳定性的亲水蛋白,且均具有活性位点。

关键词：壳状乳杆菌苯乳酸生长细胞静息细胞乳酸脱氢酶

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布氏乳杆菌生物合成γ-氨基丁酸的研究

布氏乳杆菌生物合成γ-氨基丁酸的研究

作者：司阔林西北农林科技大学

学位级别：硕士

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)具有降低血压、镇静安神、治疗癫痫和肝肾解毒等生理功能,其生物制备方法逐渐成为研究热点。本文以从中国发酵蔬菜中筛选得到的两株高产γ-氨基丁酸的布氏乳杆菌NWAFU 1236和NWAFU 1136为研究对... 详细信息

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)具有降低血压、镇静安神、治疗癫痫和肝肾解毒等生理功能,其生物制备方法逐渐成为研究热点。本文以从中国发酵蔬菜中筛选得到的两株高产γ-氨基丁酸的布氏乳杆菌NWAFU 1236和NWAFU 1136为研究对象,首先优化了布氏乳杆菌合成γ-氨基丁酸的培养条件,然后利用布氏乳杆菌静息细胞合成γ-氨基丁酸,最后利用原核表达技术纯化关键酶谷氨酸脱羧酶(GAD)并对其进行生物信息学分析。获得的主要结论如下:(1)确定了NWAFU 1236和NWAFU 1136合成γ-氨基丁酸的最优发酵条件为:发酵时间为72 h、发酵温度为35℃、初始L-谷氨酸钠浓度为400 mmol/L、初始p H为5.0。在此条件上,NWAFU 1236和NWAFU 1136的γ-氨基丁酸产量分别为233.9 mmol/L和159.3 mmol/L,L-谷氨酸钠转化率分别为58.5%和39.8%。(2)设计并优化了NWAFU 1236和NWAFU 1136合成γ-氨基丁酸的培养基成分。确定了NWAFU 1236和NWAFU 1136产γ-氨基丁酸三个因子的最佳水平分别为:叶酸浓度8.37 mg/L、L-半胱氨酸浓度0.94 g/L、氯化锰浓度0.60 g/L;叶酸浓度10.16 mg/L、L-半胱氨酸浓度0.97 g/L、氯化锰浓度0.60 g/L。在各因子的最佳水平条件下,模型预测NWAFU 1236和NWAFU 1136的γ-氨基丁酸产量分别为323.3 mmol/L和261.4mmol/L,验证试验中实测值分别为312.6 mmol/L和251.2 mmol/L,L-谷氨酸钠转化率分别为78%和62.8%,比在基础培养基分别提高了34%和58%。(3)优化了NWAFU 1236和NWAFU 1136静息细胞合成γ-氨基丁酸的转化条件。最佳的转化条件为:静置培养、转化时间2 h、转化温度30℃、转化液初始p H 4.5、葡萄糖浓度0.5%和L-谷氨酸钠浓度100 mmol/L。在此条件上,NWAFU 1236和NWAFU1136的γ-氨基丁酸产量分别可以达到22.2 mmol/L和16.0 mmol/L,L-谷氨酸钠转化率分别为22.2%和16.0%。(4)以NWAFU 1236和NWAFU 1136基因组序列为模版,设计了一对特异性引物并扩增谷氨酸脱羧酶基因,将其连接至融合表达载体p ET28a,构建重组质粒p ET28a-gad并转化至*** BL21(DE3),成功构建一株含有6×His标签的谷氨酸脱羧酶重组表达菌株。然后利用IPTG诱导使重组蛋白表达,并通过SDS-PAGE蛋白电泳对目标蛋白进行检测,最终通过Ni亲和层析柱进行亲和层析对重组蛋白进行分离纯化。同时利用生物信息学分析方法对克隆谷氨酸脱羧酶进行了序列及结构分析。

关键词：布氏乳杆菌 γ-氨基丁酸生长细胞静息细胞谷氨酸脱羧酶

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降低血清用量与培养成本

细胞生物学杂志 2006年第5期28卷 773-774页

1 介绍细胞培养是非常重要但又非常昂贵的研究工具,主要成本来源于胎牛血清(FBS),一种细胞培养重要而又非常昂贵组份.许多研究者按照常规使用含有10%～20%胎牛血清的培养基进行生长细胞,这样的量可能高出细胞生长的需求,如果降低50%的... 详细信息

1 介绍细胞培养是非常重要但又非常昂贵的研究工具,主要成本来源于胎牛血清(FBS),一种细胞培养重要而又非常昂贵组份.许多研究者按照常规使用含有10%～20%胎牛血清的培养基进行生长细胞,这样的量可能高出细胞生长的需求,如果降低50%的胎牛血清使用量就可以减少相当可观的成本(表1),虽然还是所有的细胞都可以在低胎牛血清量中进行生长,但许多是可以做到的.

关键词：胎牛血清细胞培养使用量成本生长细胞细胞生长培养基

活体微生物及磁分离技术在重金属废水处理中的应用

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绿色科技 2020年第24期22卷 68-70页

作者：王得梁杨家鹏黄碧捷王一靖江汉大学化学与环境工程学院湖北武汉430056

探讨了活体微生物法及磁分离技术在重金属废水处理中的应用,提出了新型的活体趋磁细菌-高梯度磁分离联用技术能为环保产业提供新的机遇,将对实现社会、经济、环境效益发挥更大的作用。

关键词：活体微生物生长细胞磁分离废水处理