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生长抑素基因疫苗pcS/SS构建及其在HeLa细胞中的表达

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中国兽医学报 2004年第2期24卷 153-156页

作者：曹少先杨利国茆达干张文伟管峰南京农业大学动物繁育研究所江苏南京210095 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室江苏南京210095

将 PCR扩增得到的 pc MV- S中的乙肝表面抗原 (HBs Ag) S基因亚克隆到 p UC18中 ,构建成 p U S质粒 ,再将化学合成的生长抑素 (somatostatin,SS)基因单链复性 ,融合到 S基因编码区的第 2 2 5个氨基酸位点之后 ,构建成 p US/SS质粒 ,然后... 详细信息

将 PCR扩增得到的 pc MV- S中的乙肝表面抗原 (HBs Ag) S基因亚克隆到 p UC18中 ,构建成 p U S质粒 ,再将化学合成的生长抑素 (somatostatin,SS)基因单链复性 ,融合到 S基因编码区的第 2 2 5个氨基酸位点之后 ,构建成 p US/SS质粒 ,然后将 S/ SS融合基因亚克隆到 pc DNA3.1(- )中 ,构建成 S/ SS融合表达质粒 pc S/ SS。采用脂质体包裹法将 pc S/ SS质粒转染 He L a细胞 ,用 SDS- PAGE和 EL ISA分析表明 ,S/ SS融合基因在转染后 72 h和 G4 18选择 2周后的细胞中均获得表达 ,融合蛋白具有 SS的反应原性。

关键词：乙肝表面抗原 DNA疫苗 HeLa细胞生长抑素基因疫苗

口服生长抑素基因疫苗对小鼠免疫影响的初步研究

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免疫学杂志 2007年第1期23卷 46-48,51页

作者：严婷杜念兴杨倩南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

目的研究口服生长抑素(SS)基因疫苗在体内表达HBsAg/SS融合蛋白情况。方法用SS基因疫苗免疫小鼠,姬姆萨染色观察细菌在体内分布;观察小鼠质量增长情况;应用免疫组化法显示小肠乙肝表面抗原(HBsAg)和SS阳性细胞的分布及数量变化。结果免... 详细信息

目的研究口服生长抑素(SS)基因疫苗在体内表达HBsAg/SS融合蛋白情况。方法用SS基因疫苗免疫小鼠,姬姆萨染色观察细菌在体内分布;观察小鼠质量增长情况;应用免疫组化法显示小肠乙肝表面抗原(HBsAg)和SS阳性细胞的分布及数量变化。结果免疫后16h空肠细菌数量达到高峰,免疫后4d脾脏出现细菌;两试验组小鼠体质量较对照组均无显著变化;首次免疫后第3周两试验组小肠内出现HBsAg阳性细胞并维持至第7周;首次免疫后第5、7周两试验组小肠内SS阳性细胞数量比对照组极显著减少(P基因疫苗免疫小鼠后可在小肠表达HBsAg/SS融合蛋白,同时SS阳性细胞数量减少,推测该基因疫苗刺激机体表达蛋白后能产生SS抗体。

关键词：生长抑素基因疫苗 SS阳性细胞 HBsAg阳性细胞

口服生长抑素基因疫苗对小肠局部细胞免疫的影响

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免疫学杂志 2006年第Z1期22卷 157-159,163页

作者：严婷杜念兴杨倩南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

目的研究口服生长抑素(SS)基因疫苗对小肠局部细胞免疫的影响。方法应用SS基因疫苗通过两种方式(试验组Ⅰ和试验组Ⅱ)灌胃小鼠,首次免疫后第3、5和7周分别扑杀小鼠,应用HE染色、亲和免疫组化和甲苯胺蓝染色的方法分别显示小肠上皮内淋... 详细信息

目的研究口服生长抑素(SS)基因疫苗对小肠局部细胞免疫的影响。方法应用SS基因疫苗通过两种方式(试验组Ⅰ和试验组Ⅱ)灌胃小鼠,首次免疫后第3、5和7周分别扑杀小鼠,应用HE染色、亲和免疫组化和甲苯胺蓝染色的方法分别显示小肠上皮内淋巴细胞(iIEL)、固有层CD4+T细胞和肥大细胞的分布及数量变化。结果两个试验组iIEL数量比对照组有极显著增加(P基因疫苗能提高小鼠肠道细胞免疫功能。

关键词：生长抑素基因疫苗 iIEL CD4+T细胞肥大细胞

小鼠白细胞介素-4、6对生长抑素基因疫苗免疫效果的影响

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小鼠白细胞介素-4、6对生长抑素基因疫苗免疫效果的影响

作者：周立光吉林大学

学位级别：硕士

生长抑素基因疫苗是将合成的生长抑素基因与表达质粒载体重组构建而成的表达质粒。它利用生长抑素(SS)免疫中和调节机理,即以该苗免疫家畜,产生生长抑制激素(SS)抗体,中和家畜体内生长抑素,相对地使内源性生长激素(GH)增加,从而促进家... 详细信息

生长抑素基因疫苗是将合成的生长抑素基因与表达质粒载体重组构建而成的表达质粒。它利用生长抑素(SS)免疫中和调节机理,即以该苗免疫家畜,产生生长抑制激素(SS)抗体,中和家畜体内生长抑素,相对地使内源性生长激素(GH)增加,从而促进家畜生长。基因佐剂(gene or genetic adjuvant)可将编码某些细胞因子及T、B细胞表面共刺激因子等的基因与目的基因克隆于同一载体或不同载体共同免疫动物,其表达的相应蛋白起到佐剂的作用,可大大增强T、B细胞的免疫应答水平。白细胞介素-4是由活化的Th2细胞产生的一种细胞因子,具有多种生物学功能。小鼠白细胞介素-4(mIL-4)是小鼠免疫调节系统中具有重要功能的细胞因子,利用白介素-4可以促进抗体产生,介导体液免疫反应,调节机体的免疫功能,增强机体的免疫应答水平的功能,将其作为基因佐剂与生长抑素基因疫苗在机体内共表达。 IL-6是迄今发现的功能最为广泛的细胞因子之一,大量的基础及应用研究证明,IL-6是机体免疫网络中最重要的细胞因子,可促进B淋巴细胞分化和抗体蛋白的分泌,诱导细胞毒性T细胞活化,增强IL-2诱导的LAK细胞的杀伤瘤细胞的活性,可明显促进小鼠骨髓移植后的免疫功能重建,因而有增强免疫的功能。鉴于白细胞介素是动物免疫应答调节中十分关键的细胞因子,而白细胞介素-6在小鼠的免疫防御感染和免疫应答调节中发挥着非常重要的作用,因此,我们进行了小鼠脾脏淋巴细胞白细胞介素-6的基因克隆,为下一步工作打下基础。本试验应用小鼠脾细胞分离技术,分离得到了小鼠脾细胞。将脾细胞进行体外培养,在Con A的刺激诱导下培养24～48h后。提取培养的小鼠脾细胞的总RNA,应用RT-PCR扩增获得了小鼠脾细胞白细胞介素-4及白细胞介素-6基因的cDNA,并构建真核表达质粒,作为生长抑素基因疫苗的佐剂,与生长抑素基因疫苗共转染动物,考察白介素-4及白介素-6对生长抑素基因疫苗免疫效果的影响,以期提高生长抑素抗体水平,更好的中和体内的生长抑素,从而使生长激素水平相对增加,达到更有效的促生长的目的。

关键词：生长抑素基因疫苗基因佐剂 mIL-4 mIL-6 免疫

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口服生长抑素基因疫苗对小鼠免疫的初报

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