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作者：潘志霖上海海洋大学

学位级别：硕士

胶原蛋白是动物体内含量最丰富的纤维状结构蛋白,广泛存在于生物组织的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中,是其关键结构纤维蛋白。目前,已经确定和描述了28种胶原蛋白。其中,Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,CⅡ)是关节软骨ECM的主... 详细信息

胶原蛋白是动物体内含量最丰富的纤维状结构蛋白,广泛存在于生物组织的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中,是其关键结构纤维蛋白。目前,已经确定和描述了28种胶原蛋白。其中,Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,CⅡ)是关节软骨ECM的主要成分,占软骨总蛋白含量的90–95%。已有诸多研究证实了CⅡ在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗方面拥有巨大的潜能。目前,CⅡ的生化特性、分子结构、构效关系和生物功效等研究日益受到重视,而国内外针对海洋大型鱼类CⅡ的研究相对较少。大青鲨(Prionace glauca)是延绳钓渔业和刺网渔业的主要兼捕对象,它的鱼翅和鱼肉是传统的海产品。在鲨鱼加工过程中会产生皮肤、软骨等副产物。因此,本研究以大青鲨软骨为原料提取CⅡ,对其生物化学特性进行了表征,并研究了大青鲨Ⅱ型胶原蛋白(blue shark typeⅡcollagen,BSCⅡ)对人CD4T细胞的作用。第1章介绍了RA中CⅡ矛盾的双重作用和胶原蛋白与T细胞的相互作用。同时,阐述了本研究的立题依据。第2章介绍了BSCⅡ的制备方法。采用胃蛋白酶限制性酸水解法从大青鲨软骨中分离出胶原蛋白,产量(干重)约为每公斤软骨70.80–83.00 g(7.69%±0.61%)。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对其蛋白质模式进行鉴定。根据电泳图谱可以判断从大青鲨软骨中分离出的胶原蛋白为CⅡ,构型为[α(Ⅱ)],α链的分子量约为140k Da。同时电泳图谱上无其他条带,证明提取的蛋白达到了电泳纯。第3章研究了BSCⅡ的生物化学特性。通过苯酚-硫酸法测定了BSCⅡ的总糖含量,结果表明其总糖含量为(4.20±0.03)%。分别通过扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)和原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)观察了BSCⅡ固体和溶液的微观结构,结果显示其均具有胶原蛋白典型的纤维状结构。通过氨基酸分析仪和超高效液相色谱串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)分析了BSCⅡ的氨基酸组成,结果显示其甘氨酸(Gly)含量最高,约占总氨基酸含量的35.38%,同时谷氨酸(Glu)、丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)和羟脯氨酸(Hyp)的含量相对较高,甲硫氨酸(Met)、异亮氨酸(Ile)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)和组氨酸(His)的含量相对较低,未检测到色氨酸(Trp)和半胱氨酸(Cys)。BSCⅡ的紫外光谱扫描结果表明其在223 nm处有紫外最大吸收峰。BSCⅡ的傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared,FTIR)光谱扫描结果显示其最主要的吸收峰在酰胺带处,包括酰胺A(3304cm)、酰胺B(2938 cm)、酰胺Ⅰ(1633 cm)、酰胺Ⅱ(1547 cm)和酰胺Ⅲ(1238cm)。对其酰胺Ⅰ带吸收峰进一步分析后可知BSCⅡ含有26.98%的β-折叠,35.60%的β-转角,37.41%无规则卷曲,不含α-螺旋。BSCⅡ的圆二色光谱(circular dichroism,CD)和X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)结果表明BSCⅡ具有完整的三螺旋结构。通过流变仪和差示扫描量热仪(differential scanning calorimetry,DSC)对BSCⅡ的热稳定性进行分析,结果表明其变性温度为42℃,熔融温度为49℃。第4章探究了BSCⅡ对人CD4T细胞的作用。分别使用iFluor350succinimidyl ester染料和Cell Mask Green plasma membrane stain对BSCⅡ和人CD4T细胞进行了荧光标记,再通过荧光倒置显微镜观察二者的结合情况。结果表明,二者可以发生结合。接着,通过CCK-8法检测了BSCⅡ对人CD4T细胞生长活性的影响,结果表明BSCⅡ不会促进人CD4T细胞的增殖,也不具有细胞毒性。最后,通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质免疫印迹(Western Blotting,WB)等方法检测了细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果表明,BSCⅡ可以显著上调凋亡相关因子Fas(/CD95)的表达,浓度为10μg/m L时效果最明显,进而激活了Fas介导的细胞凋亡通路,使人CD4T细胞发生僵化,导致了免疫耐受的产生。第5章对本研究得到的结果进行了总结,并对值得进一步研究的方向做出了展望。

关键词：大青鲨(Prionace glauca)软骨 Ⅱ型胶原蛋白生物化学特性人CD4+T细胞口服免疫耐受

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硝酸钙对深圳河底泥臭味及生物化学特性的影响

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哈尔滨工业大学学报 2013年第6期45卷 107-113页

作者：陈磊王凌云刘树娟张锡辉胡江泳陶益清华大学深圳研究生院环境工程与管理研究中心广东深圳518055 新加坡国立大学环境科学与工程部新加坡119260

为确定合适的硝酸钙剂量,研究了硝酸钙对底泥酸挥发性硫化物(AVS)的控制效果以及底泥总有机碳(TOC)、氧化还原电位(ORP)、pH、含水率、氨氮和生物活性等的变化趋势.结果表明:湿泥硝氮投加量达1.27 g/kg,AVS的去除率在第14天可达97%,其... 详细信息

为确定合适的硝酸钙剂量,研究了硝酸钙对底泥酸挥发性硫化物(AVS)的控制效果以及底泥总有机碳(TOC)、氧化还原电位(ORP)、pH、含水率、氨氮和生物活性等的变化趋势.结果表明:湿泥硝氮投加量达1.27 g/kg,AVS的去除率在第14天可达97%,其投加量的增加不影响AVS的去除效率,但更高的投加量会使处理效果保持更长的时间;硝氮投加量达1.58 g/kg,底泥ORP可升高至-100 mV;硝氮投加量达2.53 g/kg,底泥pH显著降低;硝酸钙会引起底泥氨氮质量分数增加,降低底泥微生物活性.适宜的硝氮范围为1.58～2.22 g/kg(0.70～0.98 g/g S).

关键词：硝酸钙酸挥发性硫化物生物化学特性底泥臭味

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除草剂苄嘧磺隆对稻田土壤微生物活性和生物化学特性的影响

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中国水稻科学 2004年第1期18卷 67-72页

作者：谢晓梅廖敏黄昌勇刘维屏浙江大学环境与资源学院资源科学系浙江杭州310029 浙江大学环境与资源学院环境科学系浙江杭州310029

在室内培养试验条件下 ,研究了不同剂量苄嘧磺隆 (0～ 75 0g/hm2 )对淹水稻田土壤中微生物活性和生物化学特性的影响。结果表明 ,所有处理中土壤微生物生物量 (磷脂含量 )随培养期延长而缓慢减少 ,与对照相比 ,土壤微生物生物量 (磷脂含... 详细信息

在室内培养试验条件下 ,研究了不同剂量苄嘧磺隆 (0～ 75 0g/hm2 )对淹水稻田土壤中微生物活性和生物化学特性的影响。结果表明 ,所有处理中土壤微生物生物量 (磷脂含量 )随培养期延长而缓慢减少 ,与对照相比 ,土壤微生物生物量 (磷脂含量 )随苄嘧磺隆增加而有所减少。所有处理中异养型细菌 (富营养菌和贫营养菌 )随培养期延长持续减少 ,与对照相比土壤中异养型细菌随苄嘧磺隆剂量增加而快速减少 ,尤其是苄嘧磺隆剂量较大 (375和 75 0 g/hm2 )的土壤中异养型细菌显著减少。土壤电子运输系统 /脱氢酶活度在第 1周内随培养时间延长持续下降 ,之后随培养时间延长而增强。与对照相比 ,土壤电子运输系统活度也随除草剂苄嘧磺隆施用剂量的升高而下降。第 1周内土壤酚含量随培养时间延长持续增加 ,之后随培养时间延长而减少。与对照相比 ,土壤酚含量随苄嘧磺隆施用剂量的增加而快速增加 ,尤其是苄嘧磺隆剂量较大(375和 75 0 g/hm2 )的土壤中酚含量显著增加。在所有处理中 ,土壤中蛋白质含量随培养时间的延长缓慢减少 ,但不显著。土壤蛋白质含量随除草剂苄嘧磺隆剂量增加而略微增加 ,但不显著。

关键词：除草剂土壤微生物活性生物化学特性水稻土

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芒萁吸收Cu、Au元素的特征及其生物化学特性变化

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地球化学 2017年第5期46卷 488-496页

作者：韦雪姬宋慈安周思裕雷良奇广西壮族自治区地球物理勘察院广西柳州545005 广西隐伏金属矿产勘查重点实验室广西桂林541004 桂林理工大学地球科学学院广西桂林541006 广西壮族自治区二七〇地质队广西柳州545001

通过人工移植栽培芒萁的模拟试验,研究在不同高Cu、Au浓度土壤中生长的芒萁吸收聚集Cu、Au元素的特征并测试其生物化学特性的变化。研究发现:(1)随着栽培土壤中Cu、Au含量的增大,芒萁吸收的Cu、Au含量增高,明显高出对照组许多倍。(2)芒... 详细信息

通过人工移植栽培芒萁的模拟试验,研究在不同高Cu、Au浓度土壤中生长的芒萁吸收聚集Cu、Au元素的特征并测试其生物化学特性的变化。研究发现:(1)随着栽培土壤中Cu、Au含量的增大,芒萁吸收的Cu、Au含量增高,明显高出对照组许多倍。(2)芒萁对Cu的吸收属于弱吸收型和半无障型,对Au的吸收属于属强吸收型和无障型。(3)随着芒萁吸收Cu、Au含量的增高,芒萁叶叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素的含量呈下降的趋势,而细胞的质膜透性及膜脂过氧化的产物丙二醛(MDA)含量呈增大的趋势,表明Cu、Au胁迫对芒萁细胞造成了一定程度的损害。(4)随着芒萁吸收Cu、Au含量的增高,其体内SOD、POD和CAT的活性不同程度地增大,表明抗氧化防御系统对减少芒萁细胞的损害起到了重要作用。

关键词：吸收特征生物化学特性铜金芒萁测试栽培试验

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中国对虾酚氧化酶的部分生物化学特性的初步研究

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海洋科学 2003年第4期27卷 71-75页

作者：汪小锋樊廷俊青岛海洋大学海洋生命学院海洋生物系青岛266003

以海捕中国对虾 (Penacuschinensis)为材料 ,运用离心、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析的方法从对虾血淋巴中部分纯化出酚氧化酶。实验又以L DOPA为底物 ,分析各种因子对其活力的影响。结果显示酚氧化酶的最适 pH值约为6.0,最适温度为4... 详细信息

以海捕中国对虾 (Penacuschinensis)为材料 ,运用离心、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析的方法从对虾血淋巴中部分纯化出酚氧化酶。实验又以L DOPA为底物 ,分析各种因子对其活力的影响。结果显示酚氧化酶的最适 pH值约为6.0,最适温度为40℃ ,Cu2 +能强烈抑制酚氧化酶的活性 ,而Mg2 + 则能促进其活性。

关键词：中国对虾酚氧化酶生物化学特性金属酶酶活性

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脂蛋白(a)的生物化学特性和临床意义

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临床检验杂志 1990年第1期8卷 42-43页

作者：许平汪俊军南京军区总医院生化科南京210002

高脂血症是目前评价动脉粥样硬化病变发展的主要因子,焦点集中在低密度和高密度脂蛋白(LD L、HDL).近年来,对脂蛋白(a)〔Lp(a)〕又重新关注起来.在1989年有关Lp(a)的国际学术会议上全部发言者同意高Lp(a)浓度是冠心病的独立危险因素.脂... 详细信息

高脂血症是目前评价动脉粥样硬化病变发展的主要因子,焦点集中在低密度和高密度脂蛋白(LD L、HDL).近年来,对脂蛋白(a)〔Lp(a)〕又重新关注起来.在1989年有关Lp(a)的国际学术会议上全部发言者同意高Lp(a)浓度是冠心病的独立危险因素.脂质研究人员预测,Lp(a)将成为今后5～10年间脂质研究的常规内容.ALbers 等指出Lp(a)与apOA_Ⅰ。

关键词：脂蛋白(a) 生物化学特性检测方法

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四种红曲菌各自固有的分子生物学和生物化学特性

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微生物学杂志 2007年第1期27卷 69-71页

作者：郭芳李钟庆中国科学院微生物研究所菌种保藏中心北京100080

对白色红曲菌、火红色红曲菌、烟灰色红曲菌和橙色红曲菌各自固有的核糖体内转录间隔区(ITS)rDNA序列和生物化学特性进行了研究。rDNA ITS测序结果显示,橙色红曲菌与火红色红曲菌相同,而白色红曲菌与灰色红曲菌相同,这两组经序列比对仅... 详细信息

对白色红曲菌、火红色红曲菌、烟灰色红曲菌和橙色红曲菌各自固有的核糖体内转录间隔区(ITS)rDNA序列和生物化学特性进行了研究。rDNA ITS测序结果显示,橙色红曲菌与火红色红曲菌相同,而白色红曲菌与灰色红曲菌相同,这两组经序列比对仅有2个碱基不同。从生物化学特性来看,作为分类指标,似乎有物种属(genus)的共性也有个体(株)质的差异或量的差异。

关键词：分子生物学特性 ITS序列生物化学特性

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半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的生物化学特性及其临床意义

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北京医学 2002年第2期24卷 126-128页

作者：齐志宏北京邮电总医院检验科 100032

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)为120个氨基酸序列的低分子量(13 359)蛋白。人体所有的核细胞都能持续地产生Cystatin C。肾脏是 Cystatin C的主要分解代射器官。由于Cystatin C的低分子量及正常pH的阳电荷，使其能自由地通过肾小... 详细信息

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)为120个氨基酸序列的低分子量(13 359)蛋白。人体所有的核细胞都能持续地产生Cystatin C。肾脏是 Cystatin C的主要分解代射器官。由于Cystatin C的低分子量及正常pH的阳电荷，使其能自由地通过肾小球滤过，几乎完全被肾小管重吸收，并且在肾近曲小管代谢分解。事实上，Cystatin C完全通过肾小球膜滤过，几乎没有明显的肾小分泌。因此，各组织细胞持续产生的Cystatin C由肾小球滤过决定，而不依赖任何外在的因素，如性别、年龄、饮食和炎症等的影响。所以，Cystatin是肾小球滤过潜在的、理想的生化标物。目前，可以采用酶联免疫吸附法(ELISA)、粒子增强比浊法(particle-enhanced turbidimetry)及免疫比浊法(immunotur-bidimetric assay)等免疫方法测定Cystatin C。这些方法准确、快速、适用于临床常规检测。随着生物化学界对Cystatin C生化特性的了解及临床检验水平的提高，已证实Cystatin C与许多肾脏和非肾脏疾病有关。

关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂C 生物化学特性临床意义肾疾病非胰岛素依赖型糖尿病诊断

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蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白生物化学特性和免疫耐受特性的研究

蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白生物化学特性和免疫耐受特性的研究

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作者：宋瑞瑞上海海洋大学

学位级别：硕士

海洋生物Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen，CⅡ)是海洋生物软骨组织的主要构成蛋白，其与皮肤或骨骼中存在的Ⅰ型胶原蛋白在氨基酸构成以及空间结构上有明显的不同，并且结合有Ⅰ型胶原蛋白不存在的构成糖。类风湿性关节炎(rheumatoid ar... 详细信息

海洋生物Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen，CⅡ)是海洋生物软骨组织的主要构成蛋白，其与皮肤或骨骼中存在的Ⅰ型胶原蛋白在氨基酸构成以及空间结构上有明显的不同，并且结合有Ⅰ型胶原蛋白不存在的构成糖。类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种病因尚未明了的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，属于自身免疫性疾病。它以关节和滑膜的炎症及软骨和骨的进行性破坏为特征，致残率高。已经有资料显示，鸡或牛的CⅡ通过口服免疫耐受作用达到治疗RA的作用。为此，我们深入探讨了海洋生物来源的CⅡ在治疗RA方面的特性，丰富了CⅡ在其应用领域的功能作用，填补了海洋生物CⅡ的研究空白。第一章从口服免疫耐受对RA的治疗作用和CⅡ在大鼠RA模型中的自我免疫作用两个方面简要介绍了CⅡ在RA治疗中的应用。第二章介绍了CⅡ的分离纯化，分离CⅡ的实验材料是新鲜的蓝鲨(Prionaceglauca)软骨，采用胃蛋白限制性酶解分离法。SDS-PAGE上显示蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白(SCⅡ)是由分子量为130kDa的α1链构成，另外，图谱上无其他杂带，说明提取得到的SCⅡ达到了电泳纯。对SCⅡ常见氨基酸和羟脯氨酸的比例和含量进行了检测。结果表明SCⅡ的甘氨酸残基占氨基酸残基总数的30%以上，并且富含丙氨酸残基和脯氨酸残基，分别占氨基酸残基总量的10.4%和8.8%，由制作的标准曲线推算出SCⅡ羟脯氨酸的含量为7.09%，另外，氨基酸分析过程中并无酪氨酸和色氨酸检出。第三章深入分析了SCⅡ一系列的生物化学特性。分别通过差示扫描量热法、圆二色谱法、紫外扫描法和红外光谱法分析了SCⅡ的热变性温度、二级结构特征、紫外吸收特性和红外光谱特征。差示扫描量热仪的检测结果显示SCⅡ的热变性温度为40.5℃，并通过实验证明了盐浓度和氢离子浓度对其热变性温度有着重要的影响。采用圆二色光谱研究SCⅡ的二级结构特征，计算出了SCⅡ二级结构的组成和比例，并深入探讨了氢离子浓度和保温时间对SCⅡ二级结构组成和比例的影响，发现这二者对SCⅡ的二级结构有着极大的影响。紫外扫描法显示，SCⅡ在260nm处有最大的紫外吸收。红外光谱实验结果显示SCⅡ最主要的吸收带在酰胺带处，包括酰胺Ⅰ(1649-1658cm)、酰胺Ⅱ(1551-1557cm)、酰胺Ⅲ(1239-1245cm)、酰胺A(3407-3425cm)和酰胺B(2932-2961cm)。第四章介绍了在碱性条件下将FITC标记到SCⅡ上，获得了FITC-SCⅡ复合物，并通过SDS-PAGE对标记结果进行验证。荧光及白光成像相结果相对比后发现，FITC成功的标记到了SCⅡ上，且荧光成像结果表明复合物荧光强度较强，说明FITC-SCⅡ复合物结合牢固，性质稳定。第五章介绍的是SCⅡ对CD8+T细胞生长状况的影响。我们将结合成功的FITC-SCⅡ复合物用细胞培养液配制成11.1μg/mL，5.56μg/mL，3.33μg/mL和1.11μg/mL四个浓度梯度，与CD8+T细胞在37℃，5%CO2恒温培养箱中培养24h，培养结束后于荧光倒置显微镜下拍照。结果显示，FITC-SCⅡ复合物与CD8+T细胞表面的特异性受体发生了特异性结合。随后我们又探讨了SCⅡ与CD8+T细胞表面的受体发生特异性结合后对细胞活性和功能的影响，发现CⅡ作为一种营养物质促进了CD8+T细胞的生长，但它同时也可令CD8+T细胞发生僵化作用，激活CD8+T抗原受体信号转导下游通路，产生较多的细胞凋亡因子Fas。第六章通过建立动物模型来验证口服CⅡ产生免疫耐受治疗RA的效果，并探讨其治疗机理。首先，我们按照1mg/Kg/d和3mg/Kg/d的剂量对大鼠灌服CⅡ，并设置空白组、阴性对照组(灌服TWP)和阳性对照组(灌服乙酸)，连续灌胃15天后，用0.1ml完全弗氏佐剂(CFA)于实验组右后足垫处注射致炎，在随后的30天内通过大鼠的临床症状表现来评价关节炎指标，最后将大鼠处死取静脉血，ELISA法检测其血清中抗CⅡ抗体、IL-10、IFN-γ和TNF-α四个因素的含量水平。结果表明，经口灌服CⅡ后可以使大鼠产生免疫耐受并能显著改善关节炎进程，降低其炎症性指标。

关键词： Ⅱ型胶原蛋白生物化学特性类风湿性关节炎免疫耐受

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不同柑桔类水果的某些生物化学特性比较

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热带农业工程 2002年第3期27卷 39-39页

作者：卢光

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