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左归丸促初老大鼠生殖器官血管生成与EPCs促动员因素GM-CSF、SDF-1及其受体关系的研究

中国中药杂志 2023年第16期48卷 4467-4474页

作者：宋谦谦段恒彭万春魏小晶重庆医科大学中医药学院中医药防治代谢性疾病重庆市重点实验室重庆400016

该实验旨在研究左归丸促进初老大鼠生殖器官卵巢、阴道血管生成与内皮祖细胞(EPCs)促动员因素粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体的关系,探讨左归丸改善初老大鼠生殖功能低下的作用机制。采用超高效... 详细信息

该实验旨在研究左归丸促进初老大鼠生殖器官卵巢、阴道血管生成与内皮祖细胞(EPCs)促动员因素粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体的关系,探讨左归丸改善初老大鼠生殖功能低下的作用机制。采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)对左归丸浸膏进行中药化学成分分析。然后选用14月龄动情周期紊乱的雌性初老大鼠40只,随机分为初老空白组、结合雌激素组、左归丸低剂量组、左归丸高剂量组,每组各10只;另外选用10只4月龄雌性大鼠作为青年对照组。初老空白组和青年对照组均用20 g·kg-1蒸馏水灌胃,结合雌激素组用65μg·kg-1结合雌激素悬液进行灌胃,低剂量组用11g·kg-1左归丸浸膏灌胃,高剂量组用33 g·kg-1左归丸浸膏进行灌胃,每日1次,连续灌胃15 d。收集各组大鼠血清,用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中促EPCs动员因素SDF-1、GM-CSF水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察卵巢各级卵泡数目、黄体数目、阴道上皮层数、阴道皱襞数以及卵巢、阴道组织血管等在用药组的变化;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测卵巢、阴道组织雌激素受体(ER)、粒-巨噬细胞集落刺激因子受体(GM-CSFR)、趋化因子受体(CXCR)4、CXCR7蛋白表达水平。结果发现,初老空白组大鼠黄体数、各级生长卵泡数和血管数减少(P血管数明显减少(P血管数目明显增加(P血管数增加(P血管生成,改善初老大鼠生殖功能。

关键词：左归丸生殖器官血管生成内皮祖细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子基质细胞衍生因子-1

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基于SDF-1/CXCR4/CXCR7信号轴探讨左归丸促血管生成改善初老大鼠生殖功能的作用机制

基于SDF-1/CXCR4/CXCR7信号轴探讨左归丸促血管生成改善初老大鼠...

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作者：宋谦谦重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨补肾复方左归丸促进初老大鼠生殖器官血管生成与EPCs促动员因素GM-CSF、SDF-1及其受体的关系,探讨左归丸改善初老大鼠生殖功能低下的主要作用机理;观察不同浓度左归丸含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导衰老的大鼠骨髓源内皮祖细胞增... 详细信息

目的:探讨补肾复方左归丸促进初老大鼠生殖器官血管生成与EPCs促动员因素GM-CSF、SDF-1及其受体的关系,探讨左归丸改善初老大鼠生殖功能低下的主要作用机理;观察不同浓度左归丸含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导衰老的大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖、迁移和血管生成的影响及其与SDF-1/CXCR4/CXCR7信号轴的关系。方法:1.采用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）方法对左归丸进行中药化学成分分析。2.14月龄的雌性大鼠40只,随机分为初老空白组、结合雌激素组、左归丸浸膏低剂量组、左归丸浸膏高剂量组,每一组10只;再用10只4月龄雌性大鼠作为青年对照组。初老空白组大鼠和青年对照组大鼠均按20 g·kg灌胃蒸馏水,结合雌激素组按照65 ug·kg灌胃结合雌激素悬液,11 g·kg组按照11g·kg左归丸浸膏灌胃,33g·kg剂量组按照33 g·kg左归丸浸膏进行灌胃,每天一次,连续灌胃15天。收集各组大鼠血清,ELISA法检测血清中SDF-1、粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）水平;苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察卵巢各级卵泡数目、黄体数目、阴道上皮层数、阴道皱襞数以及卵巢、阴道组织血管等在用药组的变化;Western blot法检测卵巢、阴道组织ER、GM-CSFR、CXCR4、CXCR7蛋白表达水平。3.将SPF级4周龄的SD雌鼠随机地分为两组:左归丸含药血清组和空白组。灌胃之后制备含药血清。将分离出来的EPCs,分为空白组、空白血清组和含药血清组（5%含药血清组、10%含药血清组、15%含药血清组）;用血管紧张素II诱导EPCs衰老;β-半乳糖苷酶、CCK-8实验、Transwell、小管形成实验各组EPCs的衰老、增殖迁移,管腔形成情况;酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测各个细胞实验组上清液中的基质细胞衍生因子1（stromal cell-derived factor 1,SDF-1）水平。蛋白免疫印迹（Western blot）和QPCR法分别检测各组细胞中CXCR4、CXCR7的蛋白和m RNA的表达水平。结果:1.在左归丸中鉴定出74个化合物,包括黄酮类9种、萜类11种、酚类6种、有机酸类9种、糖苷类6种以及其他类化合物。2.初老空白组大鼠黄体数目、各级生长卵泡数目和血管数目减少（P血管数明显减少（P血管数目明显增加（P血管数增加（P血管生成,改善初老大鼠生殖功能。2.左归丸可能通过上调EPCs促动员因素GM-CSF及其受体水平促进卵巢、阴道血管生成,改善初老大鼠生殖功能。

关键词：左归丸生殖器官血管生成内皮祖细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子基质细胞衍生因子1

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