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生物素化膜联蛋白V的构建及在细胞凋亡研究中的应用

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第2期31卷 16+18-20+17页

作者：孙建新陈哲宇由振东吴祥甫中国科学院上海生物化学研究所

我们利用基因工程的方法在大肠杆菌中制备了生物素化的膜联蛋白Ｖ。为此，我们构建了膜联蛋白Ｖ与乙酰Ｃ０Ａ羧化酶生物素受体肽ＢＣＣＰ８７的融合基因，并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物经ＨＰＬＣ检测，我们发现大约有６０％的融... 详细信息

我们利用基因工程的方法在大肠杆菌中制备了生物素化的膜联蛋白Ｖ。为此，我们构建了膜联蛋白Ｖ与乙酰Ｃ０Ａ羧化酶生物素受体肽ＢＣＣＰ８７的融合基因，并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物经ＨＰＬＣ检测，我们发现大约有６０％的融合表达产物在大肠杆菌体内进行了生物素化。生物素化的膜联蛋白Ｖ经抗生物素蛋白（ａｖｉｄｉｎ）亲和层析纯化后用于吗啡诱导的下丘脑神经元细胞的凋亡检测，取得了理想的结果。

关键词：膜联蛋白V 生物素化大肠杆菌细胞凋亡

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生物素化壳聚糖纳米粒的制备及其相关性质

药学学报 2007年第5期42卷 557-561页

作者：姚倩侯世祥张瑄赵钢苟小军游金宗成都大学生物产业学院中药化学实验室四川成都610106 四川大学华西药学院四川成都610041 浙江教育学院理工学院浙江杭州310012

制备了生物素化的壳聚糖纳米粒(biotinylated chitosan nanoparticles,Bio-CS-NP)并测定其相关性质,以此作为抗癌药物的载体。制备过程为:先用磺酸琥珀酰亚胺生物素与壳聚糖反应生成生物素化的壳聚糖(biotinylatedchitosan,Bio-CS),再... 详细信息

制备了生物素化的壳聚糖纳米粒(biotinylated chitosan nanoparticles,Bio-CS-NP)并测定其相关性质,以此作为抗癌药物的载体。制备过程为:先用磺酸琥珀酰亚胺生物素与壳聚糖反应生成生物素化的壳聚糖(biotinylatedchitosan,Bio-CS),再采用氯化钠沉淀法制备Bio-CS-NP。采用试剂盒测定Bio-CS-NP表面配体连接密度,用透射电镜和激光粒度分析仪分别检测纳米粒的形态和粒径,并比较了人肝癌HepG2细胞对Bio-CS-NP和未经生物素修饰的壳聚糖纳米粒(chitosan nanoparticles,CS-NP)的摄取情况。结果显示,Bio-CS-NP表面配体连接密度为2.2 biotin CS;纳米粒形态为圆球形,表面光滑,平均粒径为296.8 nm,多分散指数为0.155;HepG2细胞对Bio-CS-NP的摄取能力显著高于CS-NP(P生物素的检测方法简便、可行。

关键词：生物素化壳聚糖纳米粒制备 HepG2细胞

生物素化抗AIB1单克隆抗体的制备及应用研究

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四川大学学报（医学版） 2009年第4期40卷 727-729页

作者：庞秋霞屈艺魏大鹏赵凤艳延安大学医学院生物化学与分子生物学教研室延安716000 四川大学华西第二医院儿科四川大学华西基础医学与法医学院免疫学研究室

目的用生物素N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS)对纯化抗AIB1单克隆抗体1A2E1进行标记,并应用标记后单克隆抗体对靶细胞中AIB1蛋白进行检测。方法用BNHS与纯化抗体1A2E1交联,制备Biotin-1A2E1,用竞争抑制ELISA法及免疫细胞化学法检测Biotin-1A2E... 详细信息

目的用生物素N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS)对纯化抗AIB1单克隆抗体1A2E1进行标记,并应用标记后单克隆抗体对靶细胞中AIB1蛋白进行检测。方法用BNHS与纯化抗体1A2E1交联,制备Biotin-1A2E1,用竞争抑制ELISA法及免疫细胞化学法检测Biotin-1A2E1的生物学活性。结果所制备的生物素化抗体活性高,效价为1∶3200,用于检测乳腺癌细胞中AIB1蛋白敏感性好。结论成功制备生物素化抗体Biotin-1A2E1,并可初步应用于靶细胞AIB1蛋白的检测,为肿瘤辅助诊断中AIB1蛋白的检测提供有力手段。

关键词：生物素 N-羟基丁二酰亚胺酯生物素化单克隆抗体 AIB1

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生物素化壳聚糖材料的合成及表征

山东大学学报（医学版） 2009年第5期47卷 120-124页

作者：闫永波王中彦李留法韩枫徐凯莫凤奎沈阳药科大学药学院沈阳110016 本溪市中心医院辽宁本溪117000

目的合成生物素化壳聚糖并对其结构进行表征。方法以壳聚糖为基本原料,以4-二甲基氨基吡啶、二环己基碳酰胺为催化剂将壳聚糖的氨基上引入生物素,经透析精制,冷冻干燥后得到新的靶向载体材料-生物素化壳聚糖。采用傅里叶变换红外光谱(FT... 详细信息

目的合成生物素化壳聚糖并对其结构进行表征。方法以壳聚糖为基本原料,以4-二甲基氨基吡啶、二环己基碳酰胺为催化剂将壳聚糖的氨基上引入生物素,经透析精制,冷冻干燥后得到新的靶向载体材料-生物素化壳聚糖。采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、核磁共振氢谱(1HNMR)和差示扫描量热法(DSC)对产物进行结构表征。结果精制后得到的白色粉末状固体生物素化壳聚糖材料,其结构与各单体的FTIR1、HNMR、DSC出现了明显的差别。产品收率为14.95%,其生物素的取代度约为48.28%。结论生物素与壳聚糖成功地以酰胺键连接在一起,合成了生物素化壳聚糖。该方法合成工艺简单,生产成本低。

关键词：生物素化壳聚糖合成表征靶向载体材料

生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物的制备

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 78-81页

作者：卢小玲吴雄文翁秀芳李青梁智辉龚非力华中科技大学同济医学院免疫学系武汉430030

目的制备生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物。方法将原核高效表达的sHLA-A*2402-BSP融合蛋白及β2m和HLA-A*2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行稀释、复性、折叠,形成HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,并在Bir... 详细信息

目的制备生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物。方法将原核高效表达的sHLA-A*2402-BSP融合蛋白及β2m和HLA-A*2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行稀释、复性、折叠,形成HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,并在BirA酶作用下进行生物素化,使生物素结合到HLA-A*2402-抗原肽复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的sHLA-A*2402-抗原肽复合物单体。利用特异性单克隆克体(W6/32和兔抗人2β微球蛋白抗体)及链霉亲合素进行ELISA和Western blot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果折叠复合物中,主要含有HLA-A*2402-肽复合物单体及β2m两种成分,其中HLA-A*2402-肽复合物单体可生物素化。结论成功制备出生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础。

关键词： HLA—A*2402-抗原肽复合物生物素化 BirA酶

基于生物素化纳米抗体检测拟除虫菊酯代谢物3-苯氧基苯甲酸的研究

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分析测试学报 2021年第10期40卷 1425-1431页

作者：张译丰郭城钎柳彬沈玉栋王弘陈子键罗林徐振林广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广东广州510640 中国生物兰州生物制品研究有限责任公司甘肃兰州730046 福建省东山海关综合技术服务中心福建漳州363400

该研究在前期已制备获得的拟除虫菊酯代谢物3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)纳米抗体(Nb)基础上,将其进行生物素化,并利用多聚辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(polyHRP-SA)进行信号扩增,建立了基于生物素-亲和素系统高灵敏间接竞争ELISA检测3-PB... 详细信息

该研究在前期已制备获得的拟除虫菊酯代谢物3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)纳米抗体(Nb)基础上,将其进行生物素化,并利用多聚辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(polyHRP-SA)进行信号扩增,建立了基于生物素-亲和素系统高灵敏间接竞争ELISA检测3-PBA残留的分析方法。对抗原抗体工作浓度、缓冲液条件(pH值、离子浓度、吐温-20浓度)及polyHRP-SA浓度进行优化后,所建方法对3-PBA的半抑制浓度(IC_(50))为1.7 ng/mL,线性范围为0.37~7.4 ng/mL,检出限(LOD)为0.15 ng/mL。将该方法用于人尿样品(高温酸水解后固相萃取净化)和环境水样品(简单过滤)中3-PBA的检测,加标回收率分别为87.0%~127%和78.0%~113%,相对标准偏差(RSD)不大于10%。该方法具有灵敏度高、操作简便,适用于生物与环境样本中3-PBA的快速筛查。

关键词： 3-苯氧基苯甲酸(3-PBA) 拟除虫菊酯纳米抗体(Nb) 生物素化信号放大

可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第3期20卷 265-268页

作者：翁秀芳陈浩吴雄文梁智辉韩军艳黄亚非龚非力华中科技大学同济医学院免疫学系湖北武汉430030

目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作... 详细信息

目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA

关键词： HLA—A2-抗原肽复合物生物素化 BirA酶

生物素化聚N-异丙基丙烯酰胺的合成与性能研究

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生物素化聚N-异丙基丙烯酰胺的合成与性能研究

作者：单婷婷长春理工大学

学位级别：硕士

本论文采用了酰胺化和酯化的化学改性方法,制成了羟基生物素(Biotin-OH)和生物素引发剂(Biotin-Cl)、在40℃下,以CuCl/Me6TREN为催化体系,DMF:H2O=1:1(v/v)的混合溶液为溶剂体系,通过原子转移自由基聚合法(ATRP)引发N-异丙基丙烯酰胺单... 详细信息

本论文采用了酰胺化和酯化的化学改性方法,制成了羟基生物素(Biotin-OH)和生物素引发剂(Biotin-Cl)、在40℃下,以CuCl/Me6TREN为催化体系,DMF:H2O=1:1(v/v)的混合溶液为溶剂体系,通过原子转移自由基聚合法(ATRP)引发N-异丙基丙烯酰胺单体聚合,合成出生物素化聚N-异丙基丙烯酰胺(Biotin-PNIPAM)。在此基础上,分别与三氯化铕(EuCl3)和配体α-噻吩甲酰三氟丙酮(TTA)进行配合反应,制备出Biotin-PNIPAM/Eu(Ⅲ)和Biotin-PNIPAM/Eu(Ⅲ)-TTA高分子配合物体系。并对产物进行了结构表征与性能研究,结果显示：合成的Biotin-PNIPAM聚合物分子量具有良好的可控性,PDI值介于1.06-1.11范围内。温敏特性随聚合物的分子量的增大(Mn=4240-9700)呈负增长趋势(LCST=35.6℃～33℃),与聚N-异丙基丙烯酰胺均聚物的LCST (32℃)相比有不同程度的提高。Biotin-PNIPAM/Eu(Ⅲ)和Biotin-PNIPAM/Eu(Ⅲ)-TTA配合物也同样具有灵敏的温敏特性,较Biotin-PNIPAM聚合物的LCST有着微小的升高。两种高分子配合物与EuCl3相比较,荧光强度分别提高了89%和1407%。聚合物Biotin-PNIPAM和配合物Biotin-PNIPAM/Eu(Ⅲ)在生物体内具有良好的生物相容性,在生物医药领域有很好的应用潜力。

关键词：聚N-异丙基丙烯酰胺荧光生物素化温度响应特性

HCV核心抗原N-端片段生物素化表达质粒的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2009年第10期22卷 949-952页

作者：雷明军买制刚陈少娟黄德兴林枫李凌云深圳大学生化工程技术研究中心广东深圳518057

目的构建HCV核心(C)抗原N-端1～130aa片段的生物素化表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达。方法PCR扩增HCV C抗原N-端1～130aa片段的编码基因,拼接上生物素-蛋白连接酶底物肽序列(BSP),构建重组原核表达质粒pGEX4T-1-CN130BSP,转化大肠杆菌... 详细信息

目的构建HCV核心(C)抗原N-端1～130aa片段的生物素化表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达。方法PCR扩增HCV C抗原N-端1～130aa片段的编码基因,拼接上生物素-蛋白连接酶底物肽序列(BSP),构建重组原核表达质粒pGEX4T-1-CN130BSP,转化大肠杆菌Rosetta,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE后,电转至硝酸纤维素膜上,以抗HCVC抗原的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素对表达产物进行分析。结果PCR扩增出约466bp的目的基因片段;质粒pGEX4T-1-CN130BSP经PCR及双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定基因无突变;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为42000,22℃诱导16h可溶性表达产物含量较高;表达的重组蛋白可被抗HCV C抗原的单克隆抗体所识别,并能特异性结合辣根过氧化物酶标记的亲和素。结论已成功构建了HCV C抗原N-端1～130aa片段生物素化表达质粒,并表达出带生物素标签的GST融合蛋白,为进一步研制HCV双抗原夹心检测试剂奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒核心抗原 N-端片段生物素化原核表达