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实用临床医药杂志 2022年第20期26卷 70-77页

作者：王鹏樊紫萱乔里代芸洁叶朝阳梁燕贵州医科大学附属口腔医院牙体牙髓科贵州贵阳550004 贵州医科大学公共卫生学院贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州贵阳550004

目的分离、纯化和鉴定临床变异链球菌株,并构建该临床菌株的412c基因缺陷菌株,比较两者生长速率和致龋性。方法随机收集无龋健康成人口腔牙菌斑样本,在唾液/变异链球菌杆菌肽琼脂(MSA)培养基中进行厌氧培养和筛选,通过菌斑形态观察、革... 详细信息

目的分离、纯化和鉴定临床变异链球菌株,并构建该临床菌株的412c基因缺陷菌株,比较两者生长速率和致龋性。方法随机收集无龋健康成人口腔牙菌斑样本,在唾液/变异链球菌杆菌肽琼脂(MSA)培养基中进行厌氧培养和筛选,通过菌斑形态观察、革兰氏染色、细菌生化反应和聚合酶链式反应(PCR)等方法对获得的临床分离株进行鉴定;将线性化重组质粒转入临床变异链球菌中进行同源重组,获得412c(hit)基因缺陷菌株;在不同pH值脑心浸液(BHI)培养基中,比较两者的生长速率和耐酸特性;在含3%蔗糖的BHI培养基中,比较两者的产酸能力。结果无龋健康成人口腔牙釉质表面菌斑在MSA培养基中生长的菌落形态均为深蓝色半球颗粒状突起、表面粗糙、边缘不齐;革兰氏染色后,显微镜油镜下可见革兰阳性蓝紫色球状菌体,呈长链状和短链状分散;生化反应和412c基因片段PCRSanger测序鉴定结果显示,临床变异链球菌为“等效变异链球菌UA159”菌株。将hit-UP-pFW5-Down重组质粒线性化后转入临床变异链球菌中进行同源重组并筛选出412c基因缺陷变异链球菌株,该缺陷菌株生长速率相较其亲本菌株异常快速(与模式菌株ATCC 25175的缺陷菌株相似),其产酸能力略弱于亲本菌株,耐酸性则显著强于亲本菌株。结论临床分离变异链球菌株为“等效变异链球菌UA159”菌株,其412c基因与细菌生长调控相关,而412c基因缺陷变异链球菌株的生长速率显著高于其亲本菌株,更具致龋潜力。

关键词：变异链球菌 412c基因生长周期调控产酸耐酸致龋性

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